Автореферат (1140464), страница 5
Текст из файла (страница 5)
400): а) печень крысы с ОАП (контроль); печенькрысы с алкогольным процессом на фоне: б) АМ в дозе 60 мг/кг/сут; в) ЛХТ-8-16 в дозе120 мг/кг/сут; г) ЛБК-527 в дозе 100 мг/кг/сут; иммунопероксидазная реакция3,532,521,510,50Медиана индекса пролиферации %Интактные животныеКонтроль ОАПЛХТ-8-16 120 мг/кг/сутЛБК-527 100 мг/кг/сутАМ, 60 мг/кг/сутРисунок 4 – Значение индекса пролиферации (по уровню экспрессии Ki-67) в печени крысисследуемых групп16Профилактическое введение ЛБК-527 сопровождалось повышением экспрессии маркерапролиферации в перипоральных зонах дольки, что свидетельствует о наличие пролиферативного потенциала у данного соединения.Острое алкогольное поражение печени характеризовалось значительным ростом сывороточной концентрации АСТ и АЛТ с одновременной элевацией ферментативной активностиГГТП, что свидетельствовало о формировании активного алкогольного гепатита с выраженнымцитолитическим синдромом и коррелировало с результатами морфологического исследования(табл.
3). Рост концентрации общего билирубина в плазме периферической крови на фоне повышения активности ЩФ являлось подтверждением наличия холестатического синдрома .Гепатопротекторные свойства ЛБК-527 проявлялись в значительном при сравнении сконтролем снижении уровней аминотрансфераз на фоне заметного ослабления активностиГГТП. В исследуемых дозах соединение ЛБК-527 предотвращало рост ферментативной активности ЩФ и плазменной концентрации общего билирубина. Профилактика холестаза и значимое снижение ферментемии внутриклеточных энзимов доказывало выраженный цитопротекторный эффект исследуемых веществ в отношении паренхиматозных клеток печени, причем уЛБК-527 в обеих изученных дозах.
Полученные результаты могут являться обоснованиемутверждения о большей широте терапевтического действия ЛБК-527.Внутрижелудочноекурсовоевведениемагнийсодержащегопроизводного2-аминоэтансульфоновой кислоты в дозах 100 и 50 мг/кг/сут сдерживает алкоголь-зависимую активацию тканевого и системного ПОЛ (табл.
4), повышает активность локальных (по уровнюактивности СОД) и системных (по активности каталазы) антирадикальных механизмов, снижает активность цитолитического и холестатического синдромов и по силе фармакологическогоэффекта не уступают препарату сравнения S-аденозил-L-метионину.Также в контроле регистрировали снижение сывороточной активности каталазы и тканевого уровня СОД на фоне значительного увеличения содержания продуктов ПОЛ в крови, чтоговорило о декомпенсации антиоксидантного потенциала.
Наблюдалась депрессия общей антирадикальной активности печени на фоне роста интенсивности ПОЛ. Фармакологическое воздействие на печень животных веществом с цитопротекторной активностью и ЛБК-527 позволяет сдерживать повреждающее действие этанола в отношении как свободнорадикальных реакций, так и биохимических проявлений печеночного повреждения.Методом количественного ИФА определили в гомогенате печени уровни ФНО-альфа,ИЛ-10 и ФРГ (рис. 5).
