Автореферат (1140392), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Сбор архивного материала, морфометрическое исследование, анализ и интерпретацияполученных данных проведены автором самостоятельно на базе кафедры «Анатомия человека»и кафедры «Клиническая морфология и судебная медицина с курсом онкологии» Пензенскогогосударственного университета. Вклад автора является определяющим в обсуждении результатов исследования в научных публикациях и их внедрении в практику.Внедрение результатов исследования в практикуОсновные положения работы используются при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедре «Клиническая морфология и судебная медицина с курсом онкологии»ФГБОУ ВО «Пензенский государственный университет» и в учебном процессе кафедры «Нормальная и патологическая анатомия с курсом судебной медицины» ФГБОУ ВО «Национальныйисследовательский Мордовский государственный университет им.
Н.П. Огарева».Соответствие паспорту научной специальностиДиссертация соответствует паспорту научной специальности 14.03.02 – Патологическаяанатомия, области исследования согласно пунктам 1, 2, 4 и 5.6Публикации материалов исследованияПо теме диссертации опубликовано 20 печатных работ, из них 8 в журналах из перечняизданий, рекомендованных ВАК РФ для публикации результатов диссертационных исследований, включая 7 оригинальных и 1 обзорную статью.Структура и объем диссертацииДиссертация изложена на 153 страницах машинописного текста и состоит из введения,обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических рекомендаций исписка литературы, состоящего из 247 источников, в том числе – 174 на русском и 73 на иностранных языках. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 52 рисунками.Содержание диссертационного исследованияМатериал и методы исследованияМатериалом морфологического исследования послужили оперативно уделенные щитовидные железы 753 больных обоего пола в возрасте от 21 до 74 лет из архива патологоанатомического отделения областной клинической больницы им Н.Н.
Бурденко за 2011-2012 годы. Повозрасту материал был разделен на следующие группы: 1) до 30 лет, 2) 31-40 лет, 3) 41-50 лет, 4)51-60 лет, 5) 61-70 лет, 6) старше 70 лет.Материал исследования по морфологической картине был разделен на 6 групп: 1) макромикрофолликулярный коллоидный нетоксический зоб (ММФНТЗ) (375 случаев), 2) макро-микрофолликулярный коллоидный токсический зоб (ММФТЗ) (49 случаев), 3) диффузный токсический зоб (ДТЗ) (147 случаев), 4) аутоиммунный тиреоидит (АТ) (62 случая), 5) аденома щитовидной железы (А) (75 случаев), 6) рак щитовидной железы (Р) (45 случаев).Из общего числа пациентов с патологией щитовидной железы для морфометрического исследования случайным образом были выбраны 199 случаев: 1) макро-микрофолликулярный коллоидный нетоксический зоб (ММФНТЗ) (70 случаев), 2) макро-микрофолликулярный коллоидный токсический зоб (ММФТЗ) (20 случаев), 3) диффузный токсический зоб (ДТЗ) (48 случаев),4) аутоиммунный тиреоидит (АТ) (21 случай), 5) аденома щитовидной железы (А) (23 случая), 6)рак щитовидной железы (Р) (17 случаев).Из удаленных щитовидных желез бралось по 3 фрагмента 0,5х1х1 см, которые проводились через батарею спиртов возрастающей концентрации с целью обезвоживания, затем заливались парафином.
С полученных блоков делались срезы толщиной 7-8 мкм, которые потом окрашивали гематоксилином – эозином. При помощи микроскопа Leica DM1000 и цифровой фотонасадки Nikon с каждого гистологического препарата было получено по 5 репрезентативных фотографий. Всего было изучено 2985 микрофотографий.На микрофотографиях с помощью программного пакета Digimizer v.4.2.0.0 измеряли высотуи ширину эпителиальных клеток; высоту и ширину ядер; продольный и поперечный диаметр7фолликулов и коллоида. На основании этих данных определялись площадь коллоида и площадь фолликулов, объем ядра, клетки и цитоплазмы. Определялось ядерно-цитоплазматическое отношение.Кроме количественных определялись и полуколичественные параметров: форма А-клеток;расположение и форма ядра; окрашивание ядра и цитоплазмы; наличие интрафолликулярной пролиферации эпителия; при наличии узлов оценивалось их строение и форма наличие кист; при наличии папиллярных структур изучались размер и форма сосочков; состояние коллоида; краевая вакуолизация; очаговая лимфоидная инфильтрация; диффузная инфильтрация; кровоизлияния.С помощью точечной сетки Г.Г.Автандилова (1990) определяли относительное количество эпителия, коллоида, стромы, лимфоидных клеток на условную единицу площади.Всего на микрофотографиях было изучено 72 количественных и полуколичественных параметров (591030 измерений).Для иммуногистохимического исследования парафиновые срезы были депарафинированы в ксилоле и регидратированы в серии растворов этанола понижающейся концентрации ифосфатном буфере.
