Диссертация (1140386), страница 15
Текст из файла (страница 15)
Первая причина заключается в том, что случаи, при которых97диагностируетсяНК,являютсявоспалительногопроцессаприпервойБК.Томанифестациейестькаутоиммунногомоментуполученияилеобиоптатов, выраженные морфологические изменения, характерные дляклассической картины БК, еще не успели развиться, а острота воспаления,напротив, находится на своем пике. Таким образом, в связи с остротой процессаи его меньшей по сравнению с БК продолжительностью, приспособительныереакции со стороны иммунной системы в виде увеличения экспрессиирецепторов к основному противовоспалительному медиатору - СМС еще неуспели развитьсяОсобенности и отличия среди РС2+ окрашенных клетокПриболее детальном изучении полученныхв результате ИГХисследования препаратов и подсчета общего числа РС позитивно окрашенныхклеток, было обнаружено, что срезы окрашиваются крайне неравномерно.
Вчастности, были замечены отличия среди позитивно окрашенных клеток по ихформе и прокрашенным структурам в клетке. Выявленные отличия позволилинам сделать предположение, о том, что для различных клеток характернаразнаялокализацияРС2икакследствие–разноеокрашиваниемоноклональным АТ. Для лучшего понимания функции СМС при ВЗК ипатогенеза этой группы заболеваний, в общем, необходимо определить какиеже из клеток экспрессируют РС2. В связи с этим мы решили дать подробнуюхарактеристику найденным по данным аспектам отличиям.В первую очередь на себя обращает внимание разная форма позитивноокрашенных клеток: большинство из которых имеет цилиндрическую иликубическую форму (средний размер этих клеток примерно 12 µm).
Второй типклеток, наблюдаемый при окрашивании, представлен клетками вытянутойнеправильной или треугольной формы (средний размер которых около 20 µm).Третий тип клеток характеризуется округлой формой и наименьшим размеромпримерно 4 µm.98Не смотря на выявленные выраженные различия в форме окрашенныхклеток, определить какие-либо закономерности и судить о происхождении иприроде этих клеток только по их форме невозможно. Это можно объяснитьтем, что, в частности лимфоциты, которые имеют на своей поверхностирецепторы к СМС, имеют возможность менять свою форму при проникновениииз стромы в слой покровного эпителия кишечника (K. Edelblum и др.
2012).Наиболее значимым в выявлении отличий среди РС2позитивно окрашенныхклеток при ВЗК и в норме мы считаем такой показатель, как характерокрашиваемых при ИГХ структур. Даже при беглом взгляде на препараты,окрашенные моноклональным АТ к РС2, можно заметить выраженноеразнообразие среди окрашиваемых структур.В ранее проведенных работах по ИГХ исследованию биоптатовободочной кишки при ВЗК было замечено не только мембранное окрашивание,но и парануклеарное- неспецифическое окрашивание (J.
Bergeijk и др. 1997).Авторы, однако, указывают, что данный паранулкеарный тип окрашиванияскорее всего является не специфичным, в связи с тем, что некоторый изкроличьих АТ, использованных в исследовании, могли давать парануклеарноеокрашивание в неопределенных клетках. Мы же решили проанализироватьобнаруженные нами характерные паттерны окраски более детально.В нашем исследовании мы выделили три характерных типа окрашиванияантителом к РС-2, среди клеток, покрывающих поверхность подвздошнойкишки. Первый тип окраски - истинное мембранное окрашивание, для которогохарактерен подчеркнутый контур мембраны клетки.Второй,выделенныйнамихарактерныйтипокрашивания–цитоплазматическое (ЦПМ) окрашивание, при котором интенсивность окраскинастолько выражена, что вся цитоплазма клетки приобретает равномерную иоднородную интенсивную темную окраску.Третий тип окраски – мембранно - цитоплазматическое окрашивание, длякоторого характерно окрашивание ЦПМ на фоне более ярко окрашенногоободка мембраны.99РС2+ клетки с мембранным типом окрашиванияВ результате исследования, проведенного итальянскими учеными в 2007году (Marco Volante и др.
2007) посвященному изучению и сравнениюрезультатов,полученныхприсцинтиграфиис[IIIIn-DTPA-D-PheI]-октреотидом (как упоминалось выше, данная методика является золотымстандартом по выявлению РС2 при НЕО) и ИГХ исследовании с антителом кРС2, в частности 2 типа, при нейроэндокринных опухолях (НЭО), былообнаружено,чтодляпрепаратов,которыеотличалисьмембраннымокрашиванием на РС2 типа, характерна конкардантность с даннымисцинтиграфии более 94%. Исходя из этого, можно сделать вывод, что НЭК,несущиенасвоейповерхностиРС2окрашиваютсяпреимущественномембранно.Нами был проведен подсчет РС2 позитивно окрашенных клеток систинно мембранным окрашиванием, в результате которого мы получилиследующие результаты:При БК Ме=1, при НК Ме=3, а в норме Ме=2.
Таким образом, число клеток, укоторых была окрашена только мембрана при НК>Норма>БК, напомним, чтообщее число РС2 позитивных клеток при этом при НК наименьшее, а при БКнаибольшее. А согласно проведенному нами ранее исследованиям (?)поизучению характера окрашивания илеобиоптатов с АТ к хромогранину А(универсальный маркер эндокринных гранул) при ВЗК число НЭК также былонаибольшее при НК (Ме=15) и превышало данный показатель при БК (Ме=13).Для того, чтобы доказать, что окрашенные по мембранному типу антителом кРС 2 типа клетки являются НЭК мы провели их сравнение с клетками,окрашенными антителом к Хромогранину А, который является универсальныммаркером специфических эндокринных гранул на тех же препаратах от тех жепациентов. Таким образом, клетки окрашенные мембранно на РС2, совпали сНЭК, окрашенными на Хромогранин А, однако количество РС2 позитивныхклеток с мембранным типом окрашивания оказалось значительно меньшим,чем общее число все Хромогранин А позитивных клеток (13±8 при БК, 15±8100НК, и 9±5 в норме).