Выбор данной панели цитокинов был обусловлен их критической рольюкак в развитии алкоголь-индуцированного повреждения печени, так и в активации защитных –противовоспалительных и регенеративных реакций.17Таблица 3Значения некоторых биохимических показателей функции печени (MSD) на фоне острого алкогольного воздействия и введенияисследуемых веществАСТАЛТБилирубинОбщий белокЩФГГТПГруппаU/лU/лмкмоль/лг/лU/лU/лИнтактные13,8±2,311,3±1,46,5±1,228,5±2,3219,5±8,51,1±0,3Контроль с ОАП281,7±5,2*69,1±2,2*27,5±2,2*23,25±3,7293,6±6,1*7,1±0,7*ОАП, АМ в дозе 60мг/кг117,8±6,5А40,0±4,3А9,2±1,5В28,4±1,0132,3±7,7А1,2±0,2ВОАП, АМ в дозе 30мг/кг155,7±4,3А46,7±3,9А11,8±1,5А31,6±1,9207,1±5,6В2,3±0,2АОАП, ЛХТ-8-16 вдозе 120 мг/кг152,3±3,8А52,2±3,1А11,5±1,2В29,2±1,5287,8±4,7*1,5±0,2ВОАП, ЛХТ-8-16 вдозе 60 мг/кг216,3±8,3А60,7±4,8*13,5±3,2В26,5±2,3276,5±5,1*3,2±0,5АОАП, ЛБК-527 вдозе 100 мг/кг119,6±3,1А47,2±3,6А8,2±1,4В29,8±2,2211,0±3,4В2,2±0,5ВОАП, ЛБК-527 вдозе 50 мг/кг128,7±4,6А45,8±2,7А12,4±1,7В25,7±3,1224,9±7,9В2,9±0,3ВживотныеПримечание: * - различия при сравнении с группой интактных животных статистически достоверны при р<0,05;с группами интактных и контрольных животных статистически достоверны при р<0,05;В– различия при сравнении– различия при сравнении с группой контроля ста-тистически достоверны при р<0,05 (одномерный дисперсионный анализ, критерий Даннета)18АТаблица 4Показатели интенсивности световспышки ткани печени крысИнтенсивностьГруппа, доза веществаM±SD, имп/ссветовспышкиИнтактные животные16,74±3,35Контроль ОАП73,15±4,62*Общая оксидативная60 мг/кг20,88±3,72ВАМ30 мг/кг48,53±4,12Аактивность печеночной120 мг/кг47,35±2,65АЛХТ-8-16ткани60 г/кг64,17±5,52*100 мг/кг28,41±3,14ВЛБК-52750 мг/кг36,55±4,17ВИнтактные животные15,96±2,13Контроль ОАП6,54±1,15*60 мг/кг17,68±1,46ВАМОбщая антиоксидантная30 мг/кг10,40±1,38Аактивность ткани печени120 мг/кг14,29±0,57ВЛХТ-8-1660 мг/кг8,08±0,43*100 мг/кг18,29±1,57ВЛБК-52750 мг/кг13,58±1,02ВПримечание: * - различия при сравнении с интактными крысами статистически достоверны прир<0,05;А– различия при сравнении с группой контроля и интактными крысами статистическидостоверны при р<0,05;В– различия при сравнении с группой контроля статистически досто-верны при р<0,05 (ANOVA, критерий Ньюмена-Кейлса)У крыс контрольной группы наблюдали повышение тканевой концентрации ФНО-альфаболее, чем в два с половиной раза на фоне почти четырехкратного снижения уровня ИЛ-10.
Приэтом происходило пропорциональное увеличение концентрации фактора роста гепатоцитов, чтобыло расценено нами как компенсаторная реакция по активации процессов гипертрофии клетокпечени в ответ на алкоголь-индуцированную гибель гепатоцитов. Введение препарата сравнения, а также ЛБК-527 в высших дозах сопровождалось восстановлением уровня иммунноговоспалительного триггера – ФНО-альфа до значений интактных животных. Также до уровняздоровых крыс восстанавливалось и тканевое содержание противовоспалительного цитокинаИЛ-10. Введение ЛБК-527 приводило к еще большей активации гипертрофических процессов воргане, о чем свидетельствовало повышение содержания ФРГ выше уровня контрольных животных, тогда как композиция ЛХТ-8-16 ограничивалась некоторым снижением концентрацииФНО-альфа и восстановлением концентрации ИЛ-10 до уровня интактных животных.При изучении активности фармацевтической композиции ЛХТ-8-16 в дозах 60 и 120мг/кг, мы получили следующие результаты.
