Диссертация (1140276), страница 17
Текст из файла (страница 17)
При экспериментальной ИКГМ в условиях применения ЛИ в очагеповреждения во все сроки наблюдения увеличивается количество интактныхнейронов, снижается – нейронов с хроматолизом и клеток-теней; на 7, 14 и 30сутки увеличивается количество мелких кровеносных сосудов и сокращаетсяплощадь инфаркта. Максимальная выраженность эффектов ЛИ наблюдается на 30сутки.
Количество мелких кровеносных сосудов в очаге повреждения нарастаетпо мере увеличения экспрессии VEGF.3. В условиях применения ЛИ при ИКГМ на 7 и 14 сутки снижается в кровиобщее количество лейкоцитов за счет лимфоцитов, частично восстанавливаетсяобщее представительства лейкоцитов и лимфоцитов.3.4 Нейропротекторные аспекты комбинированного примененияэритропоэтина и лазерного излучения при экспериментальной ишемиикоры головного мозга3.4.1 Влияние комбинированного применения эритропоэтина и лазерногоизлучения на неврологический и этологический статус крыс приэкспериментальной ишемии коры головного мозгаРезультаты оценки влияния комбинированного применения ЭПО и ЛИ наинтегральный показатель неврологического статуса при экспериментальнойИКГМ представлены в таблице 24.
На 3 сутки эксперимента показательвозрастаетИКГМбезна116%помедианетерапевтическогоотносительновоздействия,нагруппы7суткиживотных–нас67%,на 14 сутки – на 37,5%, на 30 сутки – на 17%. Максимальный эффекткомбинированного применения ЭПО и ЛИ зафиксирован на 3 и 7 суткинаблюдения.102Таблица 24Влияние комбинированного применения эритропоэтина и лазерногоизлучения на неврологический статус при экспериментальной ИКГМ(Me [Q1-Q3], баллы)3 суткиГруппы животных1. Ложнооперированные14 сутки181818[17,00-18,00] [18,00-18,00] [18,00-18,00]2. ИКГМ5.
ИКГМ+ ЭПО + ЛИРазличия(критерийМанна–Уитни)В7 суткиусловиях30 сутки18[18,00-18,00]6[5,00-7,25]9[8,00-10,5]12[11,0-13,0]15[14,0-16,25]13[11,50-14,00]15[13,75-16]16,5[15,0-17,0]17,5[16,75-18,0]P1-2<0,001P1-5<0,001P2-5<0,001P1-2<0,001P1-5<0,01P2-5<0,001P1-2<0,001P2-5<0,001P1-2<0,001P2-5<0,001примененияЭПОиЛИинтегральныйпоказательневрологического статуса на 3 и 7 сутки значимо отличается, а на 14 и 30 сутки неимеет статистически значимых различий с группой ложнооперированныхживотных, что позволяет говорить на 3 и 7 сутки эксперимента о частичном, а на14 и 30 сутки – о полном восстановлении интегрального показателяневрологического статуса при ИКГМ.Далее оценивали этологический статус крыс в тесте «открытое поле» приИКГМ в условиях комбинированного применения ЭПО и ЛИ (таблица 25).На3суткиживотныхсИКГМнаэкспериментаувеличивается100%(помедианебезтерапевтическогогоризонтальнаяотносительноактивностьгруппывоздействия),животныхвертикальнаяактивность – на 50%, исследовательская активность – на 175%.
