Диссертация (1140386), страница 13
Текст из файла (страница 13)
ЭКСПРЕССИЯ РЕЦЕПТОРОВ К СОМАТОСТАТИНУ ВСЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКЕ ПОДВЗДОШНОЙ КИШКИ У БОЛЬНЫХ СВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ КИШЕЧНИКАИзучены биоптаты подвздошной кишки у 108-х больных, из них у 44 – склинико-морфологически подтвержденной БК и 22, у которых провестидифференциальный диагноз между БК и ЯК на момент исследования непредставлялось возможным, в результате чего был поставлен диагноз НК. Вкачестве группы сравнения исследованы биоптаты у 42 пациентов без ВЗК снеизмененной слизистой оболочкой подвздошной кишки (данным пациентамбыла проведена колоноскопия для исключения воспалительных процессов илиопухолей).Средиотсканированныхнаслайд-сканереAperioAT2(«LeicaBiosystems», Германия) препаратов отбирали слайд-сканы для последующегоколичественного подсчета РС-2 позитивно окрашенных клеток.
Полученныецифровые изображения также позволили провести сопоставление изображенийи выполнить измерения размеров клеток и структур слизистой оболочки спомощью программы Aperio Imagescope («Leica Biosystems», Германия).Среднее количество областей, выбранных для подсчета позитивно окрашенныхклеток, обнаруживаемых среди клеток эпителия ворсин в каждом из биоптатов,составило 10.
Помимо общего числа РС-2 позитивных клеток, производилиподсчет клеток в зависимости от особенностей окрашивания. Пересчетполученныхрезультатовпроизводилина100эпителиальныхклеток,покрывающих поверхность ворсин слизистой оболочки.Результаты проведенного исследования показали, что клетки, позитивноокрашенные антителами к РС 2-го типа, локализовались преимущественно наповерхности ворсин, а также в криптах (рисунок 36).85Рисунок 36.
Болезнь Крона. Среди эпителиоцитов, выстилающих ворсину слизистойоболочки подвздошной кишки, большое число клеток, экспрессирующих рецепторысоматостатина 2-го типа. Позитивно окрашенные клетки отличаются различнойформой и размерами, а также интенсивностью окрашивания мембраны и цитоплазмы.Иммуногистохимическая реакция с РС 2 типа х 400.Рисунок 37. Болезнь Крона.
Клетки, экспрессирующие рецепторы соматостатина 2-готипа локализуются не только в криптах слизистой оболочки подвздошной кишки, нои в собственной пластинке среди клеток воспалительного инфильтрата.Иммуногистохимическая реакция с РС 2 типа х 400.86Кроме того, позитивно окрашенные клетки выявлены в собственнойпластинке слизистой оболочки среди клеток инфильтрата, при этом онирасполагались в основном одиночно, или образуя небольшие скопления(рисунок 37).Отмечалось позитивное окрашивание центров лимфоидных фолликулов в видесети и ганглиозных клеток подслизистого слоя, если они обнаруживались вбиоптате (рисунок 38).Рисунок 38.
Неклассифицированный колит. Лимфоидный фолликул с крупнымцентром размножения в слизистой оболочке подвздошной кишки. Экспрессиярецепторов к соматостатину 2-го типа клетками центра размножения, формирующихсеть, и единичными клетками, расположенными среди эпителия, прилежащего климфоидному фолликулу, а также в эпителии крипт. Иммуногистохимическаяреакция с РС 2 типа х 200.Подсчет всех клеток, позитивно окрашенных антителами к РС 2-го типа,на 100 эпителиоцитов слизистой оболочки, покрывающих поверхность ворсин,продемонстрировал, что при БК число таких клеток колебалось от 3 до 29(Медиана [М] = 11, интерквартильный размах [ИК] = 8).
