Диссертация (1140795), страница 10
Текст из файла (страница 10)
16. Скриншот программного модуля обработки кинетических кривых ХЛ: 1 —ФМА-индуцированная ХЛ, 2 — «быстрая» фМЛФ-стимулированная вспышка, 3 —«медленная» фМЛФ-индуцированная вспышка.Клинический пример (рис.17)Пациентка 31 год поступила в акушерское отделение с жалобами наболи внизу живота, подтекание околоплодных вод. Диагноз: беременность28-29 нед. Угроза прерывания беременности. Подтекание околоплодных вод.При влагалищном осмотре: шейка матки укорочена до 1,5 см, частичноразмягчена, цервикальный канал пропускает 1 исследующий палец.Предлежит головка плода, прижата к входу в малый таз.
Проводиласьантибактериальная, токолитическая, спазмолитическая терапия. В 30 недельпроизошли преждевременные самопроизвольные роды. Масса плода 1700гр,оценка по Апгар 7-8 баллов.При анализе ХЛ отмечена выраженная интенсивность медленной ибыстройвспышки,свидетельствующей66оразвивающемсясистемномокислительном стрессе и напряженности иммунной системы перед родовымактом.213Рис. 17. Скриншот программного модуля обработки кинетических кривых ХЛ: 1 —ФМА-индуцированная ХЛ, 2 — «быстрая» фМЛФ-стимулированная вспышка, 3 —«медленная» фМЛФ-индуцированная вспышка.Таблица 8Окислительный статус пациентовПоказательКлинический Клинический Клинически Клиническипример №1пример №2йпример й пример №4№3Удельная1,731,212,7спонтаннаяактивностьнейтрофила А*сп670,31Удельная4,34,810,71,8204,943,9429,558,90,640,150,540,091,60,62,140,5276,15,585,816,647,69,240,132,22,53,945,9АОА330380305195ДОА43302331пиковаяактивностьнейтрофилаА*ФМАУдельнаяпиковаяактивностьнейтрофилаА*ФМЛФИнтегральныйуровеньспонтаннойХЛAспАмплитудуФМАстимулированнойХЛ AФМААмплитудувспышки фМЛФиндуцированнойХЛ AфмлфКоэфициентактивации КактКоэфициентпраймированияКпрайм684.3 Оценка антиоксидантной активности плазмы крови методомкинетической хемилюминесценцииВ настоящий момент проблеме иммунологических взаимоотношений всистеме мать-плод уделяется особое внимание.
Известно, что выживаемостьсемиаллогенного плода напрямую связана с угнетением иммунного ответа иперераспределением субпопуляции лимфоцитов в организме матери [1]. Прифизиологическом течении беременности отмечено доминирование Th 2 типиммунного ответа, отвечающего за преимущественно гуморальные реакции,гемопоэз, ангиогенез.
Сдвиг ответа в сторону Th1 приводит к активацииантиген-специфическихмакрофагов,цитотоксическихнатуральныхкиллеровиТлимфоцитов,активизациипровоспалительныхцитокинов(интерферон, ИЛ 1,ИЛ 2, TNFα) [89].[63] Источником цитокинов в организмебеременнойженщиныявляютсяактивизированныеNKклетки,присутствующие в 80% в децидуальной оболочке матки, а также клеткифето-плацентарного комплекса. [16]В литературе описано протективноевлияниепрогестеронанаразвитиебеременностикакмощногоиммуносупрессора путем опосредованного воздействия через системуцитокинов [89]. В момент взаимодействия прогестерона с рецепторами Тклетки СД8+ продуцируют прогестерон-индуцированный блокирующийфактор (ПИБФ), который воздействуя на иммунокомпетентные клетки,направляет иммунный ответ матери в сторону менее активных NK клеток,несущих маркеры СD56+, CD16-.
При наличии этих клеток иммунный ответматери будет через Th-2типа. При низком содержании прогестерона илипоражении рецепторного аппарата – иммунный ответ матери на трофобластсдвигается в сторону лимфокинактивных киллеров (LAK) с продукциейпровоспалительных цитокинов. Провоспалительные цитокины ограничиваютинвазию трофобласта, нарушая его нормальное формирование, вызываютактивацию протромбиназы, что обуславливает тромбозы, инфаркты и егоотслойку, что в конечном счете приводит к выкидышу [69, 164]69Внастоящеевремяуделяетсябольшоевниманиеразличнымсубпопуляциям натуральных киллеров, различающихся по плотностиэкспрессии CD56 и CD16. [64]] Существуют два подмножества CD56 NKклеток: высокоцитотоксичные клетки CD56dim, которые составляют> 90%NK-клеток в периферической крови, и менее цитотоксические, ноэффективнопродуцирующиецитокиныCD56bright.Былопроведеноисследование восприимчивости данных групп клеток к воздействиюактивных форм кислорода в присутствии окислителей.
Установлено, чтоподмножество CD56bright клеток NK, в отличие от клеток CD56dim, остаетсяжизнеспособным и функционально неповрежденным после воздействиярадикалов.CD56brightклеткиотличалисьвысокойспособностьюкнейтрализации окислителей и повышенной экспрессией антиокислительныхтиолов на поверхности клеток. Это указывает на то, что клетки CD56brightNK снабжены эффективной антиоксидантной защитной системойПроверку данных на нормальность распределения групп проводили покритерию Шапиро-Уилка.