Активность эндогенной пероксидазы блокировали методом погружения стекол с гистологическими срезами в 0,3% раствор перекиси водорода в дистиллированной воде.Гистологические срезы инкубировали с первичными антителами во влажной камере прикомнатной температуре 1 час. В качестве универсальных вторичных антител и системы визуализации использован коммерческий набор EnVision производства фирмы Dako. Затем проводилосьдокрашивание ядер гематоксилином.Оценку результатов иммуногистохимеческих реакций проводили с учетом локализации,распространенности и интенсивности окрашивания опухолевых клеток.
Позитивной распространенной считали умеренную или интенсивную реакцию цитоплазмы и/или ядер (для галектина3), цитоплазмы и /или цитоплазматических мембран (для НВМЕ-1 и цитокератина-19) более половины (50%) опухолевых клеток; позитивной очаговой (+) – умеренную или интенсивную реакцию более 10%, но менее 50% опухолевых клеток; сомнительной (+/-) – слабую очаговую реакцию менее 10% опухолевых клеток.
Позитивную реакцию со стороны цитоплазмы эндотелиальных клеток и/или макрофагов не учитывали.Полученные данные были обработаны вариационно-статистическими методами при помощи программного пакета IBM SPSS Statistics v.21. Полученные данные исследовали также спомощью парного непараметрического корреляционного анализа (по Спирмену), дисперсионного однофакторного анализа (по Шеффе) (Автандилов Г.Г., 1990; Лакин Г.Ф., 1990).Достоверность различий между группами определялась при помощи непараметрическогокритерия Колмогорова-Смирнова.
Различия считали достоверными при P<0.05. Проверка распределения полученных количественных данных проводилась по критерию Манна – Уитни. Распределение во всех группах было близко к нормальному.8С целью выявления основные закономерности изменения микроморфологии щитовиднойжелезы при разной ее патологии наиболее значимых параметров было применено математическое моделирование с помощью факторного анализа методом главных компонент.Полученные параметры микроморфологии щитовидной железы были проанализированытакже с пошагового дискриминантного анализа для выявления объективных критериев морфологической диагностики тиреоидной патологии.Результаты исследования и их обсуждениеЗа 2011-2012 гг.
число прооперированных больных по поводу заболеваний щитовиднойжелезы составило 753 человека, из них 668 (88,7%) женщины и 85 (11,3%) мужчин. Число лиц ввозрасте до 30 лет составило 42 (5,6%) человека (35 женщин и 7 мужчин), от 31 до 40 лет - 93(12,4%) человека (83 женщины и 10 мужчин), от 41 до 50 лет – 172 (22,8%) человека (146 женщини 26 мужчин), от 51 до 60 лет - 254 (33,7%) человек (231 женщина и 23 мужчины), от 61 до 70 лет- 164 (21,8%) человек (145 женщин и 19 мужчин), старше 70 лет - 28 (3,7%) женщин.При гистологическом исследовании ММФНТЗ был обнаружен в 375 (49,8%) случаях (352- у женщин и 23 - у мужчин); ММФТЗ - в 49 (6,5%) случаях (43 - у женщин, 6 - у мужчин); ДТЗ в 147 (19,5%) случаях (106 - у женщин, 41 - у мужчин); АТ - в 62 (8,2%) случаях (60 - у женщин,2- у мужчин); аденомы – в 75 (10,0%) случаях (68 - у женщин, 7 - у мужчин); раки - в 45 (6,0%)случаях (39 - у женщин, 6 - у мужчин) (Рисунок 1).В 2011 году наиболее часто выявлялись макромикрофолликулярный нетоксический зоб(47,1%) и диффузно-токсический зоб (21,8%).
Причем в 3-й, 4-й, 5-й и 6-й возрастных группахММФНТЗ преобладали над другими заболеваниями, а в 1-й и 2-й группах чаще встречался ДТЗ.Наибольший процент случаев ММФТЗ и раков наблюдался в 6-й возрастной группе, аденомыбыли чаще в 1-й группе больных, а АТ -в 3-й возрастной группе. У женщин все виды патологииво всех возрастных группах встречались чаще, чем у мужчин.При исследовании только количественных показателей структуры щитовидной железыгруппировка объектов исследования методом дискриминантного анализа показала достоверностьразличий между исследованными группами по данным показателям с точностью более 95%(P<0.05). Однако наблюдалось ошибочное отнесение показателей из группы ММФНТЗ в группуММФТЗ в 20% случаев, в группу АТ – в 4,3%; из группы ДТЗ в группу АТ – в 29,2%; из группы Рв А – в 17,6% случаев.При исследовании только количественных показателей структуры щитовидной железыгруппировка объектов исследования методом дискриминантного анализа показала достоверностьразличий между исследованными группами по данным показателям с точностью более 95%(P<0.05).
