Автореферат (1140794), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Активация рецепторов фМЛФ стимулируетрастянутый во времени процесс фагоцитоза и образование фагосом, в которых такжепроисходит синтез АФК. Основным источником АФК в крови являются фагоциты.Генерация осуществляется с помощью ферментного комплекса НАДФН-оксидазы. Весьферментативный комплекс состоит из нескольких субъединиц. В покоящейся клетке этисубъединицы разобщены и распределены между плазматической мембраной и цитозолем.Во время активации клетки каким-либо стимулом запускается каскад внутриклеточныхпосредников, сопровождающийся стремительным входом ионов кальция в клетку,активацией протеинкиназы С, фосфолипазы А2, что приводит к фосфорилированиюбелков p47-phox и p67-phox и сборке мембранного комплекса НАДФН оксидазы иактивный синтез супероксидного радикала.
В эксперименте активацию клетки вызываютвоздействием различных стимулов, которые подразделяют на корпускулярные (частицы9латекса, опсонизированный и неопсонизированный зимозан, бактерии и их компоненты,активированный уголь) и растворимые агенты (фМЛФ, аллергены, пирогенал). Указанныеиндукторы воздействуют через рецепторный аппарат фагоцита. Безрецепторная активацияклеток достигается после воздействия кальциевого ионофора А 23187 или активаторомПкС ФМА, который проникает в клетку за счёт пассивной диффузииОценка удельной активности нейтрофила:при определении удельной спонтаннойактивности нейтрофила А*сп в группе К3 значения были выше в 4,5 раза по отношению кНБ (p = 0, 007), по отношению к УПБ в 2,1 раз, по отношению к группе К1 в 2,4 раза,однако различия не достоверны.
Удельная пиковая активность нейтрофила в ответ настимул ФМА была также достоверно выше у К3 по сравнению с НБ в 8 раз (p = 0,001), в4,7 раз к К1 (p = 0,0027) и в 3,7 раз по отношению к УПБ (p = 0,001). Удельная активностьв ответ на стимул ФМЛФ статистически значимо выше в группе УПБ по отношению к НБв 2,4 раза (p = 0,003), в 2,5 раз по отношению к К3 (p = 0,05), в 1,7 раз относительно К1 (p= 0,003). Суммарная удельная радикал-продуцирующая активность нейтрофила быладостоверно выше в группе УПБ по отношению к НБ в 2 раза (р = 0,002), в 2,6 разотносительно К3 (р = 0,01) и в 1,8 раз относительно К1 (р = 0,004).Таким образом, удельная спонтанная активность нейтрофилов, а также удельнаяпиковая активность в ответ на стимул ФМА достоверно выше в группе пациенток послесамопроизвольного выкидыша, что указывает на высокую генерацию АФК нейтрофиламив момент выкидыша. Удельная пиковая активность в ответ на стимул ФМЛФ и суммарнаяактивность нейтрофила была выше в группе беременных с угрозой прерывания, чтоговорит о высокой радикалпродуцирующей способности нейтрофилов к генерации АФКна фоне угрозы прерывания (преимущественно за счет внутриклеточной продукции).Оценка интегральной активности нейтрофила: При оценке интегральной спонтаннойактивности нейтрофилов а в группе УПБ выше в 2,6 раз по отношению к НБ.
В группе К3выше в 5,1 раз относительно группы НБ, в 1,86 раз выше чем К2, в 2,5 раз относительноК1 и в 1,9 раз выше УПБ. В группе К2 Acп в 2,7 раз выше чем в НБ.10Рисунок 1. Оценка интегральной спонтанной активности нейтрофила Acп погруппам. Значения представлены в виде медиана ± межквартильный размах. Дляоценки различений между группами использовали тест Манна-Уитни.
