Диссертация (1140465), страница 18
Текст из файла (страница 18)
5.25 б). Невысокая активность по стимуляции регенерации была подтверждена в том числе и значением предыдущего маркера.Исследуемые вещества более заметно стимулировали регенерацию гепатоцитов: на фоне магнийсодержащего соединения ЛБК-527 в дозе 100мг/кг и фармацевтической композиции ЛХТ-8-16 доля пролиферирующихгепатоцитов увеличивалась в среднем до 4,1 и 5,7% соответственно (рис. 5.25г, д).110абвгдРисунок 5.25 PCNA в ядрах гепатоцитов крыс (показано стрелкой, ув.400): а) печень интактной крысы; б) печень крысы с ОАГ (контроль);печень крысы с алкогольным процессом на фоне: в) АМ в дозе 60мг/кг/сут; г) ЛХТ-8-16 в дозе 120 мг/кг/сут; д) ЛБК-527 в дозе 100мг/кг/сут; иммунопероксидазная реакция1116.
ЗАКЛЮЧЕНИЕИзбыточное употребление алкоголя вызывает целый спектр патологических процессов в печени, среди которых алкогольный стеатоз наблюдаетсяпрактически у всех лиц, потребляющих в сутки 40 грамм и более чистогоэтилового алкоголя. Помимо стеатогепатоза алкогольная болезнь печенивключает в себя такие патологические процессы, как воспаление различнойстепени выраженности, прогрессирующий фиброз у 10-35% алкоголиков ицирроз печени у 10-15% злоупотребляющих спиртным [33].Большую озабоченность вызывает рост заболеваемости гепатоцеллюлярной карциномой лиц с АБП, у которых цирроз трансформируется в ракпечени в 1-2% ежегодно [34].
Особенностями АБП является то, что стеатоз иалкогольный гепатит, в меньшей степени фиброз печени до стадии цирротической трансформации, являются обратимыми состояниями, достигаемымистойким отказом от спиртного и проведением гепатопротекторной лекарственной терапии, тогда как фулминантный алкогольный стеатогепатит, декомпенсированный цирроз и рак печени имеют крайне неблагоприятныйпрогноз.Клеточные и молекулярные механизмы алкогольного поражения печени до настоящего времени далеки от полного понимания, однако накопленный опыт позволяет утверждать, что заболевание формируется в результатевзаимодействия комплекса поведенческих и генетических факторов с факторами окружающей среды.
Гистологические маркеры АБП – стеатоз, воспаление и фиброз – есть итог последовательности патофизиологических событийв контексте продолжающегося патогенного воздействия алкоголя на организм. Ключевым компонентом эволюции клинических патологических формАБП является прямое цитотоксическое действие основного метаболита, образующегося в процессе деградации алкоголя, – ацетальдегида [35].Современный арсенал лекарственных средств, обладающих протективным воздействием на печень при ее повреждении различной этиологии, до112вольно широк и включает как лекарственные формы растительного происхождения, так и синтетические лекарственные средства. Однако, рад ограничений, свойственных одним препаратам, недостаточно высокая эффективность других, - делает проблему обоснования молекулярных и клеточныхмишеней потенциально эффективных новых фармакологических веществчрезвычайно актуальной.Целью настоящей работы явилось изучение гепатопротекторного действия соединения 2-аминоэтансульфоной кислоты и фармацевтической композиции на его основе при остром алкогольном поражении органа на основекомплексного исследования макро- и микроструктуры печени, активностисвободнорадикальных и биохимических процессов сыворотки крови, уровняпро- и противовоспалительных цитокинов и экспрессии регуляторов апоптоза и клеточной пролиферации в ткани печени.Важнейшим вопросом, требовавшим разрешения при планированииисследования, был выбор оптимальной модели острого алкогольного поражения печени.
Сложность выбора была продиктована сохраняющейся донастоящего времени дискуссией в мировой и отечественной литературе повопросу об адекватности моделирования острого алкогольного гепатитаусловиям реальной клинической практики. В связи с этим за основу намибыли взяты два фундаментальных источника – статьяDolganiucandSzabo«Invivoandinvitromodelsofacutealcoholexposure» (2009) и «Методические рекомендации по изучению гепатопротективной активности лекарственныхсредств» А.И. Венгеровского и соавт.
(2012). Модель острого алкогольногоповреждения печени воспроизводили ежесуточным внутрижелудочным введением 40% водного раствора этилового спирта в пересчете на 96% этанол вдозе 8 мл/кг веса животного в течение 7 суток.Исследование выполнено на 160 белых нелинейных крысах самцах исамках исходным весом 180-220 г, полученных в филиалах «Андреевка» и«Столбовая» ФГБУН НЦБМТ ФМБА России. На всех животных былиполучены ветеринарные сертификаты. Крысы, включенные в исследование,113прошли двойной ветеринарный контроль: при отгрузке из питомника и припоступлении в экспериментально-биологическую клинику Мордовскогоуниверситета.