При НК их количествосоставило от 2 до 19 (М=5, ИК=3), а в группе сравнения - от 2 до 29 (М=8,ИК=5,5) (рисунок 39). Следовательно, медиана числа клеток с РС 2-го типа87уменьшалась в ряду БК – норма – НК. При статистическом сравненииполученных данных отличия в группах оказались достоверными (р<0.05).Критерий25Манна-Уитни(двусторонний)20p-value1510Норма vs НК0.0145Норма vs БК0.0480БК vs НК0.0001БКНКНормаРисунок 39. Число клеток, экспрессирующих рецепторы соматостатина 2-го типа, приБК, НК и в неизмененной слизистой оболочке подвздошной кишки в пересчете на 100эпителиальных клеток, покрывающих ворсину, и статистические отличия междугруппами. Здесь и на рис.
6-8 данные представлены в виде диаграммы размаха:медиана, границы 1-го и 3-го квартилей (границы «ящика»), 9-й и 91-й процентили(концы «усов»).Большинство проведенных ранее исследований были направлены наанализ клеток, продуцирующих СМС, а не экспрессирующих РС (J.Bergeijk, идр., M. Reinshagen, 1997). В этих работах было выявлено, что при ВЗК,особенно у больных с ЯК, значительно уменьшается число СМС-содержащихклеток, преимущественно в дистальных отделах ободочной кишки. Подобныхразличий между БК и неизмененной слизистой оболочкой обнаружено не было(J.Bergeijk, 1997).При более детальном изучении препаратов, полученных в результатеИГХ исследования, отмечены различия в форме и размерах позитивноокрашенных клеток, а также характере экспрессии РС 2-го типа.88В первую очередь обращала на себя внимание разная форма позитивноокрашенных клеток, большинство из которых имело цилиндрическую иликубическую форму (диаметр этих клеток равен, в среднем, 12 ± 4 µm).
Второйтип представлен клетками вытянутой неправильной или треугольной формы(средний диаметр – 20 ± 5 µm). Третий тип клеток отличался округлой формойи средним диаметром 4 ± 2 µm.Выделено три варианта экспрессии РС 2-го типа: преимущественномембранная,цитоплазматическаяисмешанная,мембранно-цитоплазматическая. Для первого варианта характерен подчеркнутый контурмембраны клетки и отсутствие окрашивания цитоплазмы, при втором –интенсивность экспрессии настолько выражена, что вся клетка вместе с еемембраной приобретает равномерную и однородную интенсивную коричневуюокраску.Третийотличался окрашиваниемцитоплазмыс подчеркнутоинтенсивно окрашенной мембраной клетки.Подсчет позитивно окрашенных клеток с мембранной экспрессией РС 2го типа показал, что медиана этого показателя при БК составила 1 (М=1,ИК=0.5), при НК – 3 (М=3, ИК=2.5), а в группе сравнения – 2 (М=2, ИК=2) (рис.6).
Следовательно, медиана числа клеток с мембранной экспрессией РС 2-готипа уменьшалась в ряду НК – норма – БК (р<0.05), при этом, общее числоклеток, позитивно окрашенных с антителами к РС 2-го типа при НК оказалосьнаименьшим, а при БК наибольшим. Согласно проведенному исследованию сантителами к хромогранину А (универсальный маркер нейроэндокринныхклеток) при ВЗК число таких клеток также было наибольшим при НК (М=15,ИК=6) и превышало данный показатель при БК (Ме=13, ИК=5) (р<0.05).89КритерийМанна-Уитни(двусторонний)p-valueНорма vs НК0.043Норма vs БК0.035БК vs НК0.0005Рисунок 40.
Число клеток, экспрессирующих рецепторы соматостатина 2-го типа, приБК, НК и в неизмененной слизистой оболочке подвздошной кишки в пересчете на 100эпителиальных клеток, покрывающих ворсину, с мембранным вариантомокрашивания и статистические отличия между группами.Для того, чтобы показать, что клетки с мембранной экспрессией РС 2-готипа являются нейроэндокринными, проведено сравнение их локализации склетками,окрашеннымиантителамикхромогранинуАспомощьюотсканированных изображений серийных срезов тех же биоптатов. Наполученных цифровых изображениях, локализация клеток с мембраннойэкспрессиейположительноРС2-готипаокрашеннымисовпаласантителаминейроэндокриннымикхромогранинуА.клетками,Однакоколичество клеток с мембранной экспрессией РС 2-го типа оказалосьзначительно меньшим, чем общее число всех хромогранин А позитивныхклеток.
