Диссертация (1140386), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Тогда,наоснованииполученныхрезультатов,наибольшеечислоСМСсинтезирующих клеток наблюдается при НК, а наименьшее при БК. Числоклеток с мембранным окрашиванием в контрольной группе можно считатьнормальным и необходимым для поддержания адекватного иммунногогомеостаза кишечника.Наибольшее число мембранных РС 2 типа позитивно окрашенных клетокпри НК можно объяснить тем, что НК является первой и наиболее выраженнойреакцией на воспаление, при которой каких-либо характерных черт для ЯК илиБК еще не образовалось, вследствие меньшей длительности и меньшейспецифичности влияния патогенетических аутоиммунных механизмов.
А103увеличениеэкспрессиирецепторовкСМСнаповерхностиклеток,синтезирующих этот нейропептид (D-клеток) – можно рассматривать, какважный приспособительный противовоспалительный адаптивный механизм,развивающийся с целью погашения интенсивности эндогенного воспаления.Если учесть, что данные клетки действительно заняты преимущественно всинтезе и секреции СМС, то получается, что при НК выделяется наибольшаяконцентрация противовоспалительного медиатора. Эти изменения происходят вответ на нарушение равновесия внутренней среды организма, что можетуказывать на значительные усилия с его стороны, направленные налокализацию и ограничение начавшегося иммунного воспаления и на пока ещефункционирующие механизмы защиты организма в ответ на воспалительнуюреакцию.Помимо этого, увеличение НЭК, имеющих на своей поверхностирецепторы к СМС, при НК так же согласуется с приведенными нами ранееданными о том, что общее число РС 2 типа при НК является наименьшим это иявляется вторым аргументом в пользу существования механизма отрицательнойобратной связи в саморегуляции иммунных процессов в кишечнике (общеечисло РС2+ клеток при НК – наименьшее, а число клеток с мембраннымпаттерном окрашивания – наибольшее).К тому же, если клетки, с окрашенной мембраной являются D-клетками,синтезирующими СМС, то объяснить столь противоположные результаты вколичестве РС2+ клеток при БК (общее число РС2+ клеток при БКнаибольшее, клеток с мембранным типом окрашивания – наименьшее) можновспомнив, что по данным многих работ, для ВЗК (M.
Reinshagen, J. Bergeijk,1997, A. Fernandez 2008, K. Edelblum 2015) (и для БК в частности) характерноснижение самого СМС на фоне увеличения рецепторов к нему. А если учесть,что экспрессия РС 2 типа на НЭК наблюдается, как на D-клетках, так и надругих клетках диффузной эндокринной системы, то, с учетом того, чтоколичество СМС уменьшается при БК, можно сделать вывод, что и активностьD-клеток (участвующих в синтезе СМС) так же нарушается. В связи с этим и104нарушается экспрессия на их поверхности, что не дает клеткам отвечать наизменение в количестве этого нейромедиатора в ткани кишечника иреагировать на это повышенной секреторной активностью.Обе эти теории нуждаются в дальнейшем изучении и подтверждении и неисключают существования друг друга.РС2+ клетки с цитоплазматическим типом окрашиванияДля второго типа окрашивания – цитоплазматического было обнаружено,что количество клеток при НК>Норма>БК.
Данные клетки, по форме, вбольшинстве своем представляли мелкие округлые клетки, размером примерно4 микрона. Однако встречались среди них и довольно крупные вытянутыеклетки, неправильной формы.Вопрос о том, какие же клетки, несут на своей поверхности РС2типа приВЗК, остается открытым. На протяжении многих лет появлялись все новыетеории. Большинство исследователей указывали в своих работах, чтообнаруживали РС2 позитивные клетки на поверхности эндотелиальных клетоки венул, в особенности в близи очагов активного воспаления (A.M. ten Bokum2004, J.
Bergeijk, 1997) мы, однако, столь выраженного окрашивания клетоксосудистого эпителия не обнаружили. Кроме того, РС 2 типа были обнаруженына фибробластах и некоторых клетках макрофагально-моноцитарной линии,включая эпителиодные клетки и многоядерные гигантские клетки гранулем (tenA.M.
