Автореферат (1140464), страница 2

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 2)

Повышение экспрессии каспазы-3 и снижение количества Bcl-позитивно окрашенных гепатоцитов на фоне отсутствия клеток, экспрессирующих ядерные факторы Ki-67 иPCNA, свидетельствует об активации на фоне острой алкогольной нагрузки животных апоптозагепатоцитов и подавления процессов клеточной регенерации. Все вышеописанные процессымогут рассматриваться как патологические мишени для лекарственных средств с цитопро4текторной активностью.Впервые показано, что внутрижелудочное курсовое введение магнийсодержащего соединения 2-аминоэтансульфоновой кислоты ЛБК-527 и фармацевтической композиции ЛХТ-816 в дозах, пропорциональных 5 и 2,5% от показателя ЛД50, определенного при данном путивведения, ведет к сохранению макроструктуры органа, долькового строения и балочной структуры паренхимы печени, профилактике гибели печеночных клеток (отсутствие некроза или минимальный некроз по шкале Кноделя), снижению интенсивности дистрофии гепатоцитов преимущественно центра дольки и ослаблению активности воспаления.

Гепатопротекторное действие вещества ЛБК-527 и фармацевтической композиции ЛХТ-8-16 на фоне формированияэкспериментального острого алкогольного поражения печени проявляется в профилактике алкоголь-опосредованного цитолиза и холестаза и обусловлено подавлением свободнорадикальной активности паренхимы органа с пропорциональной активацией антиокислительного потенциала ткани. Установлено, что соединение ЛБК-527 в дозе 100 мг/кг/сут в большей степени,чем ЛХТ-8-16, снижает тканевую концентрацию ФНО-альфа, восстанавливает до уровня интактных животных содержание противовоспалительного ИЛ-10, повышает экспрессию антиапоптотического фактора Bcl-2 на фоне гипоэкспрессии каспазы-3 и активирует пролиферативный потенциал гепатоцитов (по уровню Ki-67 и PCNA) главным образом в области перифериипеченочной дольки.Теоретическая и практическая значимость работыКомплексное изучение гистологических проявлений острого повреждающего действияэтилового спирта на печень, углубленное использование иммуногистохимических маркеровпрограммируемой гибели клеток и их пролиферации, наряду с исследованием процессов свободнорадикальной липопероксидации и антиокислительного потенциала, концентрации регуляторных молекул в паренхиме органа и его функционального состояния позволяют расширитьсовременные представления о ключевых элементах развития патологического процесса, структурной перестройки органа, определить важнейшие биологические мишени для возможногопрофилактического и лечебного воздействия.Полученные результаты о молекулярно-клеточных механизмах протекторного действиямагнийсодержащего соединения 2-аминоэтансульфоновой кислоты, а также фармацевтическойкомпозиции на его основе, являются основанием для проведения углубленного доклиническогоисследования фармакокинетики и фармакодинамики веществ, их безопасности при системномприменении, разработки оптимальной лекарственной формы для приема внутрь в аспекте создания высокоэффективного отечественного гепатопротекторного лекарственного средства.Методология и методы исследованияВ качестве методологической основы исследования нами были взяты два фундаменталь5ных источника – статья Dolganiuc and Szabo «In vivo and in vitro models of acute alcoholexposure» (2009) и «Методические рекомендации по изучению гепатопротективной активностилекарственных средств» А.И.

Венгеровского и соавт. (2012). Модель острого алкогольного повреждения воспроизводили ежесуточным внутрижелудочным введением 40% раствора этилового спирта крысам в пересчете на 96% этанол в дозе 8 мл/кг веса животного в течение 7 суток.Для изучения макроструктурных изменений печени осуществляли внешний осмотр органа, его взвешивание. Проводили гистологическое изучение парафиновых срезов печени,окрашенных гематоксилин-эозином, а также морфометрический анализ.Для исследования процессов программируемой гибели гепатоцитов, состояния клеточной пролиферации использовали иммуногистохимический метод определения экспрессии Bcl2, каспазы-3, PCNA и Ki-67.Для исследования состояния ПОЛ в крови и ткани использовали методы определенияТБК-зависимых продуктов ПОЛ, активности каталазы, тканевого фермента-антиоксидантаСОД, с помощью метода индуцированной хемилюминисценции определяли общий антиоксидантный потенциал паренхимы печени.

