Диссертация (1140465), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Доказанные механизмы развития отмеченных эффектов, среди которых антирадикальная активность,делают их перспективными с точки зрения возможного гепатотропного действия.Цель работыИзучитьгепатопротекторноедействиесоединения2-аминоэтансульфоной кислоты и фармацевтической композиции альфалипоевой кислоты и деанола ацеглумата при остром алкогольном повреждении органа на основе комплексного исследования макро- и микроструктурыпечени, активности свободнорадикальных и биохимических процессов сыворотки крови, уровня про- и противовоспалительных цитокинов и экспрессиирегуляторов апоптоза и клеточной пролиферации в ткани печени.Задачи исследования1. Исследовать влияние курсового внутрижелудочного введения соединения ЛБК-527 на макро- и микроструктуру печени крыс, а также экспрессиирегуляторов апоптоза (Bcl-2, каспаза-3) и пролиферации (Ki-67, PCNA) на7фоне токсического воздействия этанола, оценить характер и тяжесть патологических изменений органа в зависимости от дозы фармакологического средства.2.
Изучить активность тканевых и системных свободнорадикальныхпроцессов, антиокислительного потенциала паренхимы печени крыс, тканевого содержания ключевых цитокинов, а также некоторых биохимическихпоказателей, отражающих функциональное состояние органа, на фоне формирующегося острого алкогольного повреждения и профилактического введения магнийсодержащего протектора ЛБК-527.3.
Изучить макро- и микроскопические изменения печени животных нафоне острого воздействия токсических доз этилового спирта и профилактического курсового введения фармацевтической композиции ЛХТ-8-16 в различных дозах и ее влияние на апоптотическую готовность клетки (Bcl-2, каспаза-3) и процессы регенерации (Ki-67, PCNA).4. Изучить влияние курсового введения фармацевтической композицииЛХТ-8-16 на тканевые процессы перекисного окисления липидов, функциональное состояние органа, а также тканевое содержание ФНО-альфа, ИЛ-10 ифактора роста гепатоцитов у животных с острым алкогольным повреждением.5.
Сравнить влияние курсового введения фармацевтической композиции ЛХТ-8-16, вещества ЛБК-527, и гепатопротекторного препарата Sаденозин-L-метионина на макро- и микроструктуру печени, выраженностьапоптоза и пролиферационной активности гепатоцитов, тканевые и системные свободнорадикальные процессы, антиокислительный потенциал паренхимы печени крыс, тканевое содержания ключевых цитокинов, а также некоторые биохимические показатели на фоне токсического воздействия этанолана печень.Научная новизнаАлкоголь-индуцированная активация свободнорадикальных процессовв печени на фоне подавления антиоксидантного потенциала, повышение тка8невой концентрации ФНО-альфа и ФРГ наряду со снижением уровня ИЛ-10обусловливают формирование прямой цитотоксической реакции, цитолитического и холестатического синдромов, нарушения пигментной функции органа.
Повышение экспрессии каспазы-3 и снижение количества Bclпозитивно окрашенных гепатоцитов на фоне отсутствия клеток, экспрессирующих ядерные факторы Ki-67 и PCNA, свидетельствует об активации нафоне острой алкогольной нагрузки животных апоптоза гепатоцитов и подавления процессов клеточной регенерации.
Все вышеописанные процессы могут рассматриваться как патологические мишени для лекарственных средствс цитопротекторной активностью.Впервые показано, что внутрижелудочное курсовое введение магнийсодержащего соединения 2-аминоэтансульфоновой кислоты ЛБК-527 и фармацевтической композиции ЛХТ-8-16 в дозах, пропорциональных 5 и 2,5%от показателя ЛД50, определенного при данном пути введения, ведет к сохранению макроструктуры органа, долькового строения и балочной структурыпаренхимы печени, профилактике гибели печеночных клеток (отсутствиенекроза или минимальный некроз по шкале Кноделя), снижению интенсивности дистрофии гепатоцитов преимущественно центра дольки и ослаблениюактивности воспаления.
Гепатопротекторное действие вещества ЛБК-527 ифармацевтической композиции ЛХТ-8-16 на фоне формирования экспериментального острого алкогольного поражения печени проявляется в профилактике алкоголь-опосредованного цитолиза и холестаза и обусловлено подавлением свободнорадикальной активности паренхимы органа с пропорциональной активацией антиокислительного потенциала ткани.Установлено, что соединение ЛБК-527 в дозе 100 мг/кг/сут в большейстепени, чем ЛХТ-8-16, снижает тканевую концентрацию ФНО-альфа, восстанавливает до уровня интактных животных содержание противовоспалительного ИЛ-10, повышает экспрессию антиапоптотического фактора Bcl-2на фоне гипоэкспрессии каспазы-3 и активирует пролиферативный потенци-9ал гепатоцитов (по уровню Ki-67 и PCNA) главным образом в области периферии печеночной дольки.Научно-практическая значимость работыКомплексное изучение гистологических проявлений острого повреждающего действия этилового спирта на печень, углубленное использованиеиммуногистохимических маркеров программируемой гибели клеток и ихпролиферации, наряду с исследованием процессов свободнорадикальной липопероксидации и антиокислительного потенциала, концентрации регуляторных молекул в паренхиме органа и его функционального состояния позволяют расширить современные представления о ключевых элементах развития патологического процесса, структурной перестройки органа, определитьважнейшие биологические мишени для возможного профилактического и лечебного воздействия.Полученные результаты о молекулярно-клеточных механизмах протекторного действия магнийсодержащего соединения 2-аминоэтансульфоновойкислоты, а также фармацевтической композиции на его основе, являются основанием для проведения углубленного доклинического исследования фармакокинетики и фармакодинамики веществ, их безопасности при системномприменении, разработки оптимальной лекарственной формы для приемавнутрь в аспекте создания высокоэффективного отечественного гепатопротекторного лекарственного средства.Методология и методы исследованияВ качестве методологической основы исследования нами были взятыдва фундаментальных источника – статья Dolganiuc and Szabo «In vivo and invitro models of acute alcohol exposure» (2009) и «Методические рекомендациипо изучению гепатопротективной активности лекарственных средств» А.И.Венгеровского и соавт.
(2012). Модель острого алкогольного гепатита воспроизводили ежесуточным внутрижелудочным введением 40% водного раствора этилового спирта крысам в пересчете на 96% этанол в дозе 8 мл/кг весаживотного в течение 7 суток.10Для изучения макроструктурных изменений печени осуществляливнешний осмотр органа, его взвешивание. Проводили гистологическое изучение парафиновых срезов печени, окрашенных гематоксилин-эозином, атакже морфометрический анализ.Для исследования процессов программируемой гибели гепатоцитов,состояния клеточной пролиферации использовали иммуногистохимическийметод определения экспрессии Bcl-2, каспазы-3, PCNA и Ki-67.Для исследования состояния ПОЛ в крови и ткани использовали методы определения ТБК-зависимых продуктов ПОЛ, активности каталазы, тканевого фермента-антиоксиданта СОД, с помощью метода индуцированнойхемилюминисценции определяли общий антиоксидантный потенциал паренхимы печени.
Уровень гиперферментемии, холестаза, концентрацию билирубина определяли с помощью автоматического биохимического анализатора сиспользованием стандартных биохимических методов. Тканевое содержаниеФНО-альфа, ИЛ-10 и фактора роста гепатоцитов в печени изучали при помощи количественного ИФА.Связь диссертации с основными научными темами университетаДиссертационное исследование выполнялось в рамках Программы развития ФГБОУ ВО «МГУ им. Н.П. Огарѐва» по приоритетному направлению1 «Технологии и новые материалы».Основные положения, выносимые на защиту1. Магниевая соль 2-аминоэтансульфоновой кислоты при внутрижелудочном введении в дозах, составляющих 5 и 2,5% от показателя ЛД 50, снижает формирование макро- и микроскопических, иммуногистохимических признаков острого поражения печени у крыс.
Одновременно с этим наблюдаетсяумеренный цитолитический синдром без признаков холестаза на фоне подавления системной и тканевой активности гидроперекисных процессов и повышения антирадикального потенциала печеночной ткани. В высшей терапевтической дозе 100 мг/кг в сутки вещество ЛБК-527 снижает продукцию11ФНО-альфа, активирует синтез противовоспалительных цитокинов ИЛ-10 ифактора роста гепатоцитов.2.
Фармацевтическая композиция ЛХТ-8-16 обладает гепатопротекторными свойствами лишь при введении в высшей терапевтической дозе – 120мг/кг, что подтверждают макро- , микроморфологические и иммуногистохимические изменения в ткани печени. Снижение гиперферментемии крови сопровождается сохранением холестатического синдрома и высокой интенсивностью тканевых процессов ПОЛ в печени, не компенсируемых ростом активности ферментов-антиоксидантов. При этом умеренно снижается тканеваяконцентрации ФНО-альфа, и отмечается низкая активность композиции постимуляции клеточной пролиферации.3. При сравнительном анализе морфофункциональных проявлений гепатопротекторного действия исследуемых соединений с препаратом сравнения S-аденозил-L-метионина 1,4-бутандисульфонатом установлено, что ЛХТ8-16 уступает препарату сравнения по своей активности, тогда как веществоЛБК-527 сопоставимо с ним по влиянию на макро- и микроструктуру печени,не уступает по противовоспалительной активности и способности снижатьбиохимическую активность поражения печени, превосходит по антирадикальной и антиапоптотической активности и стимуляции пролиферации привведении в высшей терапевтической дозе, и может рассматриваться как альтернатива препарату сравнения в качестве средства патогенетической терапии острого алкогольного гепатита.Соответствие диссертации паспорту научной специальностиОсновные положения диссертационной работы соответствуют паспорту научной специальности 14.03.02 – Патологическая анатомия, области исследований «Исследование патогенетических механизмов развития заболеваний в целом и отдельных их проявлений (симптомы, синдромы), созданиеоснов патогенетической терапии», а также паспорту научной специальности14.03.06 – Фармакология, клиническая фармакология, области исследований«Поиск новых биологически активных фармакологических веществ среди12природных и впервые синтезированных соединений, продуктов биотехнологии, генной инженерии и других современных технологий на экспериментальных моделях патологических состояний».Внедрение результатов в практикуНаучные результаты, представляющие высокую научную и практическую ценность, внедрены в образовательный и научно-исследовательскийпроцесс учебных и научных подразделений Национального исследовательского Мордовского государственного университета им.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
