Диссертация (1140795), страница 6

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 6)

Изданных Лебеденко В.С. известно, что при патологическом течениибеременности,осложненнойгестозом,происходитсущественноеинекомпенсированное увеличение уровня продуктов, ПОЛ и свободныхжирных кислот, а также снижение активности глутатионредуктазы в плазмекрови и эритроцитов [152]. Рядом авторов выявлено значимое повышениеобщей оксидантной и снижение антиоксидантной активности в плазмебеременныхспрекэклампсиейпосравнениюсфизиологическойбеременностью [150, 153].Оксидативный стресс может оказывать деструктивное воздействие наклеточные структуры плаценты. По результатам исследования проведенногоКузьминых Т.У, Абрамченко В.В. при изучении тканей последа былоустановлено,чтоприосложненномтечениибеременности(угрозапрерывания, гестоз, урогенитальная инфекция) имеются выраженныеморфологическиеизменениявтканяхпоследа,заключающиесявповреждении биомембран и изменении иммунного гомеостаза.

Припреждевременномпрерываниибеременностиотмеченоусилениеинтенсивности процессов свободнорадикальных процессов, связанное сотложением патогенных иммунных комплексов в тканях последа. По даннымПрокопенко В.М. спонтанное преждевременное прерывание беременностипроисходит в условиях развития окислительного стресса в митохондриях ипостмитохондриальной фракции периферийного участка плаценты, где нафонеповышенияуровняинтенсивностипроцессовпероксидациинаблюдается недостаточное увеличение общей емкости антиоксидантной31защитыиослаблениевнезависимостиотлокализацииееглутатионзависимого звена [154].Влитературеантиоксидантногоимеютсястатусаимногочисленныеэффективностиданныеотносительнопримененияразличныхантиоксидантов при осложненной беременности.

Так, по данным Zachara BA,Wasowicz W у женщин с привычным невынашиванием беременностиимелось значительное снижение концентрации селена и активностиглутатионпероксидазы в эритроцитах и плазме крови по сравнению снебеременными женщинами [155]. Рядом исследователей [156, 157]установлено, что у женщин с ПНБ имелось снижение в сыворотке кровитаких антиоксидантов как витамин А и Е, β-каротин, билирубин. Кроме того,у женщин был отмечен повышенный уровень ПОЛ и глутатиона.Акушерская патология сопровождается изменением баланса междупроцессамисвободнорадикальногоокисленияиантиоксидантнойактивностью, проявляющимся увеличением интенсивности пероксидации нафоне снижения уровня антиоксидантов в системе мать-плацента-плод [99].В связи с вышеизложенным, рассмотрение вопросов, связанных сролью свободнорадикальных процессов при невынашивании беременности, атакже определение места антиоксидантной терапии в лечении даннойпатологии представляет научный и практический интерес.32Глава 2.

Материалы и методы2.1 Характеристика и критерии отбора пациентовДля решения поставленных задач было выполнено комплексноеклинико-лабораторное обследование 125 пациентов. Из них 28 беременных сугрозой прерывания (УПБ), из которых у 19 был установлен диагнозпривычное невынашивание, 9 женщин с неразвивающейся беременностью(НБ).

Группу контроля 1 (К1) составили 61 женщина с физиологическимтечением беременности. Группа контроля 2 (К2) — 22 небеременныеженщины, 5 женщин после самопроизвольного выкидыша до 22 нед. (К3).Критерии включения пациентов в исследование:1. Возраст от 18 лет.2. Пол-женский3. Давность выкидыша для группы К3 не более 48 часов4. Желание и способность пациента принять участие в исследовании ивыполнять требования исследования.5. Наличие подписанной формы информированного согласия научастие в исследовании.Критерии исключения:1.

Маточная патология (пороки развития матки, миома матки и т.д.)2. Острые инфекционные и воспалительные заболевания.3. Отказ подписывать добровольное информированное согласие.Все участники исследования за время наблюдения прошли клиниколабораторное и инструментальное обследование, включавшее: Сбор жалоб. Анамнестическиегемотрансфузии,перенесенныеданные:трудовой,наследственность,аллергоанамнез,эпидемиологическийзаболевания,оперативные33анамнез,вмешательства,менструальная,репродуктивнаяфункции,гинекологическиезаболевания, количество и исход предыдущих беременностей. -Объективный осмотр: антропометрические показатели, телосложение,состояние кожных покровов и слизистых оболочек, состояниедыхательной, сердечно-сосудистой, пищеварительной и мочеполовойсистем. Гинекологический осмотр: оценка состояния наружных половыхорганов, состояние слизистой влагалища, шейки матки, определениеположения,размеров,консистенции,болезненностиматкиипридатков, оценка характера выделений из половых путей и др Общеклиническиеметодыисследования:клиническийибиохимический анализы крови, общий анализ мочи, исследованиесистемы гемостаза, электрокардиография, обследование на ВИЧ,гепатиты В и С, антитела к бактериоскопическое исследование мазковиз влагалища. Ультразвуковое исследование.