Уровень гиперферментемии, холестаза, концентрациюбилирубина определяли с помощью автоматического биохимического анализатора с использованием стандартных биохимических методов. Тканевое содержание ФНО-альфа, ИЛ-10 и фактора роста гепатоцитов в печени изучали при помощи количественного ИФА.Связь диссертации с основными научными темами университетаДиссертационное исследование выполнялось в рамках Программы развития ФГБОУ ВО«МГУ им. Н.П. Огарѐва» по приоритетному направлению 1 «Технологии и новые материалы».Основные положения, выносимые на защиту1. Магниевая соль 2-аминоэтансульфоновой кислоты при внутрижелудочном введении вдозах, составляющих 5 и 2,5% от показателя ЛД50, снижает формирование макро- и микроскопических, иммуногистохимических признаков острого поражения печени у крыс. Одновременно с этим наблюдается умеренный цитолитический синдром без признаков холестаза на фонеподавления системной и тканевой активности гидроперекисных процессов и повышения антирадикального потенциала печеночной ткани.

В высшей терапевтической дозе 100 мг/кг в суткивещество ЛБК-527 снижает продукцию ФНО-альфа, активирует синтез противовоспалительныхцитокинов ИЛ-10 и фактора роста гепатоцитов.2. Фармацевтическая композиция ЛХТ-8-16 обладает гепатопротекторными свойствамилишь при введении в высшей терапевтической дозе – 120 мг/кг, что подтверждают макро- ,микроморфологические и иммуногистохимические изменения в ткани печени.

Снижение гиперферментемии крови сопровождается сохранением холестатического синдрома и высокойинтенсивностью тканевых процессов ПОЛ в печени, не компенсируемых ростом активности6ферментов-антиоксидантов. При этом умеренно снижается тканевая концентрации ФНО-альфа,и отмечается низкая активность композиции по стимуляции клеточной пролиферации.3. При сравнительном анализе морфофункциональных проявлений гепатопротекторногодействия исследуемых соединений с препаратом сравнения S-аденозил-L-метионина 1,4бутандисульфонатом установлено, что ЛХТ-8-16 уступает препарату сравнения по своей активности, тогда как вещество ЛБК-527 сопоставимо с ним по влиянию на макро- и микроструктурупечени, не уступает по противовоспалительной активности и способности снижать биохимическую активность поражения печени, превосходит по антирадикальной и антиапоптотическойактивности и стимуляции пролиферации при введении в высшей терапевтической дозе, и можетрассматриваться как альтернатива препарату сравнения в качестве средства патогенетическойтерапии острого алкогольного гепатита.Внедрение результатов в практикуНаучные результаты, представляющие высокую научную и практическую ценность,внедрены в образовательный и научно-исследовательский процесс учебных и научных подразделений Национального исследовательского Мордовского государственного университета им.Н.П.

Огарѐва: включены в программу лекционного курса по дисциплине «Патологическая анатомия» для студентов, обучающихся по специальностям «Лечебное дело», «Педиатрия» и«Фармация»; используются при проведении лекционных и семинарских занятий с ординаторами и аспирантами, проходящими обучение на кафедре цитологии, гистологии и эмбриологии скурсом молекулярной биологии клетки, нормальной и патологической анатомии с курсом судебной медицины по профилям направления подготовки «Фундаментальная медицина» и«Клиническая медицина».Результаты диссертационного исследования внедрены в работу научного семинара лабораторий лекарственной токсикологии и специфической активности Центра перспективных исследований инновационных лекарственных средств университета.Степень достоверности и апробация результатовДостоверность описанных в диссертационном исследовании результатов, сделанных выводов определяется соответствием проведенной работы биоэтическим требованиям при работес лабораторными животными, корректно проведенным обоснованием объема опытных и контрольных групп, применением традиционных, релевантных гистологических, фармакологических, биохимических, иммунологических и иммуногистохимических методов исследования сиспользованием современного научного оборудования исследовательского класса, прошедшегоплановую поверку, грамотно осуществленным сбором, учетом, группировкой и сводкой данных, применением параметрических и непараметрических критериев, апробированных шкалоценки степени структурных изменений с доказанными чувствительностью и специфичностью.7Апробация результатов диссертационной работы проводилась на расширенном совместном заседании кафедр нормальной и патологической анатомии с курсом судебной медицины,фармакологии и клинической фармакологии с курсом фармацевтической технологии, цитологии, гистологии, клеточной биологии с курсом молекулярной биологии клетки, факультетскойхирургии, лабораторий Центра перспективных исследований инновационных лекарственныхсредств ФГБОУ ВО «МГУ им.

Характеристики

Список файлов диссертации