Диссертация (1140388), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Вокругимплантовформировалсявоспалительныйинфильтратсостоящийизнейтрофильных гранулоцитов (26,98±4,85%), макрофагов (23,12±5,09%), Т- и Bлимфоцитов (CD3+, CD20+) - 42,88±3,26%, единичных плазматических клеток инебольшого количество фибробластов (Vimentin+) - 7,12±3,51% клеточногосостава. Макрофагально-гранулоцитарный коэффициент достигал 0,86. Приокраске основным коричневым по Шубичу в тканях вокруг отрезков катетеровпри просмотре 20 полей зрения выявлялось 10±2,2 тучных клеток с характерным58окрашиванием. При иммуногистохимическом исследовании окружающих катетертканей выявлялась положительная реакция на CD34 (рис.
8-10).Навторыеитретьисуткимикроорганизмов уменьшался, аэкспериментовколичествообъемлимфоцитовскопленийснижалось, посравнению с первыми сутками и подгруппой животных, которым вводилисьотрезки стерильных катетеров. Так, количество лимфоцитов в общей клеточноймассе снизилось с 42,88±3,26% (первые сутки) до 34,86±6,69% и 18,75±9,19% навторые и третьи сутки, соответственно. Данные изменения происходили за счетдостоверного увеличения количества фибробластов в инфильтрате со вторыхсуток (27,2±9,05% состава клеточного инфильтрата), который, однако, был менеевыраженный по сравнению с первой подгруппой при имплантации стерильныхотрезков катетеров (p=0,05).
Макрофагально-гранулоцитарный коэффициентизменялся не сильно и составлял 0,89.На третьи сутки экспериментов скопления микроорганизмов на отрезкахкатетеров, практически исчезали, а инфильтрат был представлен слоем фибрина,широкой зоной грануляционной ткани с тонкостенными сосудами,а такженежными коллагеновыми волокнами и клеточным инфильтратом представленныммакрофагами(23,75±9,08%),нейтрофилами(29,5±9,2%),фибробластами(28,75±12,47%) и лимфоцитами (18,75±9,19%). В этих условиях отмечалосьнебольшое уменьшение макрофагально-гранулоцитарного коэффицента до 0,77(рис.11).59Рис.
8. Положительная иммуногистохимическаяРис. 9. Положительная иммуногистохимическаяреакция на CD3 на мембране лимфоцитов вреакция на CD20 в лимфоцитах, окружающихтканях,приотрезок катетера, при однократном введенииоднократном введении взвеси стафилококка. 1взвеси стафилококка в зону имплантации. 1сутки. (CD3+, x 1000)сутки. (CD20+, x 1000)окружающихотрезоккатетераРис. 10. Скопления бактериальных клеток, обилиеРис. 11. Фибрин и широкий слой грануляционнойлейкоцитовткани с большим количеством фибробластовпослесформированиемоднократногомикроабсцессавведениявзвесипослеоднократноговведениявзвесистафилококков в зону имплантации отрезкастафилококков в зону имплантации отрезкакатетера.
1 сутки. (окраска гематоксилином икатетера. 3 сутки (окраска гематоксилином иэозином, x 200)эозином x 200)3.1.4. Четвертая подгруппа: имплантация животным отрезков стерильныхкатетеров с ежесуточным введением взвесей стафилококков в зонуимплантацииВчетвертойподгруппе-приежедневномвведенииживотнымбактериальных взвесей стафилококка в зоны имплантации отрезков катетеров в60течениетрехсуток,морфологическиеотличияотпроявленийреакциихарактерных для третьей подгруппы начинались со вторых суток.Отличияхарактеризовалисьмикроорганизмовнаповерхностяхинтенсивнымотрезковкатетераростомсскопленийувеличениемвинфильтрате количества макрофагов, по сравнению с первыми сутками (3,5±1,1клеток в поле зрения на первые сутки и 8,3±0,8 клеток в поле зрения на вторыесутки), и с увеличением макрофагально-гранулоцитарного коэффициента с 0,86до 1,64.
При этом, за счет увеличения количества макрофагов, уровеньлимфоцитов в процентном соотношении снизился практически в два раза с42,9±3,26% на первые сутки до 22±5,68% на вторые. Численность фибробластовне подверглась значительным изменения, оставаясь примерно, на том же уровне,что и в первые сутки (7,3±2,33% состава клеточного инфильтрата). В инфильтратетакже отмечалось наличие значительного количества фибрина и клеточногодетрита.На третьи сутки в исследуемых зонах вокруг отрезков катетеров появляласьгрануляционная ткань, в составе которой выявлялись тонкостенные сосуды(CD34+) и рыхло расположенные коллагеновые волокна.
