Диссертация (1140386), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Учитывая особенностиморфологии позитивно окрашенных клеток по цитоплазматическому типу и ихнаибольшее число при НК, можно предположить, что они представляют собойиммунные клетки, в частности лимфоциты. Для подтверждения даннойгипотезы проведено сравнение цифровых изображений серийных срезовпрепаратов, окрашенных с использованием антител к РС 2-го типа, с92препаратами, окрашенными с применением антител к CD3 для выявленияинтраэпителиальных Т-лимфоцитов. При этом наблюдалось совпадениеокрашенных клеток по локализации. В дополнение к этому, наибольшее числоCD3+ клеток так же наблюдалось при НК по сравнению с БК.
Таким образом,цитоплазматически окрашенные, расположенные среди эпителия темныемелкие клетки, скорее всего, представляют собой Т-лимфоциты, мигрирующиеиз стромы к поверхности подвздошной кишки. Учитывая особенности влиянияСМС на иммунные клетки в виде торможения их пролиферации и синтеза имипровоспалительных цитокинов, можно предположить, что экспрессия РС 2-готипа лимфоцитами играет роль в подавлении воспалительного процесса.Таким образом, количество позитивно окрашенных таким образом клетокмаксимально при БК, меньше в неизмененной слизистой оболочке и ещеменьше при НК.Такое распределение характерно и для всех клеток, экспрессировавшихРС 2-го типа.
По своей форме большинство клеток со смешанной экспрессиейРС 2-го типа представляли собой кубические или цилиндрические, малоотличающиеся от окружающих энтероцитов, однако среди них встречалиськлетки треугольной или неправильной формы. В результате сравненияотсканированных цифровых изображений серийных срезов обнаружено, чтонекоторые из клеток с мембранно-цитоплазматической экспрессией РС 2-готипа, совпали по локализации и форме с хромогранин А позитивнымиклетками. Это указывает на возможность окрашивания нейроэндокринныхклеток не только по мембранному, но и по смешанному варианту. Согласномеханизму интернализации (Y.Chowers, 2000) эти НЭК являются, по-видимому,клетками, в которых РС уже связались со своим агонистом – СМС.
Большеечисло клеток с таким окрашиванием наблюдается при БК, тогда, какколичество мембранно окрашенных клеток (НЭК, РС которых не связаны сСМС) при БК наименьшее.Большоеколичествоклетоксмебранно-цитоплазматическимокрашиванием при реакции с антителами к РС 2-го типа не совпали по93локализации и форме с хромогранин А позитивными нейроэндокриннымиклетками. Такие клетки отличались правильной призматической формой, такойже, как и соседние энтероциты.
По-видимому, они и являются энтероцитами сРС 2-го типа. Эффекты СМС многогранны и, помимо действия какпротивовоспалительногонейромедиаторанаклеткииммуннойинейроэндокринной систем, он так же обладает способностью тормозитьпролиферацию клеток, в том числе и энтероцитов, подавлять регенерациюповерхностного эпителия, способствовать его дифференцировке и созреванию(L. Xiao и др. 2014, J. Bergeijk и др. 1997)ОбсуждениеОбщее количество РС2+ клетокВ результате проведенного нами исследования мы обнаружили, чтопозитивно окрашенные антителом к РС2 клетки, находились преимущественнона поверхности слизистой ворсин, а также в криптах, в строме и в лимфоидныхобразованиях, при этом окрашенные клетки располагались в основномодиночно, не образуя каких-либо скоплений.
После изучения полученных врезультате ИГХ окрашивания илеобиоптатов мы провели подсчет всехпозитивноокрашенныхклеток,на100клетокслизистойоболочки,покрывающих поверхность ворсин, т.к. такой способ оценки количества клетокявляется наиболее стандартизованным. В результате проведенного подсчета,нам удалось установить достоверные различия между общим числом РС2позитивно окрашенных клеток при ВЗК (при БК и НК) и в норме и получитьстатистически достоверную взаимосвязь между повышением экспрессиирецепторов к СМС на клетках в подвздошной кишке и возникновениемвоспалительного процесса.В итоге было обнаружено, что наибольшее общее число позитивноокрашенных антителом клеток наблюдается при БК (Ме=11, ИК=8).
Меньшеечисло клеток окрашивается при НК (Ме=5, ИК=3), а нормальная слизистаязанимает промежуточное положение по числу клеток, имеющих на своей94поверхности рецепторов к СМС (Ме=8, ИК=5,5). Следовательно, медиана числаклеток с РС 2-го типа уменьшалась в ряду БК - норма - НК.Большинство проведенных ранее исследований были направлены наанализ СМС содержащих клеток, а не тех клеток, на поверхности которых былаобнаружена экспрессия РС (J.
Bergeijk и др. 1997, L. Xiao и др 2014, K.Edelblum, 2012, J. Bergeijk и др. 1997, A. Fernandez и др. 2008). В результатеэтих работ было выявлено, что при ВЗК значительно уменьшается число СМСсодержащих клеток, в особенности в дистальных отделах ободочной кишки.Однако данные отличия были обнаружены преимущественно при ЯК.Подобных изменений и выраженных различий между БК и нормой выявлено небыло, некоторые авторы даже делают акцент на том, что изменения всодержании СМС в ободочной кишке при БК менее очевидны, что вполнелогично, поскольку наиболее активно воспалительный процесс при БКпротекает в зоне подзвдошной кишки. Однако авторы данной статьи так жеуверяют, что и в очагах воспаления в терминальном отделе тонкого кишечникапри БК никаких изменений в распределении и количестве СМС содержащихклеток не наблюдается (J.
