Диссертация (1140465), страница 16
Текст из файла (страница 16)
На рисунке 4.18 представлены результаты наших измерений.Активность фермента в паренхиме печениинтактных крыс составляет всреднем 12,5±0,6IU/г ткани (рисунок 4.18). У животных с нарушением функциональной активности печенина фоне формирующегося алкогольного стеатогепатита регистрировали подавление ферментативной активности СОД бо95лее, чем в два с половиной раза, что было пропорционально снижению активности уровня каталазы в плазме крови животных.В 11,7В 13,96,7А 8,3Активность СОД в печениВ 11,8В 15,4*5,212,6024681012141618ЛБК-527 50 мг/кгЛБК-527 100 мг/кгЛХТ-8-16 60 мг/кгЛХТ-8-16 120 мг/кгАМ 30 мг/кгАМ 60 мг/кгКонтроль ОАПИнтактные крысы20Примечание: * - различия при сравнении с интактными крысами статистически достоверны при р<0,05;А– различия при сравнении с группой контроляи интактными крысами статистически достоверны при р<0,05;В– различияпри сравнении с группой контроля статистически достоверны при р<0,05(одномерный дисперсионный анализ, критерий Ньюмена-Кейлса)Рисунок 4.18 Активность фермента супероксиддисмутазы (СОД, IU/г) впечени крыс с ОАП96В группах животных с ОАП, получающим в качестве фармакологического сопровождения препарат сравнения наблюдали гиперактивацию тканевой СОД на фоне обеих исследуемых доз.Внутрижелудочное введение фармацевтической композиции, содержащей деанола ацеглумат и альфа-липоевую кислоту, в дозе 120 мг/кг приводило к повышению активности фермента антиоксидантной защиты присравнении с группой контрля, однако не достигало показателя интактныхкрыс.
Снижение в два раза вводимой внутрь дозы вещества сопровождалосьпотерей активирующего влияния на уровень активности СОД (рисунок 4.18).При введении животным с острым гепатитом алкогольного происхождения вещества ЛБК-527 мы установили более выраженный профилактический эффект, не уступавший по силе эффекту референтного гепатопротекторного лекарственного средства в сопоставимых дозах.Исследование отдельных элементов системы ПОЛ хотя и позволяетсделать выводы о функциональном состоянии или преобладании того илииного ее звена, тем не менее не всегда отвечает запросам исследователя.Обозначенным условиям отвечают интегративные показатели – общая антирадикальная активность (ОАА) ткани и общая оксидативная активность(ООА) ткани – определяемые по интенсивности световспышки хемилюминисцентным методом в модельной системе, в которой индуктором процессовПОЛ выступает железо – металл переменной валентности. Результаты исследования суммированы в таблице 4.8.В ткани печени интактных животных определили сбалансированные независящие от пола показатели антирадикальной и оксидативной активности,составившие соответственно 15,96±2,13 и 16,74±3,35 имп/с.На 8 сутки после начала курсового внутрижелудочного введения животным раствора этилового спирта отмечали значительный рост свободнорадикальной активности паренхимы органа – до 73,15±4,62 имп/с, тогда какуровень антиоксидантных систем падал до 6,54±1,15 имп/с.