7 суткинаблюдения отличались приростом горизонтальной активности крыс на 29%,вертикальной активности – на 150%, исследовательской активности – на 75%.Таблица 25Влияние комбинированного применения эритропоэтина и лазерного излучения на показателитеста «открытое поле» при экспериментальной ИКГМ (Me [Q1-Q3])Показатели3 сутки7 сутки14 сутки30 суткиГруппа 2.ИКГМ(n=10)Группа 5.ИКГМ+ЭПО+ЛИ (n=10)Группа 2.ИКГМ(n=10)Группа 5.ИКГМ+ЭПО+ЛИ (n=10)Группа 2.ИКГМ(n=10)Группа 5.ИКГМ+ЭПО+ЛИ (n=10)Группа 2.ИКГМ(n=10)Группа 5.ИКГМ+ЭПО+ЛИ (n=10)ГА,актов7,0[6,0; 8,0]14,0[12,5; 15,0] *4,0[3,0; 5,0]6,0[5,75; 7,0] *15,5[13,75;16,25]*7,5[7,0; 8,25] *8,0[7,75; 8,75]ВА,актов12,0[11,5;12,75]3,0[1,75; 4,0]3,0[2,75; 4,25]16,0[14,75;17,0] *7,0[5,75; 8,0] *10,5[8,75;11,25]5,0[4,75; 6,0]18,5[17,75;20,0] *8,0[7,75;9,25] *ИА,актов2,0[2,0; 3,0]5,5[4,0; 6,0] *4,0[3,75; 5,0]7,0[6,75; 8,0]*3,0[3,0; 4,0]7,0[6,75;8,0] *4,0[3,0; 5,0]8,0[7,75;9,0] *Гр,актов1,0[1,0; 2,0]2,0[1,0; 3,0]2,0[1,0; 2,0]2,0[1,0; 2,0]1,5[1,0; 2,0]2,0[1,0; 2,25]2,0[1,0; 2,25]2,0[1,75; 3,0]ФБ,кол-во1,0[1,0; 2,0]1,5[1,0; 2,0]1,0[1,0; 2,0]1,0[1,0; 2,0]2,0[1,0; 3,0]1,0[1,0; 1,25]1,0[1,0; 2,0]1,0[0,0; 1,0]Примечание: * – значимые (р<0,01) различия с группой 2; ГА – горизонтальная активность, ВА – вертикальная активность,ИА – исследовательская активность, Гр – груминг, ФБ – фекальные болюсы.104На 14 сутки эксперимента горизонтальная активность возросла на 100%,вертикальная активность – на 133%, исследовательская активность – на 133%.Аналогичные по направленности изменения этологического статуса животныхзафиксированы на 30 сутки эксперимента: увеличение горизонтальной активностикрыс на 81%, вертикальной активности – на 60%, исследовательской активности –на 100%.
Количество актов груминга и фекальных болюсов значимо неотличалось от группы животных с ИКГМ во все сроки наблюдения. Как видно,максимальный эффект комбинированного применения ЭПО и ЛИ при ИКГМ наориентировочно-исследовательское поведение крыс в тесте «открытое поле»зафиксирован на 14 сутки эксперимента.Отметим, что по сравнению с группой ложнооперированных животныхстатистическизначимые(р<0,01)отличиязафиксированына3суткиэксперимента по горизонтальной и исследовательской активности, на 7 и 14 сутки– по горизонтальной активности.
Таким образом, вертикальная активностьживотных полностью восстанавливается с 3 суток наблюдения, исследовательскаяактивность полностью восстанавливается с 7 суток (частично – с 3 суток),горизонтальная активность полностью восстанавливается на 30 сутки (частично –с 3 суток).Итак, при экспериментальной ИКГМ в условиях применения ЭПО и ЛИ вовсе сроки наблюдения увеличивается, а с 14 суток наблюдения полностьювосстанавливается интегральный показатель неврологического статуса; на 3, 7, 14сутки частично, а на 30 сутки полностью восстанавливается ориентировочноисследовательское поведение животных.Полагаем, что механизм нейропротекторного действия комбинированногоприменения ЭПО и ЛИ при ИКГМ связан с изменением микроциркуляции,структурных изменений в очаге ишемического повреждения и системнымигематологическими реакциями, что было отмечено выше в отношениимонотерапии ЭПО и ЛИ.1053.4.2 Влияние комбинированного применения эритропоэтина и лазерногоизлучения на микроциркуляцию в очаге повреждения приэкспериментальной ишемии коры головного мозгаРезультаты исследования микроциркуляции в динамике экспериментальнойИКГМ в условиях комбинированного применения ЭПО и ЛИ представлены втаблице 26.