Bergeijk и др. 1997). Однако другим исследователям,все же удалось выявить количественные отличия относительно СМСсодержащих клеток в подвздошной кишке при БК и в норме (J. Bergeijk и др.,1997, A. Fernandez и др. 2008).Таким образом, в литературе имеются данные о том, что с помощью ИГХисследования и сцинтиграфии, было установлено, что концентрация СМС вслизистой кишечника у пациентов с ВЗК снижена, в то время как плотностьсоматостатиновых рецепторов увеличивается, при этом СМС играет рользащитного агента для слизистой кишечника, и выраженное повреждениеслизистой оболочки у больных с ВЗК развивается так же из-за снижениясинтеза этого нейропептида в кишечнике (A.M ten Bokum и др.
2000, J. Bergeijkи др., 1997, A. Fernandez и др. 2008).Что же касается исследований, посвященных изучению экспрессии РС2на поверхности клеток слизистой кишечника при ВЗК, их значительно меньше.95В одном из них указывается, что при ВЗК и в норме среди эпителия слизистой,нервных сплетений или лимфатических фолликулов, отличий в содержанииРС2 позитивных клеток обнаружено не было (J. Bergeijk и др. 1997).
Однако,согласно другому исследованию, проведенному в 1997 году, плотность РС2увеличивается при ВЗК, однако изменения снова касаются в основномободочной кишки (J. Bergeijk и др., 1997). В этой же работе было показано, чтодля ВЗК (и БК в том числе) характерно увеличение экспрессии РС 2 типа наповерхности клеток стенок венул, а также на иммунных клетках вперифокальных очагах лейкоцитарной инфильтрации. Было так же выявленоналичие корреляции между нарастанием степени активности заболевания иувеличением экспрессии рецепторов к СМС, что так же подтверждаетприведенную нами концепцию о приспособительной и защитной функцияхСМС и увеличения экспрессии РС2 в фазе активного воспаления с цельюоказать ингибирующее влияние на пролиферацию и миграцию иммунныхклеток, а также на синтез многих провоспалительных медиаторов.Мы же обнаружили увеличение экспрессии РС2 активной фазе БК, чтоможет быть связано с тем, что количество свободного СМС, как основногопротивовоспалительного пептида при БК снижается.
Эти изменения, какнаписано выше, уже были подтверждены экспериментально с помощью ИГХисследования и сцинтиграфии с октреотидом (M. Reinshagen, J. Bergeijk и др.,1997). Помимо этого, в более ранних работах, был так же сделан вывод, чтоподобное снижение СМС содержащих и вырабатывающих клеток не являетсявторичной реакцией на воспаление, что подтверждается одновременнымувеличениемколичестваиконцентрацииклеток,синтезирующихпровоспалительные нейропептиды, такие как СП и ВИП (J. Bergeijk и др. 1997).Таким образом, подобную реакцию в виде увеличения экспрессии РС наповерхности эпителиальных клеток слизистой кишечника в ответ на снижениеосновного противоспалительного нейропептида и нейромедиатора можнорассматривать как приспособительный механизм.
Это дает возможностьпредположить о существовании механизма отрицательной обратной связи в96регуляции местных нейроэндокринно-иммунных процессов в кишечнике, оналичии которого так же упоминалось в ранних работах J. Bergeijk и соавт.(1997). Таким образом, с помощью усиления экспрессии рецепторов к СМСслизистая пытается приспособиться к все нарастающим воспалительнымреакциям со стороны организма при БК.В данном разделе мы еще не раз вернемся к аргументам, в пользу того,что увеличение экспрессии РС действительно является приспособительнойреакцией организма, в ответ на снижение общего числа СМС содержащихклеток.Было обнаружено, что большая часть запасов СМС находится в ЖКТ,причем 75% СМС содержится в тканях кишечника и поджелудочной железы, изних 90% содержат НЭК слизистой кишечника (J.
Bergeijk и др. 1997). Поэтомуприсутствие РС на поверхности клеток нормальной слизистой вполнеобъяснимо: они необходимы для нормальной регуляции синтеза и выработкиразличных БАВ (в том числе СМС) нейроэндокринными клетками кишечника,а также для контроля различных местных иммунных и пролиферативныхпроцессов, что так же можно считать приспособительной защитной функцией.Таким образом, СМС, локализованный в ткани кишечника, оказываетсвязующую функцию между нейроэндокринной и иммунной системамиорганизма, обуславливая тесную взаимосвязь данных систем, и обеспечиваяпостоянство и равновесие между ними, благодаря чему предупреждаетсяразвитие избыточного и чрезмерного иммунного ответа с дальнейшимпереходом в ВЗК и, таким образом предохраняя слизистую от повреждения. Всвязи с этим можно предположить, что число РС2 позитивных клеток,полученное нами при ИГХ исследовании биоптатов нормальной слизистой изконтрольной группы (Ме=8, ИК=5,5) является нормальным и необходимым дляадекватного иммунного ответа и нормального гомеостаза слизистой.Наименьшее общее число РС 2 типа наблюдалось при НК (Ме=5, ИК=3),что можно объяснить двумя причинами, вторая из которых будет раскрытаниже.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
