Диссертация (1140386), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Учитывая особенностиокрашиванияцитоплазмымаркеромCD68(гранулярныйхарактерокрашивания) оценка проводилась полуколичественно.Экспрессия РС2 в клетках оценивалась следующим образом: мембранное,мембранно-цитоплазматическое и цитоплазматическое окрашивание.42Морфометрические методыВсе препараты были отсканированы на сканирующей системе Aperioфирмы Leica - уникальной системе получения высокоточных изображенийгистологическихизображение,препаратов,котороеможнопозволяющеймногократносоздаватьполноценноеувеличивать,просматриваяотдельные фрагменты в высоком качестве максимально приближенному ктому, которое традиционно получают с помощью обычного микроскопа.Программная обработка изображения позволяет проводить качественный иколичественный анализ препарата.Рисунок 1.
Система сканирования гистологических препаратов Aperio (Leica,Германия).ПодсчетCD3позитивныхокрашенныхклеток(интраэпительныхлимфоцитов) производился на поверхности слизистой одной ворсины (всреднем на 100 клеток), однако, учитывая вариабельность размера ворсин, всеворсины были разделены на две группы. В первую вошли крупные ворсины,поверхность которых насчитывала приблизительно 100 и более эпителиальныхклеток (размер от 401 µm и более) во вторую группу вошли ворсины среднего ималенького размера, эпителий которых насчитывал менее 100 клеток (от 400µm и менее). В результате было получено 2 цифровых показателя для каждойгруппы (БК, НК и контрольная группа), благодаря чему было проведеносравнение содержания Т-лимфоцитов в сравниваемых группах.43Учитывая вариабельность расположения крипт в илеобиоптатах, подсчетколичества хромогранин А позитивных нейроэндокринных клеток былпроведен исходя из расчета на одну крипту и на ворсину подвздошной кишки,срезанных продольно.
В результате было получено два цифровых показателя покаждому изучаемому случаю (для нормальной слизистой, в случае БК и НК),что позволило провести сравнение содержания НЭК в разных группах.Рисунок 2. Отсканированное изображение гистологического препарата.При подсчете РС2 позитивных клеток каждом из биоптатов было выбрано неменее 10 участков для подсчета позитивно окрашенных клеток. В связи сполиморфной картиной окрашиваемых позитивно структур, помимо общегочисла РС2 позитивных клеток, был произведен так же подсчет клеток взависимости от особенностей окрашивания. Так были выделены три группы:мембранный, цитоплазматический и мембранно-цитоплазматический типыокрашивания.
Подсчет производился в среднем на 100 клеток слизистой,покрывающей поверхность ворсин.Статистические методыСтатистическая обработка полученных результатов выполнена спомощью программы Microsoft Office Exсel 2006, STATISTICA for Windowsv.6.0. Для полученных переменных при помощи построения гистограмм срасчетомсреднегозначенияпроверялось,подчиняютсялизначения44нормальномузначительнораспределению.отличалисьотПосколькунормальныхполученныеприанализераспределенияприменялисьнепараметрические методы. Описание количественных данных представлено ввиде медианы (Ме) и интерквартильного размаха (25 и 75 процентили, Q25–75). Представление качественных признаков выполнено в виде долей.Сравнительный анализ двух независимых групп проведен по количественномупризнаку с помощью критерия Манна-Уитни. Чувствительность определяли,какдолюлицсзаболеванием,имеющихпозитивныйрезультатдиагностического критерия. Специфичность определяли, как долю лиц беззаболевания, имеющих отрицательный результат критерия.
Точность как–долю правильных результатов теста в общем количестве результатов, т.е.сумма истинноположительных и истинноотрицательных результатов, деленнаяна общее количество результатов.45ГЛАВА 3. МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БИОПТАТОВСЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОДВЗДОШНОЙ КИШКИМатериалом для морфологического исследования послужили «лестничные»биопсии подвздошной и толстой кишки 108 пациентов.Илеит был диагностирован у 66 больных, у 44 из которых на основаниирезультатов полного клинического, эндоскопического и морфологическогоисследований был поставлен диагноз болезни Крона. У 22 больных не удалосьпровести дифференциальный диагноз между болезнью Крона и ЯК и былустановлен диагноз неклассифицируемого колита.