Распределение в группах для параметра S(АОА) небылонормальным,ипоследующийанализпроводили,используянепараметрический критерий Манна-Уитни.У пациентов после самопроизвольного аборта отмечалось достоверноеснижение АОА по сравнению с группой К2 (p = 0,004) и УПБ (p = 0,04). Этоможет свидетельствовать об истощении антиоксидантной емкости плазмыкрови перед выкидышем, либо вследствие него (рис. 18).
Напротив, болеевысокий уровень АОА отмечался у группы пациентов с неразвивающейсябеременностью, а также у двух пациентов из группы УПБ с последующимзамиранием плода.70Рис 18 Диаграмма типа «ящик с усами». Сравнительная характеристикапараметра S(АОА) по группам. Значения представлены в виде медиана ±межквартильный размах. Для оценки различений между группами использовали тестМанна-Уитни. *относительно К3 критерий Манна-Уитни, p < 0,04.В обследованной группе здоровых женщин (n = 22) определеныграницы референсного интервала, куда попали 95% показателей — границынормы, которые составили от 195 до 405 усл.ед, медиана 320. Изсопоставления данных следует, что в группе здоровых беременных естьслучаи, выходящие за пределы нормальных значений, как в меньшую, так и вбольшую сторону.Описательная статистика АОА для групп представлена в таблице 971Таблица 9АОА исследованных групп: медиана и размах варьирования, усл.ед.ГруппаМедианаРазмах варьированияБеременные женщины285110–890Беременные с угрозой 325140–850прерыванияПациенткипосле 205135–300380190–890выкидышаНеразвивающаясябеременностьНа основании анализа ХЛ кривых можно предположить, что во времясамопроизвольного аборта происходит снижение антиоксидантной емкостиплазмы.
Эти данные косвенно свидетельствуют о развитии окислительногостресса в момент выкидыша в тканях фето-плацентарной системы и резкомспаде уровня прогестерона.Повышение АОА в группе с неразвивающейся беременностьювозможно связано с накоплением различных токсических веществ сантиоксидантными свойствами, являющихся продуктом лизиса погибшегоэмбриона, а также с гормональной поддерживающей терапией препаратамипрогестерона, обладающими иммуносупрессивными эффектами.
У двухпациентов из группы УПБ с последующим замиранием плода отмечалсяболее высокий уровень АОА, что может являться прогностическимфактором.Этиданныеуказываютнанеобходимостьопределенияэндогенного уровня прогестерона и индивидуального подхода к подборудозировки и длительности терапии.Из сопоставления данных следует, что в группе здоровых беременныхесть случаи, выходящие за пределы нормальных значений, как в меньшую,72так и в большую сторону. Возможно, для женщин со сниженной АОАтребуетсятерапияантиоксидантами.Повышенныезначениямогутсвидетельствовать или о компенсации оксидативного стресса, или бытьследствием несбалансированной гормональной терапии.4.4 Оценка триптофановой флуоресценции альбуминаПриокислительномстрессепроисходитсвободнорадикальноеокисление различных биомолекул, в первую очередь окислительноймодификации в результате действия активных форм кислорода подвергаетсяальбумин плазмы.
Этот белок участвует в поддержании внутрисосудистогоколлоидно-осмотическогоинактивирующимидетоксицирующую,давления,свойствами,обладаетвыполняетферментоподобную,конъюгирующимиигомеостатическую,антиоксидантную,хемокинетическую функции [165]. Для оценки окислительного статуса приразличных патологических состояниях и заболеваниях в последнее времяпроводят измерение доли окисленного альбумина, как маркера системногооксидативного стресса. Сывороточный альбумин может выступать вкачестве, как источника, так и мишени свободных радикалов.
Перехватываясвободные радикалы, альбумин подвергается окислительной модификациейи теряет свои транспортные свойства. В комплексе с ионами меди приоксилении SH группы или взаимодействия с монооксидом азота (NO)сывороточный альбумин приобретает прооксидантные свойства [159].Окисленная модификация белка вызывает образование в организмепродуктов окисления тирозина и триптофана. Степень окисленностиальбумина в эксперименте оценивали по изменению его флюоресценции при353 нм (флюоресценция триптофана).При сравнительной характеристике ДОА (рис 19) в группе женщинпосле самопроизвольного выкидыша достоверно ниже по отношению к К2 (р= 0,02), по отношению к К1 (р = 0,06)73**Рис 19.
Сравнительная характеристика параметра ДОА по группам. Значенияпредставлены в виде медиана ± межквартильный размах. Для оценки различений междугруппами использовали тест Манна-Уитни. * относительно К3 критерий Манна-Уитни,p < 0,01.В некоторых случаях показатель ДОА принимал отрицательныезначения, что свидетельствовало о наличии белковых компонентов,вносящихвкладвтриптофановуюфлуоресценцию.Былосделанопредположение, что такими мешающими компонентами могут оказатьсяЦИК, цитокины, или специфические антитела. При попытке осаждения ЦИКс помощью полиэтиленгликоля из безглобулиновой плазмы ни в одномслучае не было обнаружено ЦИК.
Таким образом, гипотеза о наличиицитокинов или специфических анитител нуждается в дальнейшей проверке.При сравнении групп К1 и К2 не было выявлено статистическизначимых различий, однако в группе К2 отмечался больший разброс взначениях: размах варьирования для К1 (-24–88), медиана 31, для К2 (12-43),медиана 37.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
