Диссертация (1140388), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Морфометрические исследованияМорфометрические исследования гистологических образцов проводилисогласно основным принципам стереологии в морфометрии [1, 221]. На световомуровне стереометрические параметры тканей, окружающих катетер, высчитывалипри увеличении микроскопа х400 или х1000 с использованием закрытой тестовойсистемы из 25 точек. Для проведения морфометрического анализа, выполненногов программе Image Pro+, рассматривали по 10 верифицированных полей зрения,оценивая соотношение клеточного состава.Для оценки воспалительных реакций в тканях определяли макрофагальногранулоцитарный коэффициент, как соотношение количества макрофагов кколичеству нейтрофильныхгранулоцитовввоспалительноминфильтрате(МФ/ГФ).2.6.
Статистический анализДлявыявлениявзаимосвязеймеждуизучаемымифакторамибылиспользован комплексный статистический анализ полученных количественных ипорядковых величин.51Статистическая обработка материала начиналась с определения типараспределения изучаемых переменных. Поскольку распределение в группахисследования отличалось от нормального (разница средней арифметической (М) имедианы (Ме) составляла более 10%), применялись методы непараметрическойстатистики.Достоверность различия величин в группах по изучаемым факторамосуществляли с помощью критерия Манна-Уитни – для двух независимыхвыборок (при сравнении количественных параметров). Различия сравниваемыхвеличин считали достоверными при p≤0,05.При статистической оценке результатов учитывались рекомендации,изложенные в соответствующих руководствах [12].Статистическую обработку результатов проводили на персональномкомпьютере с помощью лицензионных программ статистической обработкиданных Statistica MS Excel и BioStat 5.8 на операционной системе Windows 7.52ГЛАВА 3.
МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МОДЕЛИ КАТЕТЕРАССОЦИИРОВАННОЙ ИНФЕКЦИИ БЕЗ ИМУНОСУПРЕССИИ И НА ФОНЕИММУНОСУПРЕССИИ3.1. Первая группа: морфологическая характеристика модели катетерассоциированной инфекции у белых мышей с интактной иммунной системой3.1.1. Первая подгруппа: имплантация животным отрезков стерильныхкатетеровНа первые сутки после имплантации отрезков стерильных катетеров втканях вокруг катетера формировался фибринойдный футляр. Преобладающей напервыесуткибылалейкоцитарнаяфаза,котораяхарактеризоваласьинфильтрацией нейтрофильными гранулоцитами, макрофагами, единичнымиплазмоцитами и клетками лимфоцитарного ряда (рис. 1).Рис.
1. Полиморфно-клеточный инфильтрат, окружающий отрезок стерильного катетера. 1сутки. (окраска гематоксилином и эозином, x 400)53Макрофагально-гранулоцитарныйхарактеризовалсявеличиной0,87.коэффициентПринапервыеиммуногистохимическойсуткиокраскелимфоцитов была получена отрицательная реакция на CD3 при положительной наCD20 (CD3-, CD20+). В клеточном инфильтрате также встречались единичныефибробласты. Окраска основным коричневым по Шубичу при изучении 20 полейзрения тканевых структур по периферии катетера всего выявила 10±2,4негранулирующих тучных клеток, дающих характерное окрашивание, чтосвидетельствовало о начале воспалительного процесса. Иммуногистохимическимисследованием окружающих катетер тканей были выявлены положительныереакции на виментин и CD34 (Vimentin+, CD34+), свидетельствующие обиндукции и высокой скорости регенераторных процессов у мышей (табл.
5).На вторые и третьи сутки после оперативного вмешательства наблюдалосьдальнейшеелимфоцитовповышениеколичества(макрофагальнаямакрофаговфаза).срединейтрофилов иМакрофагально-гранулоцитарныйкоэффициент к третьим суткам становился равным 1,01. При этом такжеотмечалось абсолютное увеличение количества фибробластов более чем в 10 разуже на вторые сутки, по сравнению с первыми сутками (p=0,005). Измененияколичества лимфоцитов были разнонаправленными, как в абсолютных, так и вотносительных значениях. На третьи сутки в зоне катетера выявлялосьобразование значительного количества грануляционной ткани, состоящей изтонких коллагеновых волокон, а также незначительного количества фибрина,тонкостенных сосудов и фибробластов, на долю которых приходилось 24±2,84%от состава клеточного инфильтрата. Все это свидетельствовало о наступлениифибропластической фазы воспаления (табл.
6,7).Введение животным отрезков катетеров приводило к образованию вокругнего ограничительного вала, состоящего на первые сутки из слоя фибрина иклеток воспалительного инфильтрата, а на вторые-третьи сутки представленногогрануляционной тканью с включениями лимфоцитов, макрофагов, фибробластови нейтрофилов примерно в одинаковом процентном соотношении. Между54клеточными элементами располагалась нежная сеть коллагеновых волокон. Впервой подгруппе на первые сутки средняя толщина ограничительного валавокруг катетера составляла - 27,0±1,13 мкм, на вторые сутки - 36,6±4,0 мкм, а натретьи сутки - 22,5±1,65 мкм (табл.
8). Увеличение толщины ограничительноговала на вторые сутки можно объяснить появлением в этот период богатойтонкостенными сосудами грануляционной ткани.Данная патогистологическая картина и сроки смены фаз воспаленияхарактерные для развития воспалительных реакций в близлежащих тканях наинородное тело в мягких тканях мышей, примерно соответствует описанной вработах других авторов [33, 42].