Полученные ре-97зультаты в целом соответствовали изменения системы ПОЛ на уровне плазмы крови.Таблица 4.8Показатели интенсивности световспышки ткани печеникрыс с ОАПИнтенсивностьсветовспышкиГруппа, доза веществаM±SD, имп/сИнтактные животные16,74±3,35Контроль ОАП73,15±4,62*Общая оксидативная актив-60 мг/кг20,88±3,72В30 мг/кг48,53±4,12А120 мг/кг47,35±2,65А60 г/кг64,17±5,52*100 мг/кг28,41±3,14В50 мг/кг36,55±4,17ВИнтактные животные15,96±2,13Контроль ОАП6,54±1,15*АМность печеночнойтканиЛХТ-8-16ЛБК-527Общая антиоксидантная активность ткани печенияАМЛХТ-8-16ЛБК-52760 мг/кг17,68±1,46В30 мг/кг10,40±1,38А120 мг/кг14,29±0,57В60 мг/кг8,08±0,43*100 мг/кг18,29±1,57В50 мг/кг13,58±1,02ВПримечание: * - различия при сравнении с интактными крысами статистически достоверны при р<0,05; А – различия при сравнении с группой контроля иинтактными крысами статистически достоверны при р<0,05; В – различия присравнении с группой контроля статистически достоверны при р<0,05 (одномерная дисперсия Шапиро-Уилка, критерий Ньюмена-Кейлса)98Внутрижелудочное введение в течение 7 суток препарата сравнения Sаденозил-L-метионина в обеих изученных дозах способствовало восстановлению исходного баланса свободнорадикальной тканевой активности, чтобыло наиболее заметно при введении препарата в высшей терапевтическойдозе.
В группе животных, получавших референтный гепатопротектор в дозе30 мг/кг, антиоксидантная активность вещества сохранялась.Исследуемыецитопротекторы – ЛБК-527 и ЛХТ-8-16 – также обладали антирадикальнойактивностью Наибольший антиоксидантный эффект в виде снижения активности ПОЛ и пропорционального роста антиокислительной активности мырегистрировалипривведениимагнийсодержащегодеривата2-аминоэтансульфоновой кислоты в дозе 100 мг/кг. Наименьшая способность ксдерживанию процессов оксидативного стресса отмечалась в группе крыс,получавших фармацевтическую композицию ЛХТ-8-16 в минимальной дозе.Таким образом, 7-суточное введение животным токсических доз этанола приводит к декомпенсации системной и локальной антирадикальной активности,проявляющейсяподавлениемактивностиферментов-антиоксидантов каталазы и СОД и повышением плазменной концентрацииТБК-зависимых продуктов ПОЛ.
Запуск тканевого оксидативного стресса,влекущего нарушение целостности клеточных мембран гепатоцитов, сопровождается формированием активного цитолитического и холестатическогосиндромов. Фармакологическое воздействие на печень животных веществами с цитопротекторной активностью ЛХТ-8-16 и ЛБК-527, осуществляемоепараллельно с формированием патологического процесса позволяет сдерживать повреждающее действие этанола в отношении как свободнорадикальныхреакций, так и биохимических проявлений печеночного повреждения.Наиболее эффективным гепатопротекторным эффектом при этом обладаетсоединение ЛБК-527, которое по изучаемым характеристикам не уступаетгепатопротектору с доказанной активностью S-аденозил-L-метионину.995.
ИССЛЕДОВАНИЕ НЕКОТОРЫХ МОЛЕКУЛЯРНЫХ ИКЛЕТОЧНЫХ МЕХАНИЗМОВ ЗАЩИТЫ ПЕЧЕНИ ПРИ ЕЁАЛКОГОЛЬНОМ ПОВРЕЖДЕНИИКак мы уже отмечали в первой главе настоящего исследования в основе формирования острого алкогольного стеатогепатита лежит сложный каскад патологических процессов, включающий активацию внутриклеточныхсвободнорадикальных процессов, прямое повреждающее воздействие продуктов биодеградации этилового алкоголя на субклеточные структуры паренхимных клеток органа, ФНО-альфа опосредованный запуск воспалительных реакций и активация апоптоза гепатоцитов.
Вместе с тем, в предшествующих разделах нашего исследования мы показали высокую гепатопротекторную активность отечественных перспективных соединений, одно из которых представляет собой фармацевтическую композицию деанола ацеглуматаи альфа-липоевой кислоты, а другое является магнийсодержащим производным 2-аминоэтансульфоновой кислоты. Показанный эффект проявлялся как впредотвращении формирования морфологических – макро- и микроструктурных – изменений органа, свойственных острому алкогольному процессу,активации системных и локальных гидроперекисных процессов, так и в профилактике цитолитического и холестатического синдромов, нарушения пигментной функции печени.