Полученные результаты объясняются тем, что хромогранин А являетсяуниверсальным маркером для нейроэндокринных клеток, которые участвуют всинтезе не только СМС, но и других нейропептидов.Для второго варианта окрашивания обнаружено, что количество клеток сцитоплазматической экспрессией РС 2-го типа при БК составило от 1 до 3(М=1, ИК=2), минимальное и максимальное количество подобным образомокрашенных клеток при НК – от 1 до 7 (М=3, ИК=2). В неизмененнойслизистой оболочке количество этих клеток составило от 1 до 3 (М=2, ИК=1),таким образом, данный показатель оказался максимальным при НК, меньше – в90неизмененной слизистой оболочке и еще меньше – при БК (р<0.05) (рисунок41).Критерий Манна-Уитни p-value6543210(двусторонний)БКНКНормаНорма vs НК0.047Норма vs БК0.98БК vs НК0.029Рисунок 42.
Число клеток, экспрессирующих рецепторы соматостатина 2-го типа, приБК, НК и в неизмененной слизистой оболочке подвздошной кишки в пересчете на 100эпителиальных клеток, покрывающих ворсину, с цитоплазматическим вариантомокрашивания и статистические отличия между группами.Клетки с таким окрашиванием по своей форме преимущественно мелкиеи округлые, со средним диаметром 4 ± 2 µm. Учитывая особенностиморфологии позитивно окрашенных клеток по цитоплазматическому типу и ихнаибольшее число при НК, можно предположить, что они представляют собойиммунные клетки – межэпителиальные лимфоциты.
Для подтверждения даннойгипотезы проведено сравнение цифровых изображений серийных срезовпрепаратов, окрашенных с использованием антител к РС 2-го типа, спрепаратами, окрашенными с применением антител к CD3 для выявлениямежэпителиальныхТ-лимфоцитов.Приэтомнаблюдалосьсовпадениеокрашенных клеток по локализации.
В дополнение к этому, наибольшее числоCD3+ клеток так же наблюдалось при НК по сравнению с БК. Таким образом,цитоплазматически окрашенные, расположенные среди эпителия темныемелкие клетки, скорее всего, представляют собой Т-лимфоциты, мигрирующиеиз стромы к поверхности подвздошной кишки. Учитывая особенности влиянияСМС на иммунные клетки в виде торможения их пролиферации и синтеза имипровоспалительных цитокинов (В.В. Яглов, 2013) можно предположить, чтоэкспрессияРС2-готипалимфоцитамииграетрольвподавлении91воспалительного процесса.
При БК нарушается нейро-гуморально-иммуннаярегуляция воспаления, о чем свидетельствует уменьшение экспрессии РС 2-готипа на мембране иммунных клеток-эффекторов. Как следствие, снижаетсяпротивовоспалительный эффект СМС, повышается пролиферация лимфоцитови продукция ими провоспалительных медиаторов, которая поддерживаетвоспалительный процесс.Большинствоклетокотличалосьсмешанной,мембранно-цитоплазматической экспрессией РС 2-го типа. При БК (Ме=1, ИК=0,5), приНК (Ме=3, ИК=2), а в норме (Ме=2, ИК=1), таким образом, данный показательоказался максимальным при НК, меньше – в неизмененной слизистой оболочкеи еще меньше – при БК(р<0.05) (рисунок 43).Критерий12Манна- p-valueУитни (двусторонний)1086420БКНКНормаНорма vs НК0.21Норма vs БК0.0016БК vs НК0.0031Рисунок 43.Число клеток, экспрессирующих рецепторы соматостатина 2-го типа, приБК, НК и в неизмененной слизистой оболочке подвздошной кишки в пересчете на 100эпителиальных клеток, покрывающих ворсину, с мембранно-цитоплазматическимвариантом окрашивания и статистические отличия между группами.Клетки с таким окрашиванием по своей форме преимущественно мелкиеи округлые, со средним диаметром 4 ± 2 µm.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