Однако наблюдалось ошибочное отнесение показателей из группы ММФНТЗ в группуММФТЗ в 20% случаев, в группу АТ – в 4,3%; из группы ДТЗ в группу АТ – в 29,2%; из группы Рв А – в 17,6% случаев.95071-80 лет21,467,7Возраст61-70 лет354,351-60 лет5,541,941-50 лет31-40 лет30,121-30 лет28,60%10%7,6030%ММФНТЗ36,6ММФТЗ50%ДТЗ6,16,315,13,238,140%10,711,617,719,211,820%0 10,79,560%АТ70%А7,16,7 4,910,25,910,55,810,816,780%90%7,57,1100%РРисунок 1. Распределение случаев патологии щитовидной железы в возрастных группах в2011-2012 гг.Таким образом, анализ показал, что патология щитовидной железы у женщин во всех возрастных группах встречается в 8-13 раз чаще, чем у мужчин.
Максимальный процент заболеваний щитовидной железы (56,5%) приходится на людей зрелого возраста (41-60 лет). В структурезаболеваемости наиболее часто встречаются макро-микрофолликулярный зоб (49,8%) и диффузно-токсический зоб (19,5%). Люди до 40 лет наиболее часто поражаются ДТЗ, с 41-60 лет ММФНТЗ и ДТЗ. С возрастом наблюдается увеличение относительного количества узловых образований щитовидной железы.Морфометрическое исследование показало, что наибольшая высота эпителиальнойклетки характерна для рака щитовидной железы (в среднем 8,69±0,10 мкм), наименьшая высотаклетки наблюдалась при токсической и нетоксической зобной трансформации (на 44%) и составила в среднем 4,86±0,10 мкм.Ширина эпителиальной клетки также была максимальна при раке щитовидной железы (всреднем 9,28±0,08 мкм), наименьшая ширина клетки наблюдалась при токсическом узловом зобе(на 41%) и составила в среднем 5,45±0,08 мкм.Объем эпителиальной клетки был максимален при раке щитовидной железы (в среднем589,89±16,17 мкм3), наименьший объем клетки наблюдался при токсическом узловом зобе (на81%) и составил в среднем 114,80±4,99 мкм3.10Высота ядра имела наибольшее значение при раке щитовидной железы (в среднем 6,47±0,10мкм), наименьшая высота клетки наблюдалась при токсической зобной трансформации (на 56%) исоставила в среднем 2,82±0,09 мкм.Ширина ядра была наибольшая при раке щитовидной железы (в среднем 6,71±0,11 мкм),наименьшая ширина ядра наблюдалась при токсическом узловом зобе (на 64%) и составила в среднем 2,39±0,08 мкм.Объем ядра был максимален при раке щитовидной железы (в среднем 518,52±22,26 мкм3),наименьший объем ядра наблюдался при токсическом узловом зобе (на 94%) и составил в среднем29,95±2,63 мкм3.Объем цитоплазмы максимален при аденоме щитовидной железы (в среднем 95,13±7,65мкм3), минимальный объем цитоплазмы наблюдался при диффузном токсическом зобе - в среднем47,35±3,10 мкм3 (на 50%).Ядерно-цитоплазматический индекс был максимален при раке щитовидной железы (в среднем 16,40±5,26), наименьший ядерно-цитоплазматический индекс наблюдался при токсическом узловом зобе (на 98%) и составил в среднем 0,34±0,02.Средний продольный размер фолликулов был максимален при узловом нетоксическом зобе(в среднем 332,50±3,48 мкм), минимальный при аденоме – в среднем 123,8±5,51 мкм (на 63%).Средний поперечный размер фолликулов был максимален при узловом нетоксическом зобе(в среднем 295,97±2,96 мкм), минимальный при аденоме – в среднем 108,4±4,64 мкм (на 63%).Средний продольный размер коллоида был максимален при узловом нетоксическом зобе (всреднем 327,66±3,47 мкм), минимальный при аденоме – в среднем 116,2±5,51 мкм (на 65%).Средний поперечный размер коллоида был максимален при узловом нетоксическом зобе (всреднем 291,11±2,95 мкм), минимальный при аденоме – в среднем 100,9±4,64 мкм (на 65%).Средняя площадь фолликула была максимальна при узловом нетоксическом зобе (в среднем 77797,92±1573,05 мкм2), минимальна при аденоме – в среднем 10971,18±952,08 мкм2 (на 86%).Средняя площадь коллоида была максимальна при узловом нетоксическом зобе (в среднем 75417,69±1541,68 мкм2), минимальна при аденоме – в среднем 9641,73±896,38 мкм2 (на 87%).Относительное количество коллоида было максимально при узловом нетоксическом зобе(в среднем 76,81±0,60%), минимальное – при раковой трансформации (в среднем 10,82±1,01%)(Рисунок.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
