Диссертация (1140408), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Подсчет колоний проводили на той чашке,где колонии росли изолированно и количество их не превышало 300.Количество микробов в 1 г ткани вычисляли по формуле: N = n * 10 * 10(или 100, или 1000 – в зависимости от разведения) * К, где N – количество43микробов на 1 г ткани биоптата; n - количество микробов, выросших в чашке, 10 –пересчет на 1 г суспензии, 10 (100 или 1000) – разведение материала, засеянногона чашку Петри, с которой ведется подсчет колоний; К – коэффициент пересчетанавески на 1 г биоптата. С целью подтверждения, что гнойная рана вызванаименно St. Aureus 592 и Е.
coli.изучили морфологические и культуральныесвойства.Микробиологическоемикробиологии,вирусологииисследованиеипроводилосьиммунологииГБОУнаВПОкафедреКГМУподконсультированием к.м.н., доцента Климовой Л.Г., за что выражаем ейискреннюю благодарность.2.7 Ионометрический методДля определения концентрации серебра в тканях брюшной стенки крыс наразличных сроках после эксперимента с использованием эндопротезов снанесением серебра проводили потенциометрическим методом на иономере сиспользованием ионоселективного электрода.
Разрушение органической частиобразцов, предварительно высушенных при температуре 150°С до постоянноймассы, осуществляли методом мокрого озоления концентрированной азотнойкислотой в присутствии 30% перекиси водорода при температуре 250°С.Окончательную минерализацию образцов проводили при температуре 450°С 30мин. Перед ионометрическим определением массовой доли ионов серебра,полученныйпослеозоленияосадокрастворялиприперемешиваниивэкстрагирующем растворе (2М KNO3, 2М гексаметилентетрамин и 0,01М ЭТДА в0,2% растворе HNO3), и выражали ее в мкг/г.
Окончательный объем минерализатасоставил 20 мл.Ионоселективный электрод имеет ионочувствительную мембрану котораядает возможность распознавать только конкретный тип ионов и предоставляетинформацию об их количестве, в виде электрического сигнала - потенциала,который связан с концентрацией определяемого иона в анализируемом растворе.442.8 Методы статистической обработкиПолученные, в результате представленных выше методик, цифровыеданные обрабатывались статистически с целью изучения статистическойзначимости расхождений средних величин в сравниваемых группах.
Послеопределениятипараспределенияданныхбылвыбранметодоценкидостоверности отличий по критерию Вилкоксона-Манна-Уитни. Решение принятона основании высоких значений скоса и эксцесса графиков распределенияданных, что свидетельствует о высоком отклонении от кривой Гауссовараспределения. Учитывая низкую чувствительность непараметрических методикк типу распределения, а также допустимый для экспериментальных медикобиологических исследований уровень р≤ 0,05, для подтверждения статистическойгипотезы был выбран именно такой уровень значимости.
Все вычислениявыполнялись с помощью аналитического пакета приложения Excel Office 2010,лицензией на право использования которой обладает ГБОУ ВПО КГМУМинздрава РФ. Учитывая большое количество образцов эндопротезов иопределяемых признаков, был применен метод ранжирования. Для установлениястепени параллелизма между одними количественными рядами изучаемыхпризнаков и взаимосвязи других проводили вычисление коэффициента ранговойкорреляции.45ГЛАВА 3.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ3.1 Результаты исследования реактивных изменений соединительной тканипередней брюшной стенки при имплантации образцов эндопротезов встерильных условияхНаблюдение за состоянием послеоперационных ран на 3 сутки показало,что при использовании эндопротезов «Эсфил», «Унифлекс», «Плазмофильтр»наблюдаласьгиперемиятканей,окружающихкожныйшов,отекпослеоперационного шва.При гистологическом исследовании тканей при использовании эндопротеза«Эсфил»после3сутокэкспериментанаблюдаетсяярковыраженныйинтерстициальный отек окружающих тканей. Плотность клеток не большая,отмечалась значительная площадь инфильтрата (таблица 3), клеточный индекссоставил при этом 0,46±0,03 (таблица 4).Таблица 3 - Динамика изменения площади воспалительно-клеточногоинфильтрата, M±, мм.2ЭндопротезУнифлекс AgЭсфил AgПлазмофильтрУнифлексЭсфил3-есутки7-есутки14-есутки21-есутки0,69±0,0250,44±0,0250,27±0,024,50,16±0,014,50,10±0,024,50,76±0,0350,53±0,1450,31±0,024,50,20±0,014,50,17±0,094,50,82±0,0450,50±0,0350,35±0,0250,11±0,014,50,09±0,064,50,88±0,0450,65±0,0450,47±0,021,2 0,32±0,021,2,31,13±0,031,2,3,4 0,73±0,031,2,3,4 0,54±0,021,2,3 0,40±0,031,2,330-есутки0,24±0,011,2,30,32±0,011,2,3Примечание: статистически значимые отличий при р≤0,05 по сравнению с эндопротезом:4Унифлекс Ag, 2 – Эсфил Ag, 3 –Плазмофильтр, –Унифлекс, 5 –Эсфил.Непосредственнонанитяхпротезарасполагаются1–многочисленныенейтрофилы и единичные фибробласты (рисунок 7).