В этой связи представляло большой научный ипрактический интерес изучение роли некоторых ключевых молекулярнобиологических клеточных маркеров в реализации установленныхэффектов.5.1 Изучение уровня ФНО-альфа, ИЛ-10 и ФРГ при остром алкогольномповреждении и воздействии исследуемых веществ методом ИФАВыбор данной панели цитокинов был обусловлен их критической ролью как в развитии алкоголь-индуцированного повреждения печени, так и вактивации защитных – противовоспалительных и регенеративных реакций[12].
Результаты определения уровня ФНО-альфа, ИЛ-10 и ФРГ в гомогенатетканиорганаживотных100представленынарис.5.19.пг/млпг/мл30пг/мл251* 26,19А 0,8725А 19,08200,8* 0,610,720А 17,3715А 0,840,9В 12,5715В 14,2213,210,5В 13,-0410,59100,4100,3* 3,7655* 0,520,6В 13,720,160,20,100ИнтактныеживотныеКонтроль ОАП АМ 60 мг/кг/сут ЛХТ-8-16 120мг/кг/сутФНО-альфаЛБК-527 100мг/кг/сут0ИнтактныеживотныеКонтроль ОАП АМ 60 мг/кг/сут ЛХТ-8-16 120мг/кг/сутЛБК-527 100мг/кг/сутИЛ-10ИнтактныеживотныеКонтроль ОАПАМ 60мг/кг/сутЛХТ-8-16 120мг/кг/сутЛБК-527 100мг/кг/сутФРГПримечание: * - различия при сравнении с интактными крысами статистически достоверны при р<0,05; А – различия присравнении с группой контроля и интактными крысами статистически достоверны при р<0,05; В – различия при сравнении с группой контроля статистически достоверны при р<0,05 (одномерная дисперсия Шапиро-Уилка, критерий Ньюмена-Кейлса)Рисунок 5.19 Концентрация некоторых цитокинов в гомогенате печени при остром алкогольном повреждении нафоне соединений ЛБК-527 и ЛХТ-8-16101Концентрация изучаемых регуляторных молекул в гомогенате печениздоровых животных составила (рис.
5.19): ФНО- альфа 10,59±0,57, ИЛ-10 –13,21±2,45 и ФРГ – 0,16±0,02 пг/мл. Через 7 суток после курсового ежедневного внутрижелудочного введения животным раствора этилового спиртанаблюдали повышение тканевой концентрации ФНО-альфа более, чем в два споловиной раза – в среднем до 26,19 пг/мл (р=0,001 при сравнении с интактными животными) на фоне почти четырехкратного снижения уровня противовоспалительного цитокина – ИЛ-10 до 3,76 пг/мл (р=0,001 при сравнении синтактными животными). При этом происходило пропорциональное (четырехкратное) увеличение тканевой концентрации фактора роста гепатоцитов –до 0,61 пг/мл (р=0,001 при сравнении с интактными животными), что мырасценили как компенсаторную реакцию, направленную на формированиегипертрофии гепатоцитови их функциональное замещение в ответ на алкоголь-индуцированную гибель гепатоцитов.ВнутрижелудочноекурсовоевведениепрепаратасравненияS-аденозил-L-метионина в дозе 60 мг/кг сопровождалось восстановлениемуровня иммунного воспалительного триггера – ФНО-альфа до значений интактных животных.
Также до уровня здоровых крыс восстанавливалось итканевое содержание противовоспалительного цитокина ИЛ-10. Курсовоевведение референтного лекарственного препарата приводило к еще большейактивации гипертрофических процессов в органе, о чем свидетельствовалоповышение содержания ФРГ дов среднем 0,87 пг/мл, что было статистическидостоверным при сравнении как с интактными, так и с контрольными животными (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