42 пациента составиликонтрольную группу, которая была сопоставима по полу и возрасту сисследуемыми группами.302520м15ж1050БКНККонтрольная группаРисунок 3. Распределение пациентов по полу.4645403530252015105018-24 лет25-34 летБКНК35-44 лет45-59 летКонтрольная группаРисунок 5. Распределение пациентов по возрасту.Наиболее выраженными признаками хронического воспаления являлисьнарушение архитектоники крипт и ворсин, повреждения эпителия, а такжеизменение состава и распределения воспалительного инфильтрата собственнойпластинки слизистой оболочки (рисунок 6).Рисунок 6. Болезнь Крона. Выраженная структурная деформация ворсин, деформацияи неравномерное распределение крипт, повышение плотности воспалительногоклеточного инфильтрата в собственной пластинке слизистой оболочки. Окраскагематоксилином и эозином х60.47Изменения архитектоники включали в себя такие структурные измененияформы и размера ворсин, как их уплощение в области верхушки, котороеможно было сравнить с «барабанными палочками» (рисунок 7).
Некоторыекрипты были разветвлены, укорочены, атрофичны.Рисунок 7. Болезнь Крона. Подвздошная кишка. Очаговая деформация ворсин,удлинениеидеформацииякрипт.Очаговымповышениеплотностилимфогистиоцитарного клеточного инфильтрата. Крупные лимфоидные фолликулы.Окраска гематоксилином и эозином х100.Состав воспалительного инфильтрата слизистой оболочки подвздошнойкишки варьировал и чаще всего характеризовался увеличением количествалимфоцитов, плазматических клеток, нейтрофилов и эозинофилов. Что жекасается локализации, то увеличение количества воспалительных клеток былоочаговымилидиффузным;воспалениераспространялосьтольконаинтраэпителиальный компонент или только на собственную пластинку, либо нато, и другое (рисунок 8).48Рисунок 8.
Болезнь Крона.Подвздошная кишка. Регенераторные измененияпокровного эпителия. Очаговая отслойка и лейкоцитарная инфильтрация, скоплениефибринозно-лейкоцитарного экссудата непосредственно над зоной поражения.Окраска гематоксилином и эозином х200.49Рисунок 9.
Болезнь Крона. Слизистая оболочка подвздошной кишки с укороченнымиворсинами, эпителий с признаками повреждения, содержит одиночные лейкоциты.Отмечается очаговое неравномерное распределение крипт, очаговое повышениеплотности клеточного инфильтрата. Окраска гематоксилином и эозином х200.НаиболеехарактернойотличительнойчертойБКбылоналичиесаркоидоподобных гранулем.Рисунок 10. Болезнь Крона. Хронический гранулематозный илеит с типичнойсаркоидной гранулемой. Расширение просвета лимфатического сосуда ворсины.Окраска гематоксилином и эозином х100.50Типичные гранулемы располагались изолированно и не образовывали крупныхконгломератов.
В большинстве случаев гранулема состояла из группыэпителиоидных клеток, либо с наличием либо без гигантских многоядерныхклеток, окруженных лимфоцитами (рисунок 11). Саркоидные гранулемы мыобнаружили в 30% (13 случаях) биоптатов слизистой оболочки подвздошнойкишки.Рисунок 11. Болезнь Крона. Формирующиеся эпителиоидно-клеточные гранулемы сгигантскими многоядерными клетками. Фрагменты разрушенных крипт изначительная примесь эозинофильных лейкоцитов в инфильтрате. Окраскагематоксилином и эозином х200.51Рисунок 12. Болезнь Крона. Множественные саркоидные и микрогранулемы,расположенные в подслизистой основе и окруженные густой лимфоцитарнойинфильтрацией.
Окраска гематоксилином и эозином х100.Другойособенностьюхроническогоилеитаявилосьналичиемикрогранулем – скопления макрофагов, лимфоцитов и небольшого количестваплазматическихклеток.Мысчиталимикрогранулемыдиагностическизначимыми, если им сопутствовало очаговое воспаление или изолированныекрипт-абсцессы. Также мы встречали изолированные гигантские клетки,залегающие глубоко в слизистой или в подслизистой, они встречались внезависимости от нарушения архитектоники или хронического активноговоспаления.52Рисунок 13. Болезнь Крона.
Гистиоцитарная микрогранулема, расположенная междусохранившимися криптами, в которых отмечается высокое содержание бокаловидныхклеток. Окраска гематоксилином и эозином х200.Ворсины были покрыты высоким цилиндрическим эпителием с хорошовыраженной щеточной каймой нормальным или увеличенным количествомбокаловидныхклеток(гиперкриния).В6случаяхклеткиПанетаобнаруживались не только в базальных отделах, но и в верхних отделах крипт идаже в эпителиальной выстилке отдельных ворсин.В 18 случаях обнаруживалась псевдопилорическая железистая метаплазия. Оназаключалась в появлении в собственной пластинке слизистой оболочки желез,содержащих слизистые клетки и структурно напоминающие пилорическиежелезы антрального отдела желудка.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