Митотическая активностьсоставила 33,84%.46Рисунок 7 - Микрофотография ткани, окружающей эндопротез «Эсфил» на 3сутки эксперимента в стерильных условиях. Окр. Г+Э. А - ув. х 200. Б - ув. х 400В поле зрения преимущественно тучные клетки 0 и I типов, треугольнойформы с гиперхромными ядрами, располагающимися по центру. В ядрах хорошовизуализируются ядрышки с глыбками хроматина. Гигантских многоядерныхклеток нет (рисунок 8).Рисунок 8 - Микрофотография ткани, окружающей эндопротез «Эсфил» на 3сутки эксперимента в стерильных условиях. Окр. Г+Э. Ув.
х40047Приизучениимикропрепаратов,полученногопослеимплантацииэндопротеза «Унифлекс» наблюдалось асептическое воспаление в стадии разгара,но при этом площадь инфильтрата была меньше на 22,1%. В поле зренияпреобладали макрофаги, сегментоядерные нейтрофилы, единичные фиброциты ифибробласты. Митотическаяактивность фибробластов составила 38,85%. Вокружающей нити эндопротеза соединительной ткани в большом количественаходились тучные клетки 0 и I типов (рисунок 9).Рисунок 9 - Микрофотография ткани, окружающей эндопротез «Унифлекс» на 3сутки эксперимента в стерильных условиях.
Окр. Г+Э. Ув. х 400Интересноотметитьбольшоеколичествомитотическиделящихсяфибробластов, расположенных в непосредственной близости к нитям импланта.Принаблюдаетсяимплантацииэндопротезанейтрофильная«Плазмофильтр»инфильтрация,площадьвокругволоконвоспалительногоинфильтрата составляла при этом 0,82±0,04 мм2. В непосредственной близости книтям располагаются лимфоциты, нейтрофилы и фибробласты (рисунок 10). Их48митотическаяактивность составила 25,53%. Изменения отмечаются и междуотдельными филаментными нитями.Рисунок 10 - Микрофотография ткани, окружающей эндопротез «Плазмофильтр»на 3 сутки эксперимента в стерильных условиях. Окр. Г+Э.
А - ув. х 100. Б - ув. х200В тканях близких к протезу встречается большое количество тучных клеток,преимущественно в стадии накопления секрета (I типа). Гранулы хорошовизуализируются, контуры ядра четкие. Темнобазофильное ядро расположено вцентре с хорошо выраженным ядрышком. Непосредственно на нитях протезанаходились гигантские многоядерные клетки, мелких размеров, в оксифильнойцитоплазме которых находились 3-5 ядер (рисунок 11).При имплантации эндопротеза с антибактериальными свойствами «ЭсфилAg» плотность клеток значительно выше, по сравнению с эндопротезом «Эсфил».В поле зрения преобладают лимфоциты и нейтрофилы. Тучные клетки имеютовальную или треугольную форму, I типа, с четко выраженным ядром,располагаются не только вдоль кровеносных сосудов, но и в окружающейсоединительной ткани.