Композиция ЛХТ-8-16 сдерживала рост абсолютной и относительной массы печени на фоне воздействия этанола при введении в высшей19пг/млпг/мл30пг/мл251* 26,19А 0,8725А 19,08200,8* 0,610,720А 17,3715А 0,840,915В 14,2213,21В 13,720,5В 13,04В 12,5710,59100,4100,355* 0,520,60,160,2* 3,740,10Интактные Контроль ОАПживотныеАМ 60мг/кг/сутЛХТ-8-16 120 ЛБК-527 100мг/кг/сутмг/кг/сутФНО-альфа0Интактные Контроль ОАПживотныеАМ 60мг/кг/сутЛХТ-8-16 120 ЛБК-527 100мг/кг/сутмг/кг/сут0Интактные Контроль ОАПживотныеИЛ-10АМ 60мг/кг/сутЛХТ-8-16 120 ЛБК-527 100мг/кг/сутмг/кг/сутФРГПримечание: * - различия при сравнении с интактными крысами статистически достоверны при р<0,05; А – различия при сравнении с группой контроля и интактными крысами статистически достоверны при р<0,05;В– различия при сравнении с группой контроля статистическидостоверны при р<0,05 (ANOVA, критерий Ньюмена-Кейлса)Рисунок 5– Концентрация некоторых цитокинов в гомогенате печени при остром алкогольном повреждении на фоне соединенийЛБК-527 и ЛХТ-8-1620терапевтической дозе 120 мг/кг (табл.
1). При введении вещества в дозе 60 мг/кг масса печени,хотя и была меньшей, чем в контроле, но не достигала уровня интактных животных.Дозозависимый характер гепатопротекторного действия композиции проявлялся и намикроструктурном уровне. Тканевая и клеточная реакция печени крыс на фоне введения ЛХТ8-16 в дозе 120 мг/кг отличалась меньшей интенсивностью дистрофически-деструктивных процессов, большей сохранностью печеночной паренхимы, сохранением дольковой и балочнойструктуры печени, снижением интенсивности лейкоцитарной реакции (минимальная воспалительная реакция по шкале Кноделя) (табл. 2).При снижении дозы выраженность патологических изменений значительно нарастала:встречались бесструктурные гепатоциты в виде мелкозернистых слабобазофильных масс, между которыми видны явления слабой или умеренной лейко- и лимфоцитарной инфильтрации.При морфометрическом анализе препаратов, окрашенных суданом-III, также было видно, что композиция ЛХТ-8-16 в высшей дозе достоверно снижает долю гепатоцитов с жировыми включениями в цитоплазме и площадь цитоплазмы (рис.
1), занятой липидными каплями,тогда как на фоне введения ЛХТ-8-16 в дозе 60 мг/кг такого эффекта не наблюдали. Снижениеактивности цитолиза, наблюдаемое при введении композиции в высшей терапевтической дозепротекает на фоне сохраняющегося холестаза (табл. 3).При проведении иммуногистохимического исследования было установлено незначительное влияние композиции на процессы апоптоза гепатоцитов и клеточной пролиферации:экспрессия каспазы-3 умеренно снижалась (рис. 2), тогда как площадь и интенсивность окрашивания микропрепаратов, обработанных антителами к Ki-67, Bcl-2 и PCNA не отличались отконтроля (рис.
3, 4). Внутрижелудочное курсовое введение фармацевтической композицииЛХТ-8-16 в дозе 120 мг/кг/сут умеренно сдерживает алкоголь-зависимую активацию тканевогои системного ПОЛ, что не компенсируется повышением активности локальных (по уровню активности СОД) и системных (по активности каталазы) антирадикальных механизмов (табл. 4).Фармацевтическая композиция ЛХТ-8-16 также оказывала умеренное влияние на тканевые уровни исследуемых цитокинов: так, под действием композиции происходило снижениеконцентрации ФНО-альфа при сравнении с контрольными значениями, однако депрессия показателя не достигала уровня интактных животных.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
