Диссертация (1140384), страница 21
Текст из файла (страница 21)
aeruginosa (таб. 13). Как видно из этой таблицы, самые высокиеуровни МПК карбапенемов встречаются у изолятов с менее распространеннымимеханизмами. Это можно объяснить с позиции энергозатрат, которыесинегнойная палочка расходует на реализацию того или иного механизмарезистентности.Бета-лактамазыявляютсянаиболееэффективнымиинактиваторами карбапенемов, но они имеют белковую структуру, а значит, ихпостоянный синтез (они продуцируются конституитивно) требует максимальныхэнергозатрат.
Это снижает конкурентоспособность бактерий в отсутствииантибиотиков, поэтому такой механизм не может получить максимальногораспространения.Альтернативныемеханизмы(гиперэффлюкс,oprD-инактивация), напротив, не требуют синтеза дополнительных протеинов. Болеетого, они могут работать за счет угнетения синтеза белка (снижение экспрессииoprD), следовательно, являются более экономичными. И хотя они не приводят кросту МПК карбапенемов до максимальных значений, уровень резистентности,генерируемый за счет этих механизмов, способен обеспечить выживание вусловиях воздействия терапевтических доз антибиотика, не нанося ущербаэнергетическимпотребностямсинегнойнойпалочки.Отсюдалогичным137выглядитболееширокоераспространениесредикарба-НЧ-изолятовгиперактивности эффлюкс-систем и инактивации порина OprD.Таблица 13Механизмы карбапенемрезистентности, частота их встречаемости иповышение общего уровня устойчивости к карбапенемам у клиническихизолятов P.
aeruginosaМПК,Ме (0,25; 0,75)Механизмы, включающие:продукциюкарбапенемазгиперпродукциюцефалоспориназМеханизмы,включающиеoprDинактивациюмеропенем256 (256; 512)128 (16; 256)32 (8; 256)32 (8; 128)имипенем512 (256;512)64 (32; 128)32 (16; 256)32 (16; 128)29%29%96%55%Частотавстречаемости (%от всех карба-НЧизолятов)Механизмы,включающиегиперэффлюксВероятно, отбор механизмов резистентности и выживание успешныхклонов P. aeruginosa с определенными сочетаниями механизмов зависит отмногихусловий,включаяэкологическиеособенности,воздействиеантибактериальных препаратов, микроокружение (наличие потенциальныхбактерий-доноров генов резистентности – bla-генов и IS-элементов, способных кгоризонтальному переносу).
Всё это определяет сложность молекулярногенетических механизмов устойчивости P. aeruginosa к карбапенемам, котораяпродемонстрированаисследовании.ирасшифрованавнастоящемдиссертационном138ВЫВОДЫ1.Восуществленииферментативнойинактивациикарбапенемов(меропенема и имипенема) у карбапенемнечувствительных изолятов P.
aeruginosaпринимает участие два типа бета-лактамаз: цефалоспориназы в сочетании с другимимеханизмами устойчивости (гиперэффлюкс и/или oprD-инактивация) и металлобета-лактамазы группы VIM. Наличие инактивирующих карбапенемы бета-лактамаз(металло-бета-лактамазыVIM-группыигиперпродукцияцефалоспориназ)ассоциируется у клинических изолятов P. aeruginosa с формированием наиболеевысоких значений МПК меропенема и имипенема.2.Факт продукции карбапенемаз (металло-бета-лактамаз группы VIM) укарбапенемнечувствительных изолятов P. aeruginosa быстро и достоверновыявляетсяспомощьюматрично-активированнойлазернойдесорбционно-ионизационной времяпролетной масс-спектрометрии.3.Инактивация порина OprD (мутации в гене oprD, ведущие к обрывусинтеза порина OprD, а также снижение экспрессии oprD) является наиболеераспространенным механизмом нечувствительности к карбапенемам у клиническихизолятов P.
aeruginosa. Мутации в гене oprD у нечувствительных к карбапенемамизолятов P. aeruginosa отличаются высокой степенью разнообразия и представленыпреждевременными стоп-кодонами, сдвигами рамки считывания и вставкоймобильных генетических элементов (IS).4.У штаммов P. aeruginosa с инактивацией порина ОprD, не сочетающейсяс продукцией карбапенемаз и гиперпродукцией цефалоспориназ, регистрируетсяболее низкий уровень резистентности к карбапенемам, чем у штаммов,продуцирующих металло-бета-лактамазы группы VIM или гиперпродуцирующихцефалоспориназы.5.свойствомГиперактивность RND-эффлюкс-систем является часто встречающимсякарбапенемнечувствительныхизолятовкарбапенемчувствительных штаммов P. aeruginosa.инерегистрируетсяу1396.Различия между уровнями устойчивости к карбапенемам средиклинических изолятов P.
aeruginosa с разными сочетаниями механизмов возникаютлишь благодаря продукции металло-бета-лактамаз группы VIM или гиперпродукциицефалоспориназ, которые статистически значимо повышают уровни резистентностик меропенему и имипенему.140ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИДля1.оптимизацииантибактериальнойтерапиисинегнойнойинфекции, вызванной карбапенемнечувствительными штаммами, необходимопроводить расшифровку механизмов устойчивости изолята-возбудителя P.aeruginosa к карбапенемам при помощи фенотипических, молекулярногенетических и масс-спектрометрических методов.Для2.ускоренноговыявлениякарбапенемазныхмеханизмовустойчивости у клинических изолятов P. aeruginosa предлагается использоватьвариантматрично-активированнойлазернойдесорбционно-ионизационнойвремяпролетной масс-спектрометрии, описанный в настоящем диссертационномисследовании.3.Длядетальногоопределениябета-лактамазныхмеханизмоврезистентности P.