В непосредственной близости к нитям имплантавстречается большое количество активных макрофагов, фагоцитирующихчастицы серебра, значительное количество лимфоцитов, единичные фибробласты.Количество Ki-67-положительных клеток было 23,97% (рисунок 12).49Рисунок 11 - Микрофотография ткани, окружающей эндопротез «Плазмофильтр»на 3 сутки эксперимента в стерильных условиях.
Окр. Г+Э. Ув. х400Рисунок 12 - Экспрессия Ki-67 в области имплантации эндопротеза Эсфилна 3 сутки эксперимента в стерильных условиях. Иммуногистохимическаяреакция, DAB. Ув. х40050При этом клеточный градиент увеличивается в направлении от нитейпротеза к окружающим тканям. В поле зрения встречаются единичные гигантскиемногоядерные клетки, содержащие 3-4 ядра.Приизучениимикропрепаратов,полученногопослеимплантацииэндопротеза «Унифлекс Ag» признаки воспаления менее выражены, отекапрактически нет.
Площадь воспалительного инфильтрата, по сравнению сдругими эндопротезами достоверно меньше (р≤0,05) и составила 0,69±0,02 мм2(таблица 3). Клеточный состав представлен фибробластами, макрофагами илимфоцитами (рисунок 13,14). Индекс пролиферации составил 36,94%.Рисунок 13 - Микрофотография ткани, окружающей эндопротез «Унифлекс Ag»»на 3 сутки эксперимента в стерильных условиях. Окр. Г+Э. А - ув. х 100. Б - ув. х200Рисунок 14 - Микрофотография ткани, окружающей эндопротез «Унифлекс Ag»»на 3 сутки эксперимента в стерильных условиях. Окр. Ван Гизон.
А - ув. х 200. Б ув. х 40051В поле зрения имеются тучные клетки 2 и 3 типа, гигантские многоядерныеклетки, 1-2 в поле зрения, имеющие до 4-х ядер. Частицы серебра ещесохраняются непосредственно на нитях протеза или находятся возле них.Плотность клеток выше, чем при использовании протеза «Унифлекс», как встерильных, так и в условиях микробной обсемененности.Таблица 4 - Соотношение компонентов клеточного индекса на 3-исутки эксперимента при использовании различных эндопротезов встерильных условиях, M ± , у.е.ФиброФиброМакроЛимфоНейтро- Клеточныйцитыбластыфагицитыфилыиндекс15,1±0,344,5 11,7±0,33422,1±0,825 24,9±0,234,5 26,2±0,824,5 0,96±0,034,5Унифлекс Ag13,9±0,524,5 8,9±0,37420,9±0,375 26,7±0,334,5 29,6±0,634,5 0,77±0,024,5Эсфил Ag26,3±0,495 31,3±0,444,5 20,5±0,404,5 0,93±0,014,5Плазмофильтр 10,3±0,424,5 11,6±0,3741,2,31,3,53,4±0,265,8±0,6625,5±0,895 21,2±1,983,5 43,1±2,111,2,3,5 0,54±0,021,2,3Унифлекс5,9±0,781,2,3 12,1±1,684 13,8±1,981,2,3,4 62,1±2,11,2,3,4 6,1±0,961,2,3,4 0,46±0,031,2,3ЭсфилПримечание: статистически значимые отличий при р≤0,05 по сравнению с эндопротезом: 1 –4Унифлекс Ag, 2 – Эсфил Ag, 3 –Плазмофильтр, –Унифлекс, 5 –Эсфил.ЭндопротезТакимобразом,реактивныеизменениясоединительнойтканисоответствуют первой стадии воспаления – стадии экссудации и инфильтрации,являющейся ответной реакции на внедрение инородного тела – импланта.Интересно отметить, что степень выраженности морфологических измененийзависитотвидаимпланта,используемоговхирургическойпрактике.Использование имплантов с антибактериальным покрытием из серебра, вчастности «Унифлекс Ag», «Эсфил Ag» и «Плазмофильтр» приводит к снижениюплотности клеток на единицу площади в поле зрения,преимущественнолимфоцитов и макрофагов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