Для реализации поставленных в работе задач животные былиразделены на несколько групп: крысы интактного контроля, крысы сострым алкогольным повреждением печени, животные с ОАП, получающиевнутрижелудочно препарат сравнения в дозах 60 и 30 мг/кг, исследуемыевещества – ЛХТ-8-16 в дозе 120 и 60 мг/кг и ЛБК-527 – в дозе 100 и 50мг/кг.Каждая группа включала по 20 крыс: в каждой группе было по 10самцов и 10 самок. Включение большого числа животных в исследованиебылопродиктованонеобходимостьюпроведениямасштабныхисследованием с привлечением широкого спектра методов, при том, чтообъектом выступали только печень и кровь животных.
При заборематериала в каждой экспериментальной группе животных случайнымобразом разделяли на две подгруппы по 10 особей в кажой (по 5 самцов и 5самок). У крыс первой подгруппы забирали печени на приготовленияблоков для микроморфологического исследования и ИГХ, у крыс второйподгруппы извлеченную печень использовали для окрашивания суданом-IIIи ИФА, а также определения активности ПОЛ. Кровь у животных первойподгруппы использовалась для биохимического исследования, в торой – дляизучения системных свободнорадикальных процессов.В работе были изучены морфологические и функциональные аспектыпротекторного действия на печень двух оригинальных отечественных лекарственных веществ. Первое вещество – представляет собой магнийсодержащую соль 2-аминоэтансульфоновой кислоты, заключенную в циклическуюструктуру – магния бис-ацетаминоэтансульфонат (лабораторный шифр –ЛБК-527). Второе вещество является стабильной фармацевтической композицией деанола ацеглумата с альфа-липоевой кислотой (лабораторный шифрразработчика ЛХТ-8-16).
Включенные в диссертационную работу соединения и композиции использовались в виде фармацевтических субстанций. Онипредставляли собой белый мелкокристаллический порошок без запаха (или, в114случае с ЛБК-527, с легким запахом сероводорода), хорошо растворимые вводе. Поскольку во всех экспериментальных группах использовался внутрижелудочный путь введения, необходимое количество вещества смешивали с2% крахмальным гелем ex tempore.При исследовании гепатопротекторного действия ЛБК-527 мы получили следующие результаты. Гистологическая картина алкогольного повреждения печени соответствовала явлениям гибели паренхиматозных клеток сформирующейся умеренной активностью воспалительного процесса по шкале Кноделя: отмечали полнокровие ткани с расширением сосудов и синусоид, явлением агрегации, сладжа эритроцитов и частичным внутрисосудистымгемолизом эритроцитов. Дольчатое строение печеночной ткани размыто, печеночные балки дискомплексированы.
Наблюдались центролобулярныенекрозы гепатоцитов. Гепатоциты центра дольки с явлениями кариопикноза,кариолизиса, вакуолизации и лизиса цитоплазмы, свидетельствующие о формированииявленийдистрофииицитолиза.Магниеваясоль2-аминоэтансульфоновой кислоты дозозависимо сдерживала развитие дистрофических и воспалительных явлений в органе (минимальное воспаление илиотсутствие такового по Кноделю).При проведении гистохимического исследования у крыс контрольнойгруппы регистрировали формирование смешанного (крупно- и мелкокапельного) стеатоза, преимущественно затрагивающие портальные тракты и перипортальные зоны. Соединение ЛБК-527 в обеих исследуемых дозах заметноснижало выраженность явлений жировой дистрофии, что проявлялось как вснижении доли подверженных патологическим изменениям гепатоцитов, таки площади цитоплазмы паренхимных клеток, занятых каплями жира. В совокупности с описываемыми феноменами статистически значимое при сравнении с контролем увеличение доли двухъядерных гепатоцитов свидетельствовало об активации регенераторных механизмов в ткани органа.Для наиболее объективного суждения об активности процессов программируемой гибели гепатоцитов и регенераторно-пролиферативного по115тенциала паренхимы печени с использованием иммуногистохимического метода изучили уровень экспрессии активатора апоптоза каспазы-3, антиапоптотического фактора Bcl-2, ядерных маркеров пролиферации Ki-67 и PCNAв препаратах печени крыс.
На фоне формирования острого повреждения вмикропрепаратах печени животных происходило усиление экспрессии каспазы-3, свидетельствующее об активации апоптоза. Эффект ЛБК-527 проявлялся почти полным отсутствием окрашивания мембран и цитоплазмы гепатоцитов как в центральном отделе дольки печени, так и на перефири.При курсовом внутрижелудочном введение ЛБК-527 наблюдалась гиперэкспрессией антиапоптотического регуляторного маркера Bcl-2 в цитоплазме гепатоцитов.Алкогольная интоксикация приводила к умеренной экспрессия Ki-67,что может говорить о компенсаторной активации защитных механизмов ткани на фоне формирующихся некрозов и воспалительной реакции.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
