Диссертация (1140388), страница 4
Текст из файла (страница 4)
В настоящее время производятся и чащевсего используются катетеры, импрегнированные хлоргексидином в сочетании ссульфадиазином серебра, миноциклином и рифампицином [89, 79, 174]. Поданным рандомизированных исследований, центральные венозные катетеры,покрытые антимикробными веществами (хлоргексидин/сульфадиазин серебра)способныизбегатьбактериальнойколонизациидо3раз,акатетер-ассоциированных инфекций (КАИ) до 4 раз и значительно уменьшать затраты налечение КАИ, несмотря на дополнительные расходы по обработке катетеров [5,89, 95, 154, 217]. Однако эти данные характерны для непродолжительноиспользуемыхкатетеров,обработанныхсеребромтолькоегонаружнойповерхности, в то время как колонизация катетеров установленных на длительноевремя, осуществляется чаще интралюминальным путем [92, 95, 189].Отсутствиепоявлениярезистентностипоказано при использовании катетеров, пропитанныхinvitroхлоргексидином/сульфадиазином серебра [92].
Результаты проспективного рандомизированногоклинического исследования, указывают на снижение КАИ у онкологическихбольных при долгосрочном использовании катетеров, импрегнированныхминоциклином/рифампицином [126]. В другом клиническом исследованиипоказано снижение риска возникновения инфекции при использовании катетеров,обработанных миноциклином/рифампицином с 26% до 8%, по сравнению скатетерами без такой обработки [56, 92, 101].22Следует также отметить, что катетеры, обработанные антибактериальнымии антисептическими препаратами, обладают противомикробным действиемтолько при кратковременном (менее 10 дней) сроке использования [93, 219].Особой группой исследований установлено, что, нанесение мази повидонйода на область катетеризации у гемодиализных больных приводит к снижениючастоты колонизации центрального венозного катетера и развития КАИ [117, 156,159].
Важно отметить, что эти данные были получены на пациентах сдлительными сроками установки катетеров.Имеются сведения об эффективности применения мази с мупироцином дляпрофилактики КАИ. Одновременно со снижением риска КАИ отмеченыповышение резистентности флоры к мупироцину при его рутинном применении ивозможность повреждения материала полиуретанового катетера. Другие мази,содержащиеантибиотики(бацитрацин,неомицин,полимиксин),такжеприменялись, однако полученные результаты оказались противоречивыми.Наряду со снижением колонизации катетеров микроорганизмами, наблюдалосьувеличение частоты инфицирования их грибами [5, 92, 117, 156, 159, 174].Известно,чтотромбозкатетеровчастосопровождаетсяихинфицированием, поэтому для профилактики этого явления широко применяютсярастворы антикоагулянтов. Поскольку большинство таких растворов содержатконсерванты, обладающие антимикробной активностью, снижение частоты КАИможет быть связано как с ингибированием образования тромбов, так и наличиемконсервантов или их суммарным эффектом [5, 92, 156, 117].1.5.Проблемы моделирования патологических процессов и катетерассоциированных инфекцийОднимизподходовкпознаниюсложныхмеханизмовразвитияпатологических процессов в организме человека является биологическоеэкспериментальное моделирование, возникшее с развитием экспериментальнойбиологии и медицины.
Материалистическая гносеология исходит из принципа,23что модель является одной из форм познания, специфическим средствомотображения материального мира человеком, причем специфика этой формы, вомногом, определяется видом модели. [49, 50].Проблема моделирования патологических процессов чрезвычайно сложна.Задача ее состоит в том, чтобы по результатам проводимых на моделяхэкспериментов, выявить свойства и характерные особенности изучаемойпатологии, возникающей и развивающейся в такой сложной системе, как живойорганизм.
Для создания моделей, которые могли бы быть максимальнополезными, необходимо выбрать один или два существенных признака, общихдля оригинала и модели. При этом, обычно, следует руководствоваться общимитипами патологического процесса, а не их индивидуальным выражением [14, 49].При разработке методов предупреждения формирования и подавленияфункционирования бактериальных пленок большое значение принадлежитэкспериментальному моделированию КАИ.
Особенно важно использование вэтих целях моделей с подавлением иммунитета организма. Подавлениеиммунитета, в частности, может быть вызвано введением циклофосфамида,важнейшим эффектом которого является развитие нейтропении [54, 127].1.6.Моделирование катетер-ассоциированной инфекцииМоделированиекатетер-ассоциированнойинфекциичащевсегоосуществляется на мышах, реже на крысах. К настоящему времени предложеныразличные способы моделирования КАИ.
Обычно, отрезок катетера вживляетсяподкожно в область спины, боковой поверхности брюшка или внутрибрюшинно.Ниже описываются некоторые известные примеры моделирования катетерассоциированой инфекции.Изучая механизмы образования биопленок с помощью флюоресценцииCassat и Rupp с соавторами, использовали следующую модель катетерассоциированой инфекции [75, 85]. Под общей анестезией мышам вживлялистерильные отрезки катетеров длинной 1 см подкожно в оба боковых фланка24брюшкаживотного.Приэтомчастьотрезковкатетеровобрабатывалифлуоресцентными зондами, а затем в область имплантации катетеров вводиливзвесь бактерий S.aureus.
Формирование биопленок и их оценку проводили in vivoна 3,7 и 10 день после операции с использованием флуоресцентного микроскопа.В другой работе для изучения патогенеза инфекций, ассоциированных спротезнымиустройствами,авторыпроводилимоделированиеинфекциивведением мышам инородных тел, с использованием для этих целей в качествеинородного тела отрезки венозных тефлоновых катетеров длиной 1 см [125]. Вкачестве места имплантации использовали боковые фланки брюшка мышей.Шерсть в местах имплантации сбривали, а кожу обрабатывали растворомантисептика.
