Диссертация (1140465), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Избегали повторного размораживания образцов. При необходимости, перед исследованием размороженных образцов их центрифугировали.Использовали исследовательский диагностический набор производстваCUSABIOBIOTECHCo., LTD(США), более детальная информация о котором, представлена в таблице 2.1. Предельный диапазон обнаружения и единицы измерения – ФНО-а - 6,25 – 400,0 пг/мл, ИЛ-10 – 3,12 – 200,0 пг/мл,ФРГ – 0,12 – 5,0 пг/мл.Для исследования использовали автоматический микропланшетныйридер StatFax 4200 (США).2.5.4 Методы исследования активности свободнорадикальных процессовв печени и кровиО состоянии перекисного окисления липидов (ПОЛ) судили по уровнюмалоновогодиальдегида(МДА), железо-индуцированногомалоновогодиальдегида (Fe-МДА) и активности каталазы в крови, а в гомогенатах тканей печени крыс определяли еще и активность фермента супероксиддисмутазы (СОД).
Кровь забирали на 8 сутки эксперимента из левого желудочканаркотизированных крыс второй подгруппы каждой исследуемой группы.Печень для гомогенизирования также забирали у крыс второй подгруппы64животных в каждой исследуемой группе.Определение продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в сыворотке крови и гомогенатах печени крыс проводили путем измерения содержания малонового диальдегида (МДА) и Fe-индуцированного МДА (с добавлениемFeSO4) в реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) с использованием набора реактивов для определения ТБК-активных продуктов фирмы«Агат-Мед» (Москва) по стандартной методике, включающей в себя инкубацию с ТБК исследуемой пробы, экстракцию продуктов реакции бутанолом испектрофотометрическое измерение их содержания.Методика определения активности каталазы в изучаемой среде поМ.А.
Королюк (1988).Сущность метода заключаетсяв химической реакциимежду перексидом водорода и молибденовокислым аммонием в неокрашенных или слабо-окрашенных растворах.Активность супероксиддисмутазыопределяли по степени ингибирования восстановления нитросинего тетразолия супероксидом, образующимсяпри взаимодействии феназинметасульфата и восстановленного никотинамидаденин фосфата.Метод исследования антиокислительной активности ткани печеникрыс. Определение интенсивности ПОЛ и антиокислительной активности(АОА) в гомогенате тканипечени крыс хемилюминесцентным методом [213].Метод индуцирования хемилюминесценции перекисью водорода с сульфатом железа основан на том, что в представленной системе происходит каталитическое разложение перекиси ионами металла переходной валентности(2-х валентный катион железа).
Образующиеся при этом свободные радикалывступают в процесс инициации ПОЛ в исследуемом биологическом субстрате. Интенсивность ПОЛ определяется по значению светосуммы за 60 сек наприборе «Emilite»-EL 1105 (США). Величина, обратная этому объему представляет собой АОА пробы. Степень подавления люминесценции свидетельствует о суммарной АОА, включающей в себя антирадикальную, антиперекисную активность, а также активность ферментов-антиоксидантов, белко65вых антиоксидантных систем и наличие ионов металлов, разлагающих перекисные и гидроперекисные соединения.2.5.5 Методы статистической обработки результатов исследованияНа заключительном – аналитическом – этапе работы проводили статистическую сводку первичных данных, заносили их в статистические таблицы, формировали электронные балы данных. На последующем этапе анализа полученных результатов осуществляли расчет средних абсолютных иотносительных величин, коэффициентов, ошибок репрезентативности,среднеквадратических отклонений.
В зависимости от используемого метода, объема исследуемых групп, а также математического вида регистрируемого показателя использовали различные методы вариационной статистики,рекомендованные для анализа результатов экспериментальных исследований [214, 215].При сравнении количественных признаков проводили дисперсионныйанализ для оценки нормальности распределения с последующим использованием критерия t Стьюдента или, в случае сравнения более двух совокупностей, после осуществления одномерного дисперсионного анализа применяли функциональные возможности критериев оценки множественныхсравнений Ньюмена-Кейлса или Даннета. Достоверность результатов сравнения качественных признаков оценивали с помощью непараметрическоготочного критерия Фишера. При изучении различий признаков до и послевоздействия применяли критерий Уилкоксона при 5% уровне значимости.Для изучения патогенетического потенциала отдельных факторов вформировании исходов применения фармакологически активного агентаиспользовали метод линейной логистической регрессии, в форме его частного приложения «ROC-анализ» и метод отношения шансов.Вычисления осуществляли на персональном компьютере AppleiMacсиспользованиемлицензионногопрограммного«SPSS»®, версия 16.0.66продукта«BioStat»®,3.
МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕЧЕНИ КРЫС СОСТРЫМ АЛКОГОЛЬНЫМ ПОВРЕЖДЕНИЕМ НА ФОНЕВОЗДЕЙСТВИЯ ИССЛЕДУЕМЫХ ВЕЩЕСТВВ соответствие с протоколом исследования после выведения животных из эксперимента печень крыс извлекалась, осуществлялся ее осмотр,взвешивание, после чего проводили секцию органа, фиксацию его фрагментов с последующей гистологической проводкой для проведения микроморфологического и иммуногистохимического исследования.
Рассчитывали абсолютную и относительную массу органа у животных всех включенных висследование групп.3.1 Макроскопические изменения печени животных с острымалкогольным повреждением на фоне внутрижелудочного введенияЛБК-527 и ЛХТ-8-16Печень животных интактной группы была красно-коричневого цвета,с острыми краями, гладкой, блестящей поверхностью и гомогенной на срезе(рис.
3.8 а). Крысы с острым алкогольным повреждением имели увеличенную, плотную, ярко-желтую как на поверхности, так и на разрезе, с красноватыми или окрашенными желчью участками печень, края органы были закруглены (рис. 3.8 б). Печень животных, получавших ЛБК-527 в дозах 100 и50 мг/кг не отличалась по своим размерам от интактной группы (рис.
3.8 г).Подобная макроскопическая картина была обнаружена у крыс, находившихся под экспериментальным воздействием препарата сравнения Sаденозил-L-метионина.Макроскопическая картина органа животных, на фоне профилактического внутрижелудочного введения ЛХТ-8-16 в дозах 120 и 60 мг/кг, былаблизка к нормальной, однако наблюдались единичные зоны просветленияпаренхимы печени (рис. 3.8 в).67а) Интактная группаПечень красно-коричневого цвета,с острыми краями, гладкой, блестящей поверхностью и гомогеннаяб) Острое алкогольное повре-ждениение ЛХТ-8-16, 120 мг/кг/сутУвеличенная, плотная, с закругленными краями печень, яркожелтая как на поверхности, так ина разрезе, с красноватыми илиЛБК-527, 100 мг/кг/сутг) Алкогольный гепатит +в) Профилактическое введе-на срезеокрашенными желчью участкамиПечень красно-коричневого цвета,с острыми краями, гладкой, блестящей поверхностью и гомогенной на срезе, единичные зоны просветленияПечень красно-коричневого цвета,с острыми краями, гладкой, блестящей поверхностью и гомогенной на срезеРисунок 3.8 Внешний вид печени при остром алкогольном повреждении на фоне введения исследуемых соединений ЛБК-527 и ЛХТ-8-16(стрелками указаны очаги просветления)68При анализе абсолютной и относительной масс органа животных исследуемых групп, установили статистически значимые различия по обоимизучаемым показателям в зависимости, как от формирующегося патологического процесса, так и примененного метода фармакологического воздействия (табл.
3.2). В частности, у крыс-самцов контрольной группы к моменту завершения эксперимента наблюдалось увеличение массы тела, достигавшее статистической значимости при сравнении с интактными животными. В подгруппе самок, хотя и отмечали рост данного показателя, однако онсохранялся в рамках тенденции. При этом, как у самцов, так и самок регистрировали рост веса печени, причем в группе самцов орган увеличивался ввесе в среднем на 83%, а в группе самок – на 74% по сравнению с интактными животными соответствующего пола. Происходили и пропорциональные изменения показателя относительной массы органа.Профилактическое введение фармацевтической композиции с шифром ЛХТ-8-16 в высшей терапевтической дозе сопровождалось предотвращением увеличения размера печени у самцов и самок, однако, не влияло нанабор ими массы тела, что, в конечном счете отражалось на значении относительного индекса: он был меньшим, чем в контрольной группе и воспроизводил соотношение масс, наблюдаемое у интактных крыс.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
