Диссертация (1140661), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Измерения проводились кожнымдатчиком в различных точках на коже лица и век (не менее 3 измерений заодно исследование с последующим вычислением среднего значения).В качестве контроля исследование микроциркуляции в области кожи лица ивек было проведено у 16 здоровых добровольцев.2.6 Исследование влажности, жирности, уровня эритемы кожи лица ивек у больных розацеа методами корнеометрии, себуметрии имексаметрииКорнеометрияКорнеометрия – метод оценки уровня гидратацииэпидермиса,основанныйнаизмеренииемкостногорогового слоясопротивлениядиэлектрической среды.Исследование проводилось на аппарате Corneometer CM 825 ( Courage –Khazaka, Кельн, Германия). Диапозон измерений от 0 до 120 единиц.Нормальным является значение влажности выше 45 единиц.
Измеренияпроводились на коже лица в области высыпаний и в области век. Измеренияпроводились в одной области не менее 3 раз за исследование, затемопределялось среднее значение.СебуметрияСебуметрия – метод определения салоотделения кожи, основанный нафотометриижирногопятнанаспециальнойкассетеаппарата,контактирующей с кожей.Исследование проводилось на аппарате Sebumeter SM 815 (Courage –Khazaka, Кельн, Германия). Диапозон измерений 0-350 условных единиц.Измерения проводились на коже лица в области высыпаний и в области век.51Измерения проводились в одной области не менее 3 раз за исследование,затем определялось среднее значение.МексаметрияМексаметрия позволяет измерить степень эритемы и количествомеланина в коже.
Метод основан на абсорбции и отражении определенныхдлин волн меланином, а также гемоглобином.Исследование проводилось на аппарате Mexameter MX 18 (Courage –Khazaka, Кельн, Германия). Диапозон измерений от 0 до 999 единиц.Измерения проводились в одной области не менее 3 раз, затем определялосьсреднее значение.В качестве контроля корнеометрия, себуметрия, мексаметрия былипроведены у 16 здоровых добровольцев.Для анализа данных, полученных при корнеометрии и себуметриипациенты были разделены на возрастные группы до 35 лет и после 35 лет,как и при проведении конфокальной лазерной сканирующей микроскопии.2.7 Исследование слезопродукции у больных розацеаИсследование суммарной слезопродукции проводили на обоих глазах пообщепринятой методике с помощью тест-полосок Ширмера (фирма Optitecheyecare, Индия). Время проведения пробы составляло 5 мин., результатоценивали по увлажненности длинного конца полоски (в миллиметрах).Показатели интерпретировали следующим образом: увлажнение полоскидлинной 20-25 мм – нормальная слезопродукция , 26 и более мм –гиперсекреция, 16-19 мм - небольшое снижение слезопродукции, 11-15 мм легкая степень ССГ, 6-10 мм — средняя степень ССГ, 5 мм и меньше –тяжелая степень ССГ.Пробу Норна проводили для оценки стабильности слезной пленки постандартной методике с помощью 0,1-0,2% раствора флюоресцеина-натрия.При биомикроскопии роговицы в кобальтовом фильтре отмечали времяпоявления первого разрыва на окрашенной флюоресцеином поверхности52слезной пленки.
Результаты интерпретировали следующим образом: норма –более 10 секунд; умеренное снижение – 5-10 секунд; резкое снижение –менее 5 секунд.2.8 Иммунологическое исследование крови больных розацеаДляиммунологическогоисследованияиспользовалисьобразцысыворотки крови больных розацеа, для получения которых пробирки свенозной кровью центрифугировали в течение 10 минут при 1500 оборотов вминуту.Количественное определение фактора роста сосудистого эндотелия(VEGF) в сыворотке крови.Определение VEGF в образцах сыворотки крови проводилось спомощью теста The BioSource International, Inc.
методом твердофазногоиммуноферментногоанализа.Влункимикропланшета,покрытогоантителами против VEGF, добавляли стандарты, контроли и исследуемыеобразцы сыворотки. Во время первой инкубации VEGF связываетсяпроизвольно с иммобилизированными в лунках антителами одним сайтомсвязывания. После промывки добавляли биотинилированные антителапротивVEGF,которыевовторойинкубациисвязываютсясиммобилизированным VEGF, связавшимся в первой инкубации.
Послеудаления избытка вторых антител добавляли стрептавидин-пероксидазу,которая связывается с биотинилированными антителами с формированиемсэндвич-комплекса из 4-х реагентов. После третьей инкубации и промывкиудаляли несвязавшийся фермент, после чего добавляли субстратный раствор,который взаимодействует с ферментом с образованием цветного комплекса.Реакцию останавливали добавлением стоп-раствора. Интенсивность окраскираствора прямо пропорциональна концентрации VEGF, присутствующего вобразце. Определяли оптическую плотность ячеек на длине волны 450 нм.Концентрацию VEGF в образцах определяли по стандартной кривой,построенной по 7 приготовленным разведениям стандарта VEGF.53Количественноеопределенияуровнячеловеческоготрансформирующего фактора роста бета-1 (TGF-β1) в сыворотке кровиОпределение уровня TGF-β1 в сыворотке крови проводилось методомтвердофазного иммуноферментного анализа с помощью набора BenderMedsystems.К антителам, специфичным к TGF-β1, адсорбированным вячейках планшета, добавляли исследуемые образцы сыворотки, стадарты иконтроль.
TGF-β1, присутствующий в образцах, стандартах и контролях,связывается с антителами, адсорбированными в ячейках. Затем добавляликонъюгат моноклональных анти- TGF-β1 антител с пероксидазой хрена(HRP),которыйсвязывалмолекулыTGF-β1,захваченныепервымиантителами. После инкубации и промывки из ячеек удаляли не связавшийсяферментный конъюгат, и в ячейки добавляли субстратный раствор, которыйвзаимодействовал с ферментным комплексом собразованием окрашенногораствора.
Реакцию останавливовали добавлением кислоты. Затем измерялиинтенсивностьокраскинадлиневолны450нм,котораяпрямопропорциональна концентрации TGF-β1 в образцах. Концентрацию TGF-β1 вобразцахопределялипостандартнойкривой,построеннойпо7приготовленным разведениям стандарта TGF-β1.2.9 Дерматологический индекс качества жизни (ДИКЖ) больныхрозацеаДерматологический индекс качества жизни (ДИКЖ) (Dermatology LifeQualityIndex)Великобритания,разработан1994).ОнF.Y.Finlayпредставляет(Уэльскийсобойуниверситет,анкету-вопросник,адресованную самому больному.
ДИКЖ применяется дерматологами дляоценки степени негативного влияния кожного заболевания на различныеаспекты жизни больного, характеризующие в целом его качество жизни.ДИКЖможетбытьиспользованкакодинизкритериевоценкиэффективности терапии кожного заболевания у конкретного больного.54Для опроса больных нами был использован руссифицированныйвариант анкеты для определения ДИКЖ, разработанный Кочергиным Н.Г. иБуровой Е.П. (2001).Больному предлагалось ответить на 10 вопросов. На каждый вопроснеобходимо было дать один ответ из 4 предложеных (очень сильно, сильно,не сильно, нет воздействия). Каждый вариант ответа оценивался в баллах,сумма которых и составила ДИКЖ у конкретного больного в данный моментвремени. Максимально возможное значение ДИКЖ – 30.Анкета вопросник для определения ДИКЖ.1.
Насколько сильно, чесалась, ныла, болела или «горела» Ваша кожа впоследнее время?2. Насколько застенчивы, подавлены или замкнуты вы были из-завашего кожного заболевания?3. Как сильно в последнее время Ваши кожные проблемы мешалиходить по магазинам или убираться по дому или в саду?4. Насколько Ваш выбор одежды зависел от состояния кожи?5. Как сильно влияло состояние кожи на Вашу социальную активность иотдых?6. Насколько сильно состояние кожи в последнее время затруднялоВаши занятия какими-либо видами спорта?7. Вынуждены ли Вы были на прошлой неделе не ходить на работу илиучебу из-за состояния кожи? Если «нет», насколько сильно ваша кожасоздавала вам проблемы на работе или учебе?8. Как часто из-за состояния кожи у Вас возникали проблемы общения спартнерами или с кем-либо из близких друзей или родственников?9. Насколько сильно состояние Вашей кожи в последнее времясоздавало Вам сексуальные трудности?10.
Насколько большими были проблемы, связанные с лечением кожи(беспорядок в доме из-за этого или нехватка времени на другие дела и т.п.)?55Чем выше показатель ДИКЖ, тем сильнее отрицательное влияниесостояния кожного процесса на качество жизни больного в данный момент.Снижение ДИКЖ в процессе лечения означает улучшение качества жизнибольного.2.10 Методы статистической обработки данныхСтатистический анализ данных проводился с использованием критерияСтьюдента (Т-критерия) для нормально распределенных показателей,Манна-Уитни(дляпризнаков,имеющихотличноеотнормальногораспределение) и статистического непараметрического критерия – точногометода Фишера, не зависящего от характера распределения показателя. Вкачестведостоверногокритерияразличийрассматривалсяр<0,05.Результаты представлялись в виде М+/-m, где М – среднее арифметическоеm- ошибка репрезентативности.Для построения графиков, а также для проверки нормальностираспределения признаков, получения описательной статистики и проведениясравнения сформированных групп пациентов использованы пакеты программMicrosoft Excel 2010 и Statistica 6.0.56ГЛАВА 3.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.3.1. Результаты обследования больных розацеа до лечения.3.1.1 Оценка тяжести заболевания с помощью Шкалы диагностическойоценки розацеа (ШДОР)Распределение больных розацеа по степени тяжести заболевания былоследующим: 6 больных с легкой степенью (средний балл – 5,33+/-0,51); 58больных со средней степенью (средний балл – 10,5+/-0,19), 6 больных стяжелой степенью (средний балл – 17,1+/-0,66) (рисунок 7).Рисунок 7. Распределения больных розацеа по степени тяжести заболевания(по ШДОР) (в %).3.1.2 Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия кожи лица убольных розацеаБольные розацеа были разделены на 2 возрастные группы: до 35 лет (10человек) и после 35 лет (60 человек).
Результаты сравнивались с известнымисоответствующими параметрами для здоровой кожи, а также с данными,полученными при обследовании16 здоровых добровольцев (возрастныегруппы до 35 лет – 8 человек, после 35 лет – 8 человек). Распределение57больных розацеа по возрастному признаку и формам заболевания приведенона рисунке 8.Рисунок 8.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