Bokum., 2004). Возможность обнаружения РС 2 типа на лимфоцитах всееще остается под вопросом: некоторые авторы утверждают, что приисследовании биоптатов, окрашенных АТ к данному рецептору, ни в одном изобразцов лимфоциты не экспрессировали данные рецепторы (ten Bokum AM2004, E. Lichtenauer-Kaligil, 2000) в то время, как другие утверждают, чторецепторы второго типа – это единственный подвид, встречающийся наповерхности иммунных клеток (N. Bronstein-Sitton 2006, E. Lichtenauer-Kaligil2000, A. Tsutsumi 1997).105В литературе довольно часто встречаются сообщения, о действии СМС наиммуноциты.
Иммунная активность СМС была обнаружена в результатеисследования функции крысиных лимфоцитов, где было показано, что СМСснижаетиммуннуюреактивностьорганизма,ингибируетсинтезиммуноглобулинов и пролиферацию лимфоцитов и гранулоцитов. Он снижаетвыброс ФНО-а и клеточную цитотоксичность активированных макрофагов.Тормозное влияние СМС зависит от его локальной концентрации. Некоторыеизучения in vitro показали, что в низких концентрациях СМС ингибируетпролиферацию лимфоидных клеток, и вызывает их стимуляцию при высокомуровне.
В моделях in vivo СМС контролирует воспалительные процессы.Уменьшение воспалительного инфильтрата и снижение продукции ФНО-авозникает при применении аналога СМС у животных, с индуцированнымкожным воспалением. В этом эксперименте интенсивное ИГХ окрашиваниекожного биоптата на СМС было обнаружено на лейкоцитах, которыерасполагались перифокально (вокруг очагов воспаления). СМС снижаетактивность воспаления при экспериментальном артрите. Похожие эффектыобнаруживают при воспалении в подвздошной или ободочной кишке при БК ииндуцированном золотом энтерите (J. Bergeijk, 1997).Учитываяособенностиморфологииклеток,окрашенныхпоцитоплазматическому типу, указанные выше, и их наибольшее число при НК,мы предположили, что они представляют собой иммунные клетки, в частностилимфоциты.
Вытянутые клетки неправильной формы среди кишечногоэпителия представляют собой, по-видимому, мигрирующие из стромы вповерхностный слой слизистой лимфоциты.Для подтверждения данной гипотезы, мы сравнили препараты с окраскойна РС 2 с препаратами тех же срезов, окрашенных на CD3 для выявлениямежэпителиальных лимфоцитов. При этом мы наблюдали совпадение средиокрашиваемых клеток, в дополнение к этому наибольшее число CD3+ клетоктак же наблюдалось при НК по сравнению с БК. Таким образом,цитоплазматически окрашенные, расположенные среди эпителия темные106мелкие клетки, скорее всего, представляют собой Т-лимфоциты, мигрирующиеиз стромы к поверхности подвздошной кишки в результате воспалительнойреакции. Как уже было упомянуто выше, число этих клеток при НКнаибольшее (Ме=3), а при БК – наименьшее (Ме=1).
Данные результаты,сходятся с показателями, полученными при подсчете клеток с мембраннымпаттерном окрашивания.Учитывая, особенности влияния СМС на иммунные клетки, в видеторможения их пролиферации и торможения синтеза ими воспалительныхцитокинов, данные результаты вполне объяснимы. Если НК действительнопредставляет собой первичную реакцию организма на повреждающие факторы,при которой еще не уcпел сформироваться патологический иммунный ответ, топовышениеэкспрессииРС2налимфоцитахявляетсязащитнойприспособительной реакцией. В результате такой реакции лимфоцитыспособны защищать слизистую оболочку кишечника от раздражителей, однакопатологическиереакциинеразвиваютсявсвязиспостояннымпротивовоспалительным контролем СМС, который связывается с большимколичеством рецепторов на лимфоцитах.Таким образом, можно сказать, что экспрессия РС2 на лимфоцитахосуществляется с целью его ограничения воспалительного процесса.Помимо этого, клетки, похожие по морфологическим характеристикам и потипу окрашивания, были обнаружены и в строме кишечника.ПриБКжепроисходитсрывнейро-гуморально-иммуннойрегуляциивоспаления, которое выходит из-под контроля, в связи с чем и развиваютсястоль выраженные изменения слизистой.