В составе клеточногоинфильтратаобнаруживалисьдиффузнорасположенныенейтрофилы,фибробласты, лимфоциты (CD20+) и макрофаги (CD 68+) количество последнихпо сравнению с предыдущими сутками уменьшилось до 2,8±0,9 клеточныхэлементов в поле зрения. Макрофагально-гранулоцитарный коэффициент в связис резким уменьшением количества макрофагов к третьим суткам приблизился кзначению характерных для первых суток и составил 0,89. Обращало на себявнимание возрастание объема бактериальных скоплений, подтвержденноеокраской по Броун-Хоппс. Фибропластические изменения на третьи сутки быливыражены слабо, и изменения количества фибробластов по сравнению с первымии вторыми сутками не наблюдалось. Так, в процентном отношении количествофибробластов (Vimentin+) держалось стабильно на уровне 7% ежесуточно, а сетьколлагеновых волокон была очень рыхлой.
При окраске основным коричневым по61Шубичу в инфильтрате вокруг катетера при осмотре 20 полей зрения быловыявлено3±0,2негранулирующихтучныхклеток,дающиххарактерноеокрашивание (рис. 12-15).Следует также отметить, что как однократное, так и многократные введениявзвесей стафилококка в зону имплантации отрезков катетеров уменьшалитолщину ограничительного вала, по сравнению с подгруппой стерильныхкатетеров и катетеров с биопленками (рис. 16).Таким образом, при подкожной имплантации отрезков стерильныхкатетеровпатогистологическая картина и сроки смены фаз воспаленияхарактерны для развития воспалительных реакций на инородное тело в кожемышей,имеющихвысокийуровеньрегенераторногопотенциала[34].Неравномерное распределение элементов клеточного состава в зависимости отсуточных фаз воспаления, может быть обусловлено характером инородногоматериала и особенностями эксперимента.Скопления микроорганизмов морфологически лучше всего выявлялись приежесуточном введении стафилококка в область имплантации отрезков катетеров втечение всех трех суток эксперимента.Учитывая вышеизложенное, а также клинические данные о частотеразвитиякатетер-ассоциированнойинфекцииубольныхнафонеиммунодефицита [55, 170], дальнейшее изучение реакций тканей мышей в зонеимплантации отрезков катетеров проводили на иммуносупрессированныхживотных.62Рис.
12. Положительная иммуногистохимическаяРис. 13. Скопления бактерий вокруг отрезкареакция на CD68 в цитоплазме макрофаговкатетера (черно-синие участки) при имплантациитканей,ихокружающихотрезоккатетерассмногократнымвведениемвзвесеймногократным введением взвесей S.epidermidis 33.S.epidermidis 33. 3 сутки. (окраска по Броун-Хоппс,3 сутки.
(CD68+, x 1000)x 400)Рис. 14. Положительная иммуногистохимическаяРис.реакция на виментин ввоспалительного инфильтрата при многократномтканях, окружающих15.Скоплениявзвесейбактерийиклеткиотрезок катетера, при многократном введениивведениивзвесей S.epidermidis 33. 3 сутки. (Vimentin+, xимплантации отрезка катетера. 3 сутки.
(окраска1000)гематоксилином и эозином, x 200)S.epidermidis33взону63Толщина ограничительного вала (мкм)70605040БиопленкиОднократное введение30Многократное введение20100123СуткиРис. 16. Изменение толщины органичительного вала вокруг отрезков катетеров при различныхспособах инфицирования S.epidermidis 33 в течение трех суток эксперимента3.2. Вторая группа: морфологическая характеристика модели катетерассоциированной инфекции белых мышей с иммуносупрессией3.2.1.
Первая подгруппа: имплантация животным отрезков стерильныхкатетеровВ первой подгруппе мышей, при имплантации стерильных катетеровпринципиальныхотличийвморфологическойхарактеристикетечениявоспалительного процесса от выявленных в первой группе животных практическине наблюдалось. Однако в процентном соотношении и абсолютной численностиклеточного состава инфильтрата вокруг отрезков катетера границы фазвоспаления были выражены гораздо отчетливее.Так, в первые сутки количество нейтрофилов в клеточном инфильтратесоставляло 54,2±6,82%, макрофагов 16,0±3,62% (CD 68+), а макрофагальногранулоцитарный коэффициент был равен 0,29 (рис. 17).
Низкий МФ/ГФобъясняется тем, что количество макрофагов в абсолютных значениях было64достоверно ниже, чем в аналогичной подгруппе животных с неизменнымиммунным статусом (p=0,004). Аналогичные результаты наблюдались иотносительно количества лимфоцитов в первые сутки – их численность былатакже достоверно ниже (21,2±6,07%), чем в аналогичной подгруппе животных безиндукции иммуносупрессии, где она достигала 41,0±6,61% всего клеточногосостава(p=0,001)(рис.18).Прииммуногистохимическомисследованиилимфоциты, в основном, были представлены В-лимфоцитами (CD20+) и давалиCD3 отрицательную реакцию (CD3-). Содержание фибробластов в инфильтратебыло незначительным и составляло8,5±3,46%.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
