Диссертация (1140276), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Отметим, что на 3, 7 и 14 суткиэксперимента наблюдались достоверные отличия показателей горизонтальнойактивности, вертикальной активности и исследовательской активности посравнению с группой ложнооперированных животных, а на 30 сутки значимыхотличий не наблюдалось. Таким образом, в условиях применения ЭПО приэкспериментальной ИКГМ зафиксировано на 3, 7 и 14 сутки частичное, а на 30сутки полное восстановление ориентировочно-исследовательской активностиживотных.Итак, в условиях применения ЭПО при экспериментальной ИКГМ на всехсроках наблюдения (3, 7, 14, 30 сутки) установлен различной степенивыраженности эффект на показатели неврологического статуса и этологическогостатуса.
В условиях применения ЭПО интегральный показатель неврологическогостатуса, оцениваемый по шкале Garcia J. H., восстанавливается к 14 суткамнаблюдения,апоказателиэтологическогостатуса(ориентировочно-исследовательское поведение) восстанавливаются к 30 суткам наблюдения.ЭПО в настоящее время в РФ не входит в перечень терапевтическихмероприятий для лечения больных с инсультами. Однако в литературе запоследние 10 лет накоплено значительное количество сведений о положительномэффекте применения ЭПО при экспериментальных поражениях ЦНС сосудистого,инфекционного, травматического, аутоиммунного генеза, а также роли ЭПО ввосстановлении когнитивных функций у больных с хронической почечнойнедостаточностью, находящихся на заместительной терапии [53, 55, 117, 120, 186,187, 219, 224, 303].Механизм обнаруженного нейропротекторного действия ЭПО может бытьмногофакторным.
Прежде всего, учитывая, что ведущим механизмом нарушенияневрологического статуса при ИКГМ (двигательных, чувствительных и статокоординаторных расстройств) является ограничение кровотока в коре головногомозгавобластикровоснабжениясреднеймозговойартерии(пре-и74постцентральнаяизвилины),необходимоотметитьвозможностьЭПОстимулировать неоангиогенез и тем самым улучшать кислородообеспечениенейронов.
В связи с чем на следующем этапе работы исследовали влияние ЭПОна показатель микроциркуляции в очаге ишемического повреждения в динамикеэкспериментальной ИКГМ.3.2.2 Влияние эритропоэтина на микроциркуляцию в очаге поврежденияпри экспериментальной ишемии коры головного мозгаУстановлено,чтовусловияхпримененияЭПОпоказательмикроциркуляции статистически значимо не изменяется на 3 и 7 суткиэкспериментальной ИКГМ, несмотря на определенную тенденцию к увеличению(таблица 12). На 14 сутки показатель микроциркуляции значимо возрастает (на107% по медиане относительно группы животных с ИКГМ). На 30 суткиэксперимента показатель микроциркуляции статистически значимо возрастает на53%. Отметим, что в динамике экспериментальной ИКГМ в условиях примененияЭПО показатель микроциркуляции статистически значимо (р<0,05) возрастал на14 и 30 сутки относительно 3 и 7 суток эксперимента.
Более того, показательмикроциркуляции при ИКГМ на 14 и 30 сутки не отличался от соответствующихзначений в группе ложнооперированных животных.Таблица 12Влияние эритропоэтина на показатель микроциркуляции приэкспериментальной ИКГМ (Me [Q1-Q3], пф. ед.)Группы животных1. Ложнооперированные2.
ИКГМ3. ИКГМ + ЭПОРазличия (критерийМанна–Уитни)3 сутки5,19[4,54-6,95]2,34[1,61-3,86]2,99[2,67-3,79]P1-2<0,001P1-3<0,017 сутки5,29[4,87-6,95]2,75[0,89-3,87]3,34[1,93-4,60]P1-2<0,001P1-3<0,0114 сутки5,19[4,57-6,95]2,57[1,36-5,48]5,33[4,02-7,05]P1-2=0,016P2-3<0,0130 сутки5,21[4,53-6,95]3,77[2,93-4,38]5,78[3,38-6,78]P1-2<0,001P2-3<0,0175Таким образом, показатель микроциркуляции при экспериментальнойИКГМ в условиях применения ЭПО полностью восстанавливается на 14 и 30сутки наблюдения.3.2.3 Влияние эритропоэтина на морфологию и экспрессию VEGFв очаге повреждения при экспериментальнойишемии коры головного мозгаДля дальнейшего уточнения механизма нейропротекторного действия ЭПОпроведены морфологические исследования в очаге ишемического поврежденияпри экспериментальной ИКГМ в условиях применения ЭПО.
При исследованиигистологических препаратов головного мозга на 7 сутки в зоне коагуляциипиальных сосудов сформировались глиосоединительнотканные рубцы (рисунок5А). В этой же зоне сохранялись единичные мелкоочаговые кровоизлияния. Здесьна 14 сутки эксперимента в области кровоизлияний сформировались кистовидныеполости (рисунок 5Б).
На 7, 14, 30 сутки наблюдения в окружающей тканиголовного мозга отмечалась хорошая сохранность нейронов, среди которыхвстречались отдельные гиперхромные клетки, а единичные – были с признакамиострого набухания и сморщивания (рисунок 6А). Определялись полнокровныесосуды, активная пролиферация глиоцитов, а также эндотелиоцитов, капиллярови артериол (рисунок 6Б), неповрежденные нервные волокна (рисунок 6В).Результатыморфометрическогоанализагистологическихпрепаратовпредставлены в таблице 13.
Как видно, уже на 3 сутки эксперимента (суммарнаядоза введенного ЭПО 15 000 МЕ/кг) зафиксированы статистически значимыеизменения по сравнению с группой животных с ИКГМ: увеличивается количествоинтактных нейронов (на 88% по медиане), т. е. меньше нейронов былонеобратимо повреждено при ишемии головного мозга; снижается количествонейронов с хроматолизом (на 61% по медиане), количество клеток-теней (в 4,6раза по медиане). В среднем на 70% возрастает количество мелких кровеносныхсосудов.76АБРисунок 5 – Морфологические изменения в очаге ишемическогоповреждения головного мозга в условиях применения эритропоэтина:А – формирование глиосоединительнотканных рубцов в зоне коагуляциипиальных сосудов на 7 сутки эксперимента (окраска гематоксилином иэозином, ув. х400); Б - формирование