Диссертация (1140465), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Н.П. Огарѐва» от 13 ноября 2017 года, протокол №56 были рассмотрены материалы настоящего диссертационного проекта и дано заключениеоб их соответствии с нижеследующими законодательными и иными нормативно-правовыми актами Российской Федерации, а также международныхорганизаций, осуществляющих контроль за исследованиями в области биологии и медицины с использованием позвоночных теплокровных животных ибиологического материала:1.
Федеральный закон «Об обращении лекарственных средств» от12.04.2010 г. №61-ФЗ (действующая редакция);2. «Европейская конвенция о защите позвоночных животных, используемых в экспериментах или иных научных целях», Страсбург, 1986 (с изменениями в соответствии с положениями Протокола Совета Европы (СЕД№170) от 05.12.2005;3. Директива Совета ЕС от 24 ноября 1986 г. о сближении Законов, постановлений и административных положений государств ЕС по вопросамзащиты животных, используемых для экспериментальных и других научныхцелей (86/609/ ЕЕС);4.
Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от01.04.2016 г. №199н «Об утверждении правил надлежащей лабораторнойпрактики»;5. ГОСТ 33044-2014«Принципы надлежащей лабораторной практики»(Национальный стандарт Российской Федерации);6. ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами» (Межгосударственный стандарт, соответствующий«Guidelinesforaccommodationandcareofanimals.Species-specific provisions forlaboratory rodents and rabbits»)от 01.07.2016 г.;7. Методические рекомендации по изучению гепатопротективной активности лекарственных средств / А.И. Венгеровский, В.В. Удут, Д.В.
Рей45харт, А.М. Дыгай. – В кн. «Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств» под ред. А.Н. Миронова. – М.: Гриф иКо, 2012. – С. 710-719.В соответствие с принятыми стандартами экспериментальные и лабораторные исследования выполнялись в соответствие с СОП лабораторий экспериментальной морфологии и специфической активности лекарственныхсредств Центра перспективных исследований инновационных лекарственныхсредств университета.2.3 Материал исследования2.3.1 Характеристика лабораторных животных и условий их содержания, формирование экспериментальных группИсследование выполнено на 160 белых нелинейных крысах самцах (80особей) и самках (80 особей) исходным весом 180-220 г, полученных вфилиалах «Андреевка» и «Столбовая» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России.
Навсех животных были получены ветеринарные сертификаты. Крысы,включенные в исследование, прошли двойной ветеринарный контроль: приотгрузкеизпитомникаиприпоступлениибиологическую клинику Мордовскоговэкспериментально-университета. Для реализациипоставленных в работе задач животные были разделены на несколько групп(рис.
2.6).Поскольку одним из требований, предъявляемых к результатамнаучного исследования, является требование получения репрезентативныхданных, при определении объема экспериментальных групп исходили изположений медико-биологической статистики, а также многолетнегоопытапроведения исследований на животных в нашей стране и за рубежом.Каждая группа включала по 20 крыс: в каждой группе было по 10 самцов и10 самок. Количество животных определяли в связи с большим объемомлабораторных и морфологических исследований и необходимостьюполучения достаточного количества биологического материала. Так, при46Белые беспородные крысы самцы и самкиФормирование группn=160Самцы и самкиn=160ИнтактныйконтрольГруппы препаратасравнения:n=201.
S-аденозил-Lметионин 60 мг/кгКонтроль с острымалкогольнымпоражением печени2. S-аденозил-Lметионин 30 мг/кгn=20n=20 в каждойгруппеОпытные группы:3. ЛБК-527 100 мг/кг5. ЛХТ-8-16 120мг/кг4. ЛБК-527 50 мг/кг6. ЛХТ-8-16 60 мг/кгОпытные группы:n=20 в каждойгруппеn=20 в каждойгруппеРисунок 2.6 Формирование контрольных и опытных групп в исследовании47заборематериалавкаждойэкспериментальнойгруппеживотныхслучайным образом разделяли на две подгруппы по 10 особей в каждой (по5 самцов и 5 самок).
У крыс первой подгруппы забирали печень наприготовление блоков для микроморфологического исследования и ИГХ, укрысвторойподгруппыизвлеченнуюпеченьиспользовалидляокрашивания суданом-III и проведения ИФА, а также определенияактивности ПОЛ. Кровь у животных первой подгруппы использовалась длябиохимическогоисследования,второй–дляизучениясистемныхсвободнорадикальных процессов.При поступлении из питомника каждое животное партии былоосмотрено ветеринарным врачом и помещено в карантинное отделениевивария университета, где содержалось в группе с животными только своейпартии. Длительность карантинизации при постоянном контроле внешнеговида и поведенческих реакций грызунов составляла не менее 14 суток.Фактов внеэкспериментальной гибели животных до их включения вконтрольные или опытные группы не фиксировали.Для создания комфортных условий в соответствие с требованиями соответствующего ГОСТ животным устанавливались следующие характеристики микроклимата: температура воздуха в помещении с клетками животных – в диапазоне от 20 до240С при относительной влажности воздуха 5156%.
Лабораторные грызуны содержались при групповом типе размещенияв соответствие с их включением в определенную контрольную или опытную серию, при котором в полиуретановых клетках (типа R1) можно содержать от 5 до 10 животных с учетом их половой принадлежности. Клеткибыли сконструированы таким образом, что их верхняя – решетчатая – часть,изготовленная из нержавеющей стали, оборудована специальными приспособлениями из недеградируемых полимерных материалов для обеспечениясвободного и бесперебойного доступа к питьевой воде и твердому экструдированному корму.48Через3-5 дней в каждой клетке проводили смену подстила, в качествекоторых применяли среднего размера стружку из твердых лиственных пород древесины (производства ООО «Лабораторкорм», Москва). В той жеорганизацииприобретали сухой твердый экструдированный универсальныйкорм для мышей и крыс, изготовленный в соответствие с прописью ПК-1201.
Поили животных в режиме свободного доступа (за исключением периодов выведения животных из эксперимента) водопроводной водой с помощью специальных полимерных поилок с насадками из нержавеющей стали.Термическую обработку металлических элементов клеток и оборудование, атакже их мытье проводили не реже 1 раза в 14 суток.Вывод лабораторных крыс из эксперимента проводили гильотиннымспособом под общей анестезией после прижизненного получения образцовкрови из полости левого желудочка.Анестезиологическое пособие включалоингаляционное введение галотана с помощью наркозной приставки к аппарату ИВЛ для мелких лабораторных грызунов «ТОРО» производстваKentScientific(США).2.3.2 Используемые в работе лекарственные вещества, реактивы, диагностические наборы и антителаВ работе изучили гепатопротекторное действие двух оригинальных лекарственных веществ в виде фармацевтических субстанций (рис.
2.7), наработанных в отделе химии и технологии синтетических лекарственныхсредств АО «ВНЦ БАВ» (Россия) и предоставленных нам для исследования1.Первое вещество – представляет собой магнийсодержащую соль 2аминоэтансульфоновой кислоты, заключенную в циклическую структуру –магния бис-ацетаминоэтансульфонат (лабораторный шифр – ЛБК-527). Второе вещество является стабильной фармацевтической композицией деанолаацеглумата с альфа-липоевой кислотой (лабораторный шифр разработчика1Выражаем искреннюю благодарность лауреату Государственной премии РФ, д.х.н., профессору С.Я. Скачиловой за предоставленные для исследования субстанции веществ49ЛХТ-8-16), в 1 г которой содержится по 250 мг каждого из действующих веществ.Фармацевтическая композиция деанола ацеглумата и липоевой кислоты(лабораторный шифр ЛХТ-8-16)Магния бис-ацетаминоэтансульфоноат(лабораторный шифр ЛБК-527)Рисунок 2.7 Химические структуры лекарственных веществ,включенных в исследованиеВключенные в диссертационную работу соединения и композиции использовались в виде фармацевтических субстанций.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