На 3, 7, 14, 30 сутки эксперимента показатель микроциркуляцииувеличивается. В относительных величинах по отношению к группе животных сИКГМ без лечения – соответственно на 265, 185, 156, 89%. Максимальныйприрост наблюдается на 3 сутки наблюдения, а затем прогрессивно падает. Посравнению с группой ложнооперированных животных статистически значимыеразличия зафиксированы только на 3 и 7 сутки эксперимента.Таблица 26Влияние комбинированного применения эритропоэтина и лазерногоизлучения на показатель микроциркуляции при экспериментальной ИКГМ(Me [Q1-Q3], пф.
ед.)Группы животных1. Ложнооперированные3 сутки5,19[4,54-6,95]7 сутки5,29[4,87-6,95]14 сутки5,19[4,57-6,95]30 сутки5,21[4,53-6,95]2. ИКГМ2,34[1,61-3,86]2,75[0,89-3,87]2,57[1,36-5,48]3,77[2,93-4,38]5. ИКГМ + ЭПО +ЛИ8,41[7,84;8,68]7,86[6,65-8,78]6,62[5,71-7,67]6,38[5,77-6,81]Различия(критерий Манна–Уитни)P1-2<0,001P1-5<0,01P2-5<0,001P1-2<0,001P1-5<0,01P2-5<0,001P1-2=0,016P2-5<0,01P1-2<0,001P2-5<0,01Такимобразом,приэкспериментальнойИКГМвусловияхкомбинированного применения ЭПО и ЛИ показатель микроциркуляцииувеличивается во все сроки наблюдения и полностью восстанавливается на 14 и30 сутки эксперимента.1063.4.3 Влияние комбинированного применения эритропоэтина и лазерногоизлучения на морфологию и экспрессию VEGF в очаге повреждения приэкспериментальной ишемии коры головного мозгаНачиная с 7 суток эксперимента в гистологических препаратах головногомозгаопределялисьмелкоочаговыекровоизлияния,сформированныеглиосоединительнотканные рубцы в зоне коагуляции пиальных сосудов.
Вокружающей ткани головного мозга отмечались хорошо сохранившиеся нейроны,среди которых лишь единичные находились в состоянии набухания исморщивания. Регистрировались сохранившиеся нервные волокна, выраженнаяпролиферация глиоцитов, эндотелиоцитов с формированием капилляров иартериол (рисунок 8). Сходные морфологические изменения сохранялись на 14 и30 сутки опыта, но лишь с той разницей, что на указанных сроках наблюдения взоне мелкоочаговых кровоизлияний определялись кистовидные полости.При морфометрическом исследовании очага ишемического поврежденияпри экспериментальной ИКГМ в условиях комбинированного применения ЭПО иЛИ установлены следующие изменения (таблица 27).
На 3 сутки экспериментаувеличивается количество интактных нейронов в очаге повреждения (на 105% помедиане относительно животных с ИКГМ без терапевтического воздействия),снижается количество нейронов с хроматолизом (на 45%) и количество клетоктеней (на 84%), на этом фоне увеличивается количество мелких кровеносныхсосудов (на 130%) и уменьшается площадь инфаркта (на 29%), на правахтенденции возрастает количество глиоцитов. Итак, уже на 3 сутки послеиндукцииИКГМморфологическиевочагеизменения,повреждениязафиксированысвидетельствующиеобзначительныеограничениизоныповреждения, неоваскуляризации и сохранности нейронов.На 7 сутки наблюдения увеличивается количество интактных нейронов (на156%), снижается количество нейронов с хроматолизом (на 69%) и количествоклеток-теней (на 89%), увеличивается количество мелких кровеносных сосудов(на 117%) и уменьшается площадь инфаркта (на 53%), значимо увеличивается107количество глиоцитов (на 11%).
Как видно, на 7 сутки экспериментавыраженность эффекта комбинированного применения ЭПО и ЛИ при ИКГМвозрастает.Рисунок 8 – Морфологические изменения в очаге ишемическогоповреждения головного мозга в условиях комбинированного примененияэритропоэтина и лазерного излучения на 7 сутки эксперимента;пролиферация эндотелиоцитов с формированием капилляров и артериол(окраска гематоксилином и эозином, ув.