Такие показатели объясняются тем, что Хромогранин Аявляется универсальным маркером для НЭК, которые участвуют в синтезе нетолько СМС, но и других нейропептидов (например, субстанция Р и ВИП тоесть как про- так и противовоспалительных молекул) таким образом,осуществляются взаимодействия между различными нейропептидами ииммунными механизмами, а также многочисленными другими БАВ. То есть всеНЭК окрашиваются хромогранином А, а РС2 положительный мембранныйпаттерн окрашивания – характерен только для тех из НЭК (или Хромогранин Апозитивных клеток) которые имеют на своей поверхности рецепторы к СМС. Витоге можно сделать вывод, что клетки с мембранным паттерном окрашиванияявляются НЭК.Каким же образом можно объяснить, выявленные нами отличия враспределении РС2 позитивно окрашенных НЭК в исследуемых группах (приНК>Норма>БК).
Мы рассматриваем два возможных объяснения данномуфеномену.Однойизобщихфизиологическихчерт,присущихG-протеинсцепленным рецепторам (к семейству которых, как указано выше относятся РС)является способность к интернализации рецепторно–лигандного комплексавнутрь клетки при связывании с агонистом рецептора.
В литературе частовстречается описание феномена интернализации рецепторов. После связываниялиганда рецепторы путем эндоцитоза убираются внутрь клетки.Этот феномен наблюдается при связывании рецептора как с синтетическимиагонистами, поступающими извне, так и при действии эндогенного лиганда нарецептор. Лучшим примером подобной реакции являются РС2 в тканяхнейроэндокринныхопухолей(НЭО):высокаястепеньибыстротаинтернализации СМС радиолиганда в клетки НЭО, эскпрессирующих РС2 –является мощным механизмом накопления радиоактивного вещества внутриткани опухоли, благодаря чему возможны успешная диагностика опухоли, атакже проведение таргетной радиотерапии.101Длительное время все исследования по интернализации проводилисьтолько в условиях in vitro (R.
Cescato и др. 2006, Q. Liu и др. 2005, M. Ginj и др.2005, B.A. Nock и др. 2005), в 2009 году Waser и соавт. (B.Waser, 2009)доказали, что для РС2 типа развитие интернализации характерно так же in vivoна экспериментальных моделях животных после введения им агониста СМС.Было обнаружено, что эта агонист-индуцированная интернализация РСявляется крайне быстрым и мощным процессом: почти все РС перемещались склеточной мембраны в эндосомоподобные структуры в цитоплазму, придаваяклеткам другой тип окрашивания при ИГХ исследовании.В 2010 году Reubi и соавт (J. Reubi и др. 2010) впервые доказали, чтолечение НЭО, экспрессирующих РС, октреотидом ассоциировано с агонистиндуцированной интернализацией РС в организме человека.
Помимо этого,было показано, что степень интернализации рецепторного комплекса споверхности клеточной мембраны в цитоплазму зависит от дозы препарата. Таквысокая дозировка синтетических аналогов СМС, а также инфузия октреотидаво время хирургического вмешательство вызывали выраженную и практическиполную интернализацию РС 2 типа. Удаленная в процессе хирургическоговмешательства опухолевая ткань в последствии при ИГХ исследовании смоноклональными АТ к РС 2 типа изменяла мембранный паттерн окрашиваниянацитоплазматическийрезультатыбылиилиполученымембранно-цитоплазматический.иприЭтииммунофлюоресцентномжеметодеисследования опухолевой ткани.СуществованиеэтогомеханизмаотносительноНЭО,возможно,обуславливает быструю потерю чувствительности ткани опухоли к таргетнойтерапии (J.
Reubi и др. 2013).Нельзя отрицать, что интернализация так же имеет место при воздействииэндогенного СМС, как противовоспалительного медиатора, на НЭК диффузнойэндокринной системы кишечника при развитии воспалительной реакции.Учитывая этот феномен и вспомнив, что при БК наблюдается наименьшееколичество СМС, а также наименьшее количество клеток с мембранным102паттерном окрашивания, можно сделать вывод, что большая часть СМС в этихусловиях находится в связанном состоянии с рецепторами НЭК, и в процессеих взаимодействия подверглась интернализации с мембраны внутрь клетки.Такимобразом,можнорассматриватьснижениеРС2+клетокспреимущественно окрашенной мембраной, как своеобразную реакцию, котораяпроисходит в связи с первоначально достаточной секрецией, а затем обильнымсвязыванием СМС с мембранными рецепторами НЭК с последующимперемещением этого лиганд-рецепторного комплекса внутрь клетки.При НК же мы наблюдаем противоположную ситуацию.
Число клеток смембраннымпаттерномнаРС2типаявляетсянаибольшим.Чтосвидетельствует в пользу того, что связывание рецепторов на поверхности НЭКи СМС происходит в меньшей степени. Этот факт можно объяснить тем, чтодля НК, как мы увидим в последствии, характерно наибольшая экспрессия РС 2типа на поверхности лимфоцитов. Возможно, РС 2 типа на поверхности НЭК илимфоцитов конкурируют за связывание с молекулой СМС, которая в большихколичествах связывается с рецепторами на поверхности лимфоцитов, оставляяНЭК интактными, в связи с чем и сохраняется их мембранный типокрашивания.Согласно второй теории, именно эти клетки (с мембранным типомокрашивания) участвуют в синтезе СМС, то есть являются D-клетками.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