aeruginosa к карбапенемам целесообразно применениеупрощенного (с использованием МБЛ-Е-теста и теста с нитроцефином) илиразвернутого (с использованием МАЛДИ-ВП МС, детекции генов карбапенемазитестаснитроцефином)лабораторно-диагностическихалгоритмов,предложенных в диссертационном исследовании.4.Для повышения эффективности эпидемиологических исследований,направленных на изучение циркуляции карбапенемрезистентных штаммов P.aeruginosa, в качестве эпидемиологических маркеров следует использоватьвставочныеэлементы,отвечающиезаформированиеOprD-зависимойустойчивости к карбапенемам и выявляемые с помощью молекулярногенетических методов.141ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ1.Перспективным направлением дальнейших исследований по темедиссертационнойработыявляетсяразработкафенотипическихспособовопределения порин- и эффлюкс-зависимых механизмов резистентности P.aeruginosa к карбапенемам.2.Планируется разработка способов оценки участия порин- и эффлюкс-зависимыхмеханизмоввформированиикарбапенемрезистентностиуклинических изолятов P.
aeruginosa при помощи матрично-активированнойлазерной десорбционно-ионизационной времяпролетной масс-спектрометрии.3.Планируется адаптация способа масс-спектрометрической детекциикарбапенемаз у P. aeruginosa, направленная на возможность его использованиядля обнаружения карбапенемаз непосредственно в клиническом материале(кровь, ликвор) от пациента.4.Планируется проведение молекулярно-генетического исследованиягенов opdD и opdP у карбапенемнечувствительных изолятов P. aeruginosa;указанные гены кодируют порины наружной мембраны ОpdD и ОpdP,являющиесяпотенциальнымитранспортерамикарбапенемоввнутрьбактериальной клетки, а следовательно, их инактивация может рассматриватьсяв качестве механизма карбапенемрезистентности.142СПИСОК СОКРАЩЕНИЙДНК- дезоксирибонуклеиновая кислотаКарба-НЧ- карбапенемнечувствительныйКарба-Ч- карбапенемчувствительныйКОР- концентрация отсутствия ростаКП- карбапенемазаЛПС- липополисахаридМАЛДИ-ВП МС- матрично-активированная лазерная десорбционноионизационная времяпролетная масс-спектрометрияМБЛ- металло-бета-лактамазаМГЭ- мобильный генетический элементМПК- минимальная подавляющая концентрацияп.
н.- пара нуклеотидовПЦР- полимеразная цепная реакцияЦФ- цефалоспориназаЭДТА- этилендиаминтетрауксусная кислотаDHB- 2,5-Dihydroxybenzoic acid, 2,5-ДигидроксибензойнаякислотаEPI- efflux pump inhibitorEUCAST- European Committee on Antimicrobial SusceptibilityTesting,Европейскийкомитетпоопределениючувствительности к антимикробным препаратамIS- insertion sequence, вставочная последовательность143СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1. Акатов, А.К.
Внутрибольничная инфекция, вызываемая синегнойной палочкой/ А.К. Акатов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. –1966. – № 5. – С. 38–41.2. Баранов, А.А. Новая эпоха в медицинской микробиологии / А.А. Баранов, А.Н.Маянский, И.В. Чеботарь, Н.А. Маянский // Вестник Российской академиинаук. – 2015. – Т.
85, № 11. – С. 1011–1018.3. Герасимов, А.Н. Медицинская статистика / А.Н. Герасимов. – М.:Медицинское информационное агентство, 2007. – 310 с.4. ГОСТ Р ИСО 20776-1-2010. Часть 1. Референтный метод лабораторногоисследования активности антимикробных агентов против быстрорастущихаэробных бактерий, вызывающих инфекционные болезни.
– Введ. 2012-03-01.– М. : Госстандарт России : Изд-во стандартов, 2012. – 6 с.5. Клинические рекомендации. Определение чувствительности микроорганизмовк антимикробным препаратам. – Введ. 2015-22-05. – Межрегиональнаяассоциация по клинической микробиологии и антимикробной химиотерапии,2016. – 47 с.6. Калошин, А.А. Получение слитных рекомбинантных белков OPRF-ΔOPRI.ΔOPRF-ΔOPRI и OPRF-ATOX-ΔOPRI Pseudomonas aeruginosa / А.А.Калошин, А.В. Солдатенкова, Е.М. Зимина, Н.А. Михайлова // Журналмикробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2017. – №5.
– С. 32–38.7. Козлов, Р.С. Антибиотикорезистентность грамотрицательных возбудителейосложнённых интраабдоминальных инфекций в России / Р.С. Козлов, А.В.Голуб, А.В. Дехнич, М.В. Сухорукова, исследовательская группа SMART //Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. – 2015. – Т. 17,№ 3. – С.
227–234.8. Лазарева, А.В. Pseudomonas aeruginosa: патогенность, патогенез и патология //А.В. Лазарева, И.В. Чеботарь, О.А. Крыжановская, В.И. Чеботарь, Н.А.144Маянский // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2015.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