х400)Направление изменений морфометрических показателей на 3 и 7 сутки приэкспериментальной ИКГМ в условиях применения ЭПО и ЛИ сохранилось на 14и 30 сутки. Так, на 14 сутки наблюдений увеличивается количество интактныхнейронов в очаге повреждения (на 217% по медиане относительно животных безтерапевтического воздействия), снижается количество нейронов с хроматолизом(на 82%) и количество клеток-теней (на 96%), увеличивается количество мелкихкровеносных сосудов (на 142%) и уменьшается площадь инфаркта (на 67%),статистическизначимовозрастаетколичествоглиоцитов(на33%).Таблица 27Влияние комбинированного применения эритропоэтина и лазерного излучения на морфометрическиепоказатели в очаге повреждения при экспериментальной ИКГМ (Me [Q1-Q3])Показатели3 суткиГруппа 2.Группа 5.ИКГМИКГМ+ЭПО(n=10)+ЛИ (n=10)7 суткиГруппа 2.Группа 5.ИКГМИКГМ+ЭПО+(n=10)ЛИ (n=10)14 суткиГруппа 2.Группа 5.ИКГМИКГМ+ЭПО(n=10)+ЛИ (n=10)30 суткиГруппа 2.Группа 5.ИКГМИКГМ+ЭПО(n=10)+ЛИ (n=10)92,9530,3895,7125,2140,4782,0336,5099,67[23,08[90,40[15,96-32,29][37,25[79,91[30,87[91,34[95,1242,77]93,85] *36,39]96,67] *46,54]84,79] *103,01] *36,449,9125,948,1334,106,1742,10НХр,3,932[31,96[9,20[25,21[7,57-8,69] *[32,03[6,00-7,12] * [40,45-43,10] [3,64-4,40] *ед./мм26,73]35,09]38,11]10,39] *56,749,2262,257,2370,753,8476,35КТ,2,052[8,45[58,08[6,18-7,66] *[67,04[3,60-4,75] * [70,77-78,01] [1,87-2,39] *[51,69ед./мм60,03]11,40] *66,84]72,68]Гл,123,55141,22119,45132,30133,53177,11120,03195,682[184,03ед./мм[115,54[127,78[130,48[170,74[117,96[115,20[135,45136,89]182,84]*123,62]215,79] *138,16]143,40]*125,13]142,78]*12,187,1315,408,845,27МС,21,2814,2624,882[4,43[11,09[6,41-7,87] [14,85-16,10]* [7,73-10,14]ед./мм[20,36[11,93-16,01][23,105,55]12,74] *23,83]*26,51]*604,06280,64734,66240,91994,65194,55ПИ,557,13396,972мкм[541,38[388,64[593,48[270,34[718,89[230,83[968,38[188,58582,23]407,02]*625,80]288,87]*744,00]255,10]*995,85]219,04] *Примечание: * – значимые (р<0,01) различия с группой 2; ИН – интактные нейроны, НХр – нейроны с хроматолизом,КТ – клетки-тени, Гл – глиоциты, МС – мелкие сосуды, ПИ – площадь инфаркта.ИН,ед./мм210930 сутки эксперимента характеризовались более чем трехкратным возрастаниемколичества интактных нейронов в очаге, а также количества глиоцитов (на 63%),снижением количества нейронов с хроматолизом (на 90%) и количества клетоктеней (на 97%), увеличением количества мелких кровеносных сосудов (на 74%) иуменьшением площади инфаркта (на 80%).По сравнению с группой ложнооперированных животных установленыстатистически значимые (р<0,01) отличия на 3 сутки эксперимента по количествуинтактных нейронов, нейронов с хроматолизом и клеток-теней, количествумелких кровеносных сосудов и площади инфаркта, на 7 сутки – по количествуинтактных нейронов, нейронов с хроматолизом и клеток-теней, площадиинфаркта, на 14 и 30 сутки – по количеству интактных нейронов, нейронов схроматолизом, клеток-теней, глиоцитов, количеству мелких кровеносных сосудови площади инфаркта.Итак, при экспериментальной ИКГМ в условиях комбинированногоприменения ЭПО и ЛИ в очаге ишемического повреждения во все срокинаблюдения увеличивается количество интактных нейронов, глиоцитов, мелкихкровеносных сосудов, снижается количество нейронов с хроматолизом, клетоктеней, площадь инфаркта.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