В результате чего количество, каксамого СМС, так и его рецепторов на поверхности иммунных клеток –эффекторовуменьшается,иосуществлениедеятельностиосновногопротивовоспалительного нейропептида становится невозможной, а воспалениепродолжает манифестировать, не имея возможность ограничить пролиферациюлимфоцитов и синтез ими провоспалительных медиаторов.107РС2+ клетки с мембранно -цитоплазматическим типом окрашиванияЧто касается мембранно-цитоплазматического окрашивания, то именноклетки, окрашенные подобным образом, составили большинство. Для данноготипаокрашиваниямыполучилиследующиерезультаты:количествопозитивных клеток при БК>Норма>НК.
По морфологии большинство этихклеток представляли собой кубические или цилиндрические клетки, малоотличающиеся от окружающих энтероцитов, однако среди них встречались иклетки треугольной и неправильной формы.Следует напомнить, что для общего числа РС2+ окрашенных клеток, такжебылохарактерноподобноераспределениевизучаемыхгруппах(БК>Норма>НК). В то время, как для двух перечисленных выше паттерновокраски характерно противоположное соотношение позитивно окрашенныхклеток (при НК>Норма>БК). Откуда можно сделать вывод, что именно ЦПМокрашивание вносит самый большой вклад в общее количество позитивноокрашенных клеток.Первоначально, оценивая лишь форму и общее количество мембранноцитоплазматически окрашенных клеток, мы предположили, что среди нихвстречаются энтероциты и НЭК.
Затем, мы провели сопоставление одних и техже срезов одинаковых препаратов, одни из которых были окрашены на РС2, адругие на Хромогранин А с целью выявления НЭК. В результате сравнениявыбранных препаратов было обнаружено, что некоторые из РС2+ клеток,окрашенных по мембранно-цитоплазматическому типу, совпали с ХромогранинА позитивными клетками. Что еще раз заставляет нас вернуться кпредположению о том, что некоторые НЭК, имеющие РС2 могут окрашиватьсяпо мембранно-цитоплазматическому типу, а не только мембранно.Согласно изложенному выше механизму интернализации, эти НЭКпредставляют собой те клетки, которые уже связались со своим агонистом –СМС. Большее число клеток с этим окрашиванием наблюдалось при БК, тогда,как количество мембранно окрашенных клеток (которые представляют собойне связанные с СМС НЭК) было наименьшим. Наличие этой связи позволяет108предположить, что при БК наблюдается снижение содержания свободногоСМС, уменьшение количества этого нейропептида наблюдается вследствие егомассивной связи с НЭК, которые подвергаются интернализации.
Здесь можнотак же уследить своеобразную реализацию механизма отрицательной обратнойсвязи: в связи с тем, что при БК большинство РС 2 типа+ клеток находятся всвязанном состоянии, и наблюдаются наиболее выраженные морфологическиепроявления процесса интернализации и насыщения клеток СМС, свободные отСМС клетки уменьшают экспрессию мембранных рецепторов на своейповерхности.Данные результаты ставят под вопрос целесообразность леченияпациентов с БК аналогами СМС, т.к. количество клеток, которые смогутпрореагировать с агонистами (с мембранным типом окрашивания) наименьшеепри БК, в то время, как большинство клеток при БК имеет мембранноцитоплазматическое окрашивание и уже насыщены СМС.Однако большое количество клеток, у которых была окрашена какмембрана, так и цитоплазма, не совпали с Хромогранин А позитивными НЭК, всвязи с этим мы сделали вывод, что данный тип окрашивания характерен также и для других клеток.Даже при беглом взгляде на препарат, становится очевидно, чтобольшинство из этих клеток имеют правильную призматическую форму и неотличаются по своим параметрам от большинства окружающих клеток, в томчисле и негативно окрашенных на РС 2 типа.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