*относительно К3 критерий Манна-Уитни, p < 0,005; # относительно НБ р < 0,01.Таким образом, пациенты, беременность которых протекает на фоне угрозыпрерывания, а также пациенты после самопроизвольного аборта характеризуются высокойспонтанной активностью нейтрофилов, при этом у пациентов с неразвивающейсябеременностью,напротив,отмечаласьсниженнаяактивность,указывающаянаиммунносупрессию.При сравнительном анализе параметра AФМА статистически значимые различия быливыше в группах К3 по отношению к НБ в 10 раз, по отношению к К2 в 9,6 раз, к К1 в 7,7раз, к УПБ в 4,8 раз (p < 0,03), значения в УПБ выше НБ в 2 раза, К2 в 1,9 раз (p < 0,02)115040*30#20#10**0НБК3К2К1УПБРисунок 2.
Оценка интегральной спонтанной активности нейтрофила погруппам в ответ на стимул ФМА. Значения представлены в виде медиана ±межквартильный размах. Для оценки различений между группами использовалитест Манна-Уитни. * относительно К3 критерий Манна-Уитни, p < 0,03; #относительно УПБ р < 0,02.Таким образом, интегральная спонтанная активность в ответ на стимул ФМА былдостоверно выше у пациентов после самопроизвольного выкидыша и угрозы прерывания,что указывает на праймирование нейтрофилов и напряженность лейкоцитарного звенаиммунитета в результате родовой деятельности. Напротив, при неразвивающейсябеременности был самый низкий ответ. Отсутствие реакции на стимул указывает наслабую способность нейтрофилов к генерации АФК.Суммарная интегральная активность в ответ на стимул фМЛФ достоверно выше в группеУПБ по отношению к К1, К2, НБ более чем в 2 раза (р < 0,001). В группе К3 достоверновыше, чем в К2 и НБ более чем в 1,6 раз (р < 0,01) (рис.3).12Рисунок 3.
Оценка интегральной активности нейтрофила по группам в ответ настимул ФМЛФ. Значения представлены в виде медиана ± межквартильный размах.Для оценки различений между группами использовали тест Манна-Уитни. *относительно УПБ критерий Манна-Уитни, p < 0,001; # относительно К3 р < 0,01, К1относительно НБ р= 0,03.Таким образом, интегральная спонтанная активность в ответ на стимул ФМЛФдостоверно выше у беременных с угрозой прерывания, что указывает на высокуюспособность нейтрофилов к генерации АФК и возможное преждевременное прерываниябеременности.
После самопроизвольного выкидыша способность к дальнейшей генерацииАФК снижается, что свидетельствует о расходовании потенциала нейтрофилов послеродовой деятельности. У пациентов с неразвивающейся беременностью, также как и пристимулировании ФМА был отмечен самый низкий ответ.Коэффициент затухания респираторного взрыва нейтрофилов оказался статистическизначимо выше у больных с УПБ по сравнению с группами контроля К1, К2, К3 (рис.4) (p <0,01), у К1 по отношению к К3 (р < 0.02)1332*#1**0НеразвивающаясКя3бПеорс-тльевыкидК2ыншеаберКе1мнеонрнмыаебУеПрБемУенгрноызаепрерыванияРисунок 4.
Сравнительная характеристика коэффициента затуханияреспираторного взрыва по группам. Значения представлены в виде медиана ±межквартильный размах. Для оценки различений между группами использовалитест Манна-Уитни. *относительно УПБ критерий Манна-Уитни, p < 0,01; # К1 vs К3(р<0,01);Коэффициент активации был достоверно выше в группе УПБ по сравнению с К3 иК2 (p < 0,0001). У группы контроля К2, К1 и НБ достоверно значимые различия быливыше по отношению к К3 (р < 0,002) (рис .5).14**##*Рисунок 5. Сравнительная характеристика коэффициента активациинейтрофилов по группам.
Значения представлены в виде медиана ±межквартильный размах. Для оценки различений между группами использовалитест Манна-Уитни. *относительно К3 критерий Манна-Уитни, p < 0,01; К1 vs К2(р<0,01); НБ относительно К2 (р<0,003).Коэффициент праймирования был достоверно выше во всех группах беременныхженщин относительно К2. Самые высокие показатели Кпрайм были у пациентов послевыкидыша (рис.6).15К п р а й м = A ф М А /A с п о н т2520*15***105янанвныермееррпезабаомгррУонНУПБ1Киеыеыннемеребен2К3КеразвиПвоасюлещавяысякибдеырш-таь0Рисунок 6. Сравнительная характеристика коэффициента праймированиянейтрофилов по группам.
