Диссертация (1140386), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Число нейроэндокринных клеток при подсчете на одну ворсину приболезни Крона, неклассифицированном колите и в неизмененной слизистой оболочкеподвздошной кишки и статистические отличия между группами. Данныепредставлены в виде диаграммы размаха: медиана, границы 1-го и 3-го квартилей(границы «ящика»), 9-й и 91-й процентили (концы «усов»).Статистическая обработка полученных данных показала, что содержаниеНЭК в подвергнутых подсчету структурах биоптатов подвздошной кишкиоказалась достоверно выше при воспалительных заболеваниях кишечника – БКи НК, по сравнению с неизменной слизистой оболочкой, и, несмотря на то, чтомаксимальные значения НЭК в последней при подсчете на крипту совпали счислом Хромогранин А - позитивных клеток при НК, их среднее значение былозначительно ниже. Достоверных различий в количестве НЭК при БК и НКустановить не удалось, хотя при НК отмечено незначительное увеличениечисла Хромогранин А-позитивных клеток.Для оценки иммунологических изменений при БК, проведен анализрезультатов, полученных при подсчете CD3 позитивных клеток на поверхностиворсин (интраэпителиальных Т-лимфоцитов).
Их количество у пациентов с БК,полученное при расчете числа CD3+ клеток при размере ворсин от 400 µm именее, составило от 7 до 62 (Ме=23±11). Максимальное и минимальноезначения, полученные при подсчете Т-лимфоцитов на поверхности ворсин,количество эпителиальных клеток которых превышало 100 клеток (размер77ворсин более 401 µm), равнялись 28 и 63, соответственно (Ме= 39,5±11)(рисунок 30).Рисунок 30.
Болезнь Крона. Межэпителиальные лимфоциты среди эпителия ворсиныразмером менее 100 клеток. Иммуногистохимическая реакция с CD3 х200.78Рисунок 31. Болезнь Крона. Межэпителиальные лимфоциты среди эпителия ворсиныразмером более 100 клеток. Иммуногистохимическая реакция с CD3 х200.В результате количественной оценки изменений Т-клеточного звена при НКбылиполученыследующиерезультаты:числоинтраэпителиальныхлимфоцитов в ворсинах, насчитывающих менее 100 энтероцитов (размерворсин от 400 µm и менее) составило от 11 до 49 клеток (Ме=24±8).Максимальные и минимальные значения CD3 позитивно окрашенных клеток наповерхности ворсин, количество эпителиальных клеток которых превышало100 клеток (размер ворсин более 401 µm) равнялось 26 и 70 соответственно(Ме=46±13).Рисунок 32.
Неклассифицированный колит. Межэпителиальные лимфоциты средиэпителия ворсины размером менее 100 клеток. Иммуногистохимическая реакция сCD3 х200.79Рисунок 33. Неклассифицированный колит. Межэпителиальные лимфоциты средиэпителия ворсины размером более 100 клеток. Иммуногистохимическая реакция сCD3 х200.В контрольной группе минимальные и максимальные значения CD3позитивных клеток, в расчете на ворсину, поверхностный эпителий которойсоставлял менее 100 клеток, соответствовали 3 и 50 клеткам (Ме=18±9).
Амежэпителиальные лимфоциты в ворсинах, поверхность которых покрывалоболее 100 энтероцитов, составили от 22 до 40 клеток (Ме=29±6) (рисунок 34).80Рисунок 34. Контрольная группа. Межэпителиальные лимфоциты среди эпителияворсины размером более 100 клеток. Иммуногистохимическая реакция с CD3 х200.Результаты статистической обработки полученных данных представлены надиаграмме (рисунок 35).403530Критерий МаннаУитни(двусторонний)Норма vs НКНорма vs БКБК vs НК2520151050БКНКp-value0.00170.0170.63НормаРисунок 35. Число межэпителиальных лимфоцитов при подсчете на 100эпителиальных клеток при болезни Крона, неклассифицированном колите и внеизмененной слизистой оболочке подвздошной кишки и статистические отличиямежду группами.
Данные представлены в виде диаграммы размаха: медиана, границы1-го и 3-го квартилей (границы «ящика»), 9-й и 91-й процентили (концы «усов»).По результатам статистической обработки данных трех групп пациентовследует отметить, что содержание интраэпителиальных Т-лимфоцитов во всех81подвергнутых подсчету структурах биоптатов подвздошной кишки оказалосьдостоверно выше при воспалительных заболеваниях кишечника – БК и НК посравнению с неизмененной слизистой оболочкой. Однако достоверныхразличий в изменении числа CD3+ клеток при БК и НК, достаточных дляпроведения дифференциального диагноза при подсчете интраэпителиальныхлимфоцитов на менее чем 100 энтероцитов, отмечено не было (при НКотмечается незначительно более высокое число CD3 позитивных клеток).