Отличия заключались в неравномерномраспределении элементов клеточного состава в зависимости от развития фазвоспаления, что может быть объяснено характером физико-химических свойствинородного материала, высоким уровнем метаболических процессов в тканяхмышей, и особенностями постановки эксперимента.3.1.2. Вторая подгруппа: имплантация животным отрезков катетеров спредварительно выращенными на них биопленками стафилококковВовторойподгруппеприимплантацииотрезковкатетеровспредварительно выращенными на них двухсуточными биопленками бактерийS.epidermidis 33 обнаруживались характерные особенности состава клеточныхинфильтратов окружающих имплантированный материал в различные срокиисследования.Так, первые сутки зона воспалительного инфильтрата была довольно ярковыражена с преобладанием в нем нейтрофильных гранулоцитов, на долю которыхприходилось43±5,13%.Макрофагально-гранулоцитарныйкоэффициентнапервые сутки был равен 0,34.
В клеточном инфильтрате выявлялись такжелимфоциты - 30±1,73%, макрофаги – 14,67±7,88%, фибробласты – 12,33±6,22% изначительное количество нитей фибрина.На вторые сутки (в макрофагальную фазу) на поверхности отрезковкатетеровотмечалосьналичиенебольшихскоплениймикроорганизмов,55подтвержденноеокраскойпоБроун-Хоппс.Вклеточноминфильтратеопределялись макрофаги (CD 68+) – 25,2±6,36%, нейтрофилы – 30,8±10,01%,лимфоциты (CD20+) – 27,8±10,97%, а также единичные плазматические клетки инебольшое количество фибробластов (Vimentin+) – 16,2±5,06%.
При этоммакрофагально-гранулоцитарный коэффициент на вторые сутки увеличивался до0,81. При окраске основным коричневым по Шубичу в тканях вокруг катетерапросмотром 20 полей зрения было выявлено 20±4,1 негранулирующих тучныхклеток, дающих характерное окрашивание и расположенных диффузно, чтосвидетельствовало о выраженной тучноклеточной реакции, по сравнению спервой подгруппой. При иммуногистохимическом исследовании на CD34окружающих отрезок катетера тканей была выявлена положительная реакция(CD34+) (рис.
2-5).На третьи сутки в составе клеточного инфильтрата отмечалось достоверноевозрастание содержания нейтрофилов и фибробластов по сравнению с первойподгруппой(p=0,042иp=0,016соответственно).Макрофагально-гранулоцитарный коэффициент в результате увеличения количества нейтрофиловуменьшился до 0,28. Размеры скоплений микроорганизмов при окраске по БроунХоппс оставались прежними. При этом, ограничительный вал состоял изфибрина, грануляционной ткани (CD34+) и клеточных элементов, включающихфибробласты - 32,1±7,79%, нейтрофилы - 44,4±5,55%, макрофаги (CD 68+) –12,7±3,81% и лимфоциты (CD20+) - 10,7±2,69% (рис. 6-7).Толщина ограничительного вала вокруг отрезков катетеров достоверноувеличивалась при имплантации катетеров с предварительно выращенными наних двухсуточными биопленками S.epidermidis 33, в сравнении с первойподгруппой стерильных катетеров. Так, в первой подгруппе на первые суткисредняя толщина ограничительного вала составляла - 61,3±2,04 мкм, на вторыесутки - 49,6±2,98 мкм, на третьи сутки - 43,3±1,72 мкм (табл.
8).56Рис. 2. Положительная иммуногистохимическаяРис. 3. Скопления микроорганизмов на наружнойреакция на CD68 в цитоплазме макрофагов тканейповерхностиокружающих отрезок катетера с предварительноучастки)выращенными биопленками S.epidermidis 33. 2предварительногосутки. (CD68+, x 1000)бактериальных пленок S.epidermidis 33. 2 сутки.отрезкакатетера(черно-синиеимплантированноговыращиванияпосленаних(окраска по Броун-Хоппс, x 400)Рис.4.Скопленияполиморфно-клеточногомикроорганизмовинфильтратаивблизиРис. 5.
Скопления тучных клеток (окрашеныкоричневымцветом)в тканях,окружающихотрезка катетера с предварительно выращеннымиотрезок катетера с предварительно выращеннымибиопленками бактерий S.epidermidis 33. 2 сутки.биопленками S.epidermidis 33. 2 сутки. (окраска(окраска гематоксилином и эозином, x 200)основным коричневым по Шубичу, x 400)57Рис. 6. Скопление микроорганизмов по наружнойРис. 7.
Фибрин и грануляционная ткань споверхностиналичием фибробластов вокруг отрезка катетера сучасток)отрезкакатетераимплантированногопредварительноговыращивания(черно-синийпослебиопленокS.epidermidis 33. 3 сутки. (окраска по Броун-Хоппс,предварительновыращеннымибиопленкамиS.epidermidis 33. 3 сутки.
(окраска гематоксилиноми эозином, x 400)x 400)3.1.3. Третья подгруппа: имплантация животным отрезков стерильныхкатетеров с однократным введением взвесистафилококков в зонуимплантацииВ третьей подгруппе животных с однократным введением взвесистафилококковвзоныимплантацииотрезковкатетеров,проявлениявоспалительных процессов также характеризовались рядом особенностей.Уже на первые сутки после имплантации отмечалась интенсивная адгезиябактерий к поверхностям отрезков катетеров с формированием обширныхскоплений микроорганизмов, подтвержденных окраской по Броун-Хоппс.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