Значения представлены в виде медиана ±межквартильный размах. Для оценки различений между группами использовалитест Манна-Уитни. *относительно К3 критерий Манна-Уитни, p < 0,01; К1 vs К2(р<0,01); НБ относительно К2 (р<0,003).На основании анализа ХЛ кривых можно предположить, что во время беременности,как физиологической, так и протекающей на фоне угрозы прерывания, нейтрофилынаходятся в состоянии прайминга. Во всех группах Кпрайм был достоверно выше, посравнению с небеременными женщинами.В группе пациенток после самопроизвольного выкидыша интенсивность спонтаннойХЛ выше, а Какт ниже по сравнению с группами К1 и К2 (критерий Манна-Уитни, p <0,001), что говорит о высокой активности нейтрофильного звена иммунной системы уженщин перед и сразу после выкидышем.
В результате стимуляции фМЛФ у даннойгруппе заметно снижение ответа, что указывает на истощение радикал-продуцирующейспособности нейтрофила после выкидыша. Коэффициент затухания респираторноговзрыва нейтрофилов, а также ответ на стимулы, оказался статистически значимо выше убеременных с угрозой прерывания. У пациентов после самопроизвольного аборта Кdдостоверно ниже, чем в группе с физиологической беременностью. Эти данныесвидетельствуют о напряженности иммунитета у женщин, беременность которыхпротекает на фоне выраженной угрозы, и являются возможными предикторамипреждевременной родовой деятельности.
Снижение коэффициента затухания у пациентовпосле выкидыша, вероятно, указывают на функциональную недостаточность и истощениенейтрофилов.16В группе женщин с неразвивающейся беременности показатели удельной,интегральной спонтанной и стимулированной активности нейтрофилов были достовернониже, чем в остальных группах, что указывает на иммуносупрессивное состояние,препятствующее сократительной активности матки.
Также у 2 пациенток из группы УПБ снизким ответом на стимулы в последующем происходило замирание плода. Такимобразом,являетсянеоспоримымвкладактивированныхнейтрофиловвпатофизиологические процессы, приводящие к прерыванию беременности.Анализ кривых методом деконволюции: кинетическая кривая ХЛ при двухстадийнойстимуляции имеет сложный характер и может быть математически обработана с цельюразложения на составляющие контуры методом деконволюции. Любая кривая может бытьразложена на три составляющие: 1) ФМА-индуцированная продукция АФК, 2) «быстрая»фМЛФ-индуцированная вспышка, обусловленная внеклеточной продукцией АФК черезрецепторный путь, 3) «медленная» фМЛФ-индуцированная вспышка, обусловленнаявнутриклеточнойпродукциейАФК.РезультатыдеконволюциидляХЛ-ответанейтрофилов у пациента с привычным невынашиванием представлены на рис 7.Экспериментальнаякривая231Рисунок 7.
Скриншот программного модуля обработки кинетических кривыхХЛ: 1 — ФМА- индуцированная ХЛ, 2 — «быстрая» фМЛФ-стимулированнаявспышка, 3 — «медленная» фМЛФ-индуцированная вспышка.Из рисунка видно, что интенсивность процесса внутриклеточной генерации АФК(кривая 3) высока, что свидетельствует о развивающемся иммунном ответе.РезультатыдеконволюциидляХЛ-ответанеразвивающейся беременностью представлены на рис 8.17нейтрофиловупациентас213Рисунок 8. Скриншот программного модуля обработки кинетических кривых ХЛ: 1— ФМА-индуцированная ХЛ, 2 — «быстрая» фМЛФ-стимулированная вспышка, 3— «медленная» фМЛФ-индуцированная вспышка.Полученная кинетическая кривая аналогична кривым практически здоровыхдоноров — в ней присутствуют три составляющие, причем эти составляющие характерныдля отсутствия ответа со стороны нейтрофильного звена иммунной системы.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