Приоценке количества интраэпителиальных Т-лимфоцитов на 100 и болееэпителиальных клеток кишечника было замечено превышение числа клеток приНК по сравнению с БК.Таким образом, в результате проведенного исследования удалосьустановить достоверные различия между числом НЭК и интраэпителиальныхлимфоцитов при ВЗК и в норме и получить статистически достовернуювзаимосвязь между повышением НЭК и CD3+ клеток в подвздошной кишке иналичиемвоспалительногопроцесса.Такимобразом,подтвержденысуществующие на сегодняшний день гипотезы о роли в возникновении иразвитииВЗКиммунологического(вчастностиТ-клеточного)инейроэндокринного факторов.
Помимо этого, проведенное исследованиенаглядно демонстрирует однонаправленный характер процессов, происходящихпри ВЗК в иммунной и нейрогуморальной системах кишечника (увеличение какчисла НЭК, так и количества интраэпителиальных лимфоцитов при ВЗК посравнению с нормой). Результаты, полученные при оценке изменений числаНЭК, могут быть объяснены с позиций повышения регенераторной активностии пролиферации НЭК в воспаленной подвздошной кишке. Повышенноеколичество НЭК может также отражать нарушения при воспалительныхзаболеваниях кишечника в нейроэндокринной системе кишечника.Данные о количественной оценке числа интраэпителиальных лимфоцитоввстречаются крайне редко. По результатам немногочисленных исследований,посвященных количественной оценке числа Т-клеток в подвздошной кишке,было установлено, что при лимфоцитарном и коллагенозном колитах число82интраэпителиальных лимфоцитов составляет от 0 до 4 (H.
Sapp и др. 2002, V.Padmanabhan и др. 2003) клеток. Количественные данные, касающиесяизменений в местном Т-клеточном иммунитете при ВЗК отсутствуют.Врезультатепроведенногоисследования,приподсчетеинтраэпителиальных Т-лимфоцитов на поверхности ворсин было отмечено, чтоих число значительно выше при БК и НК, по сравнению с нормой, чтоподтверждает роль Т-клеточного звена в возникновении и развитии БК.
Присравнениичислаинтраэпителиальныхлимфоцитовна100иболееэпителиальных клеток ворсины в контрольной группе, с результатами ранеепроведенного исследования по изучению CD3+ клеток у здоровых людей вилеобиоптатах (Y.Zhang, и др. 2014) количество Т-лимфоцитов, обнаруженныхв норме в проведенном исследовании, оказалось значительно выше. Стольсущественные различия могут быть связаны с различными подходами кподсчету CD3 позитивно окрашенных клеток, а также с разницей в выбореворсин для подсчета.Исследование показало, что изучаемые маркеры можно использовать вкачестве дополнительных признаков для морфологической диагностики БК вилеобиоптатах.
Одновременное увеличение НЭК и Т-клеток при проведенииИГХ исследования илеобиоптатов с антителами к Хромогранину А и к CD3свидетельствует о развитии воспалительной реакции. При количественнойоценке данных критериев целесообразно использовать следующие реверсныезначения: при подсчете НЭК среди эпителия одной ворсины или крипты,срезанной продольно, число окрашенных антителом к Хромогранину А клеток>10 следует рассматривать, как подозрительный в отношении возникновенияВЗК критерий, и должно насторожить морфолога. Количество НЭК вилеобиоптатах >20 можно считать диагностическим критерием, и в случаесомнений в диагнозе, склоняться в пользу ВЗК. Повышение числа ХромогранинАпозитивноокрашенныхклетокдолжносочетатьсясувеличениеминтраэпителиальных Т-лимфоцитов.
Однако, как показывают полученныеданные, различия при подсчете числа интраэпителиальных Т-лимфоцитов при83ВЗК и у здоровых пациентов более очевидны при подсчете CD3+клеток на 100и более энтероцитов одной ворсины (при размере ворсины от 401 µm и более).В этом случае число положительно окрашенных при ИГХ исследовании клеток>30 следует считать подозрительным в отношении ВЗК, а количествоинтраэпителиальных Т-лимфоцитов > 40 – можно считать диагностическим.В результате проведенного исследования не удалось установитьдостоверных различий между числом исследуемых маркеров при БК и НК.Этот факт можно объяснить тем, что при изучении илеобиоптатов в случае,когда диагноз не совсем ясен, многие морфологи ставят диагноз НК прималейшем сомнении по поводу наличия у пациента БК. То есть можнопредположить, что основная масса случаев, обозначенных, как НК, на самомделе являютсяБК.Помимоэтого,полученные результатыеще разподтверждают общность данных заболеваний и, возможно, ставит под вопросправомерность использования диагноза НК.
Однако, как при расчете НЭК, таки интраэпителиальных Т-лимфоцитов, при НК было выявлено незначительноепревышение обоих показателей по сравнению с БК. Данные изменения могутбыть объяснены тем, что случаи, при которых диагностируется НК, являютсяпервой манифестацией аутоиммунного воспалительного процесса при БК. Тоесть к моменту получения илеобиоптатов, выраженные морфологическиеизменения, характерные для классической картины БК, еще не успелиразвиться, а острота воспаления, напротив, находится на своем пике.Таким образом, можно предположить, что НК является первымпроявлением ВЗК и в случае поражения подвздошной кишки, можно с большойвероятностью говорить о диагнозе БК.84ГЛАВА 5.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