Отрезок катетера вводили подкожно через небольшой разрез, послечего в зону имплантации вводили взвесь бактерий S.epidermidis. Часть животныхэксперимента была мутантна по определенным генам, участвующих в иммунномответе.Послевведениявзвесейстафилококков на операционнуюранунакладывали шов.
На 7 и 14 день животных выводили из эксперимента. Отрезкикатетеров промывали, полученную жидкость центрифугировали и исследовалиосадокмикробиологическимиметодами.Гистологическимиметодамиисследовали ткани вокруг катетера, в которых на 7 и 14 день были обнаруженыскопления микроорганизмов и особенности фибропластической реакции, как уживотных дикого типа, так и животных с генетическим нокаутом.С целью изучения процессов образования биопленок на фоне иммунизацииавторами использовалась модель катетер-ассоциированой инфекции у крыс [135,211].Животнымпредварительновводилиантителакстафилококковымпротеинам. На отрезках венозных тефлоновых катетеров длиной 1 смпредварительно выращивали биопленки S.
epidermidis (104 клеток на весь отрезоккатетера). В качестве места имплантации использовали боковой фланк брюшка.Через сутки после имплантации животных выводили из эксперимента. Отрезкикатетеров промывали, полученную жидкость центрифугировали и исследовалиосадок микробиологическими методами.25В другом исследовании для изучения иммунного ответа на формированиебиопленокбылаиспользованамоделькатетер-ассоциированойинфекциикровотока у мышей [115, 213]. Под фенобарбиталовым наркозом мышам вяремную вену вводили отрезки полиэтиленовых катетеров. К отрезкам катетерачерез разрез кожи между лопатками проводили порт и всю систему фиксировалишовным материалом.Через сутки после операции в порт вводили взвесьбактерий S.
epidermidis с иммуноглобулинам в разных соотношениях взависимости от исследуемой группы. На 5 сутки животных выводили изэксперимента. Часть катетера, находившегося в яремной вене, асептическиизвлекали, затем промывали, а полученную жидкость центрифугировали иисследовали микробиологическими методами. У животных также исследовалиткани органов - селезенки, печени, сердца, правой почки и яремную вену. Затеморганы гомогенезировали и микробиологическими методами изучали уровень ихбактериального обсеменения.Существуют также модели инфекций, связанных с имплантируемымиустройствами [73, 74, 134, 173, 181]. В частности, разработана модель, основаннаяна имплантации мышам протезов большеберцовой кости с предварительновыращенными на них биопленками бактерий S. aureus.Для изучения особенностей метаболизма биопленок была использованатакже модель подкожной инфекции инородного тела у мышей.
В качествеинородного тела использовали отрезок венозного полиуретанового катетерадлиной 1 см. Отрезок катетера предварительно обрабатывали реактивами дляизучения особенностей метаболизма в биопленке. Перед имплантацией мышамвнутрибрюшинно вводили смесь кетамина и ксилазина. Затем на нижней частиспины сбривали шерсть, кожу обрабатывали раствором антисептика и делалинебольшой разрез. Через разрез подкожно вводили отрезок катетера. Затем вобласть имплантации вводили взвесь микроорганизмов, и на операционную ранунакладывали шов. Животных выводили из эксперимента на 7 день.
Отрезоккатетера удаляли асептическим путем, а полученую на нем в ходе эксперимента26биопленку микроорганизмов изучали спектрофотометрическим методом [82, 85,172].Для изучения биолюминесценции при формировании микробных биопленокRupp и соавторы использовали экспериментальную модель инфекции инородноготела у мышей [85]. В качестве инородного тела использовали отрезок катетерадлинной 1 см.
Анестезию проводили смесью ксилозина и кетамина. Шерсть набоковой поверхности брюшка мыши сбривали, кожу обрабатывали растворомантисептика и спиртом. Делали 8-10 мм разрез кожи и отрезок катетера вводилиподкожно на расстояние 2 см от места разреза. Операционную рану зашивалихирургическими скобками, шов обрабатывали раствором антисептика. Частьвведенных отрезков катетеров предварительно обрабатывали в бактериальнойвзвеси. Другую часть отрезков имплантировали стерильными, а затем через часпосле имплантации вводили бактериальную взвесь в просвет катетера. Оценкуэмиссии фотонов от области установленного катетера проводили в специальнойкамере.
После получения окончательных изображений мышей выводили изэксперимента и асептическим путем извлекали отрезки катетеров. После этогоотрезки катетеров промывали, а полученную жидкость центрифугировали иисследовали микробиологическими методами.Возможности анализа воспалительных реакцийДинамическая структура очага воспаления - это последовательностьсобытий сосудистых и клеточных реакций воспаления в их пространственновременном выражении. Время реализации воспаления и его фаз является одним изпервых параметров его характеристики. При оценке воспаления учитываютсявремяобразованияфибропластическойивеличинакапсулы.Этиотека,лейкоцитарнойкритерииявляютсяинфильтрациииморфологическимихарактеристиками, которые относительно легко регистрируются и позволяютпроанализировать зависимость их проявления от воздействия различныхповреждающих факторов и медиаторов воспаления.
Иллюстрацией является,например,процессзаживленияпослеоперационногодефекта,ав27экспериментальной практике – разнообразные модели, где повреждающимфактором является инородное тело – целлоидиновый шарик или пластинка,парафиновый шарик и другие повреждающие факторы с заранее заданнымисвойствами и размерами. Показано, что асептическое воспаление у позвоночныхреализуется через двухфазную динамику накопления отечной жидкости ипоследующую цепь универсальных клеточных реакций, этапами которыхявляются образование: лейкоцитарного вала, макрофагальная инфильтрация иформирование фиброзной капсулы.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