При ультразвуковом исследованииопределяли:наличиежизнеспособностьплодногоэмбриона,яйцавсоответствиеполостиматки,размеровматкигестационному сроку, характер имплантации, наличие патологическихобразований в шейке матки, матке и придатках. Ультразвуковоесканирование проводили при помощи аппарата «Toshiba Xario 200»(Япония) с использованием трансабдоминальных и эндовагинальныхконвексных датчиков частоты 3,5 и 10 МГц. Методикиопределенияфункциональнойметодомоксидативногоактивностихемилюминесценциинейтрофильногосдвойнойстресса:звенаоценкалейкоцитовпоследовательнойстимуляцией; определение антиоксидантной активности плазмы кровиметодомкинетическойхемилюминесценциивмодификации,основанной на регистрации и обработке полной кривой развития ХЛ34вовремени;математическийанализкинетическойкривойхемилюминесценции с помощью программного модуля на базеплатформыLabViewокислительной(разработчикмодификацииА.Ю.альбуминаРябов);поопределениетриптофановойфлуоресценции.Клиническая часть исследования была выполнена в гинекологическоми акушерском отделении ГБУЗ «Дмитровская городская больница» в периодс 2013 по 2016 год.

Экспериментальная часть проводилась на базе кафедрымедицинской биофизики ФФМ МГУ имени М.В. Ломоносова (зав. кафедройакадемик РАН Владимиров Ю.А.).Оценка функциональной активности нейтрофильного звена лейкоцитовметодом хемилюминесценции с двойной последовательной стимуляциейМетод хемилюминесцентной оценки активности нейтрофилов основанна регистрации развития во времени свечения клеток, стимулированныхпоследовательно двумя соединениями с разным механизмом действия. Напервом этапе нейтрофилы стимулировали форбол-12-миристат-13-ацетатом(ФМА) с внутриклеточным механизмом действия, на втором этапепроводилиосновнуюстимуляциюN-формил-метионил-лейцил-фенилаланином (фМЛФ) – стимул с внеклеточным механизмом действия.Анализ проводили на 12-ти кюветном хемилюминометре Lum1200 (ДИСофт,Россия).

Использовали люминол (в качестве хемилюминесцентного зонда)(Sigma, США); раствор Хенкса с глюкозой без красителя (Институтполиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН, Россия),стабилизированный 2 мМ НЕРЕS; N-формил-метионил-лейцил-фенилаланин,фМЛФ; форбол-12-миристат-13-ацетат, ФМА (все Sigma, США).35Рис. 1. Типичная кривая развития ХЛ при двойной стимуляции нейтрофилов: (1) —спонтанная ХЛ, (2) — предстимуляция ФМА, (3) — основная стимуляция фМЛФ.Стрелками обозначены моменты добавления стимулов.Исследованиепроводилисогласнометодике[158].Вкювету,содержащую раствор Хенкса и люминол в конечной концентрации 45 мкМ,помещали цельную кровь, отобранную в вакутейнеры с гепарином, вконечной концентрации 4,5% (45 мкл на 1,000 мл раствора в кювете) ирегистрировали спонтанную хемилюминесценцию (ХЛ) в течение 12 минут,затем вносили ФМА (конечная концентрация в кювете 50 нг/мл).

После 20минут инкубации проводили стимуляцию фМЛФ (конечная концентрация 10мкМ) и регистрировали индуцированный ХЛ ответ в течение не менее 60 мин(рис.1).36Рис. 1. Аналитические показатели исследования кривой развития ХЛ (пояснение втексте). Стрелками обозначены моменты добавления стимулов.В исследуемой группе изучали аналитические показатели — 1)удельную спонтанную активность нейтрофила А*сп (амплитуда базальной,деленная на количество нейтрофилов в пробе), 2) удельную пиковуюактивностьпраймированногонейтрофилаА*ФМА(амплитудаФМА-индуцированной ХЛ, деленная на число нейтрофилов), 3) удельную пиковуюактивность стимулированного нейтрофила А*фМЛФ (амплитуда фМЛФиндуцированной ХЛ, деленная на число нейтрофилов), 4) суммарнаяудельнаяпиковаяактивность(светосуммаS*фмлфвспышкифМЛФ-индуцированной ХЛ за 30 минут после добавления фМЛФ, деленная начисло нейтрофилов) 5) интегральный уровень спонтанной ХЛAсп,(интенсивность ХЛ на 10-минуте развития свечения) 6) амплитуду ФМАстимулированной ХЛ AФМА (интенсивность ХЛ спустя 20 минут последобавления ФМА), 7) амплитуду вспышки фМЛФ-индуцированной ХЛ Aфмлф(интенсивность в максимуме пика).

8) суммарную радикал-продуцирующуюактивностьклетоккровиSфМЛФ(светосумма37вспышкифМЛФ-индуцированной ХЛ за 30 минут после добавления фМЛФ), 9) коэффициентпраймирования Кпрайм = АФМА/Aсп (отражает способность нейтрофиловреагировать на праймирующий фактор). 10) коэфициент активации Какт =АфМЛФ/AФМА (отражает способность нейтрофилов реагировать на стимулпосле праймирования).

11) коэффициент затухания респираторного взрываKd (амплитуда фМЛФ-индуцированной ХЛ, деленная на интенсивностьфМЛФ-индуцированной ХЛ на 23-й минуте после добавления фМЛФ) (рис2), Полученные данные сравнивали с группами контроля.2.2.2 Математическое моделирование хемилюминограмм кривыхнейтрофилов методом деконволюцииКинетическая кривая ХЛ при двухстадийной стимуляции имеетсложный характер и может быть математически обработана с цельюразложениянасоставляющиеконтуры.Этапроцедураназываетсядеконволюцией, для ее выполнения был разработан специальный модуль набазе платформы LabView (разработчик А.Ю. Рябов).

Характеристики

Список файлов диссертации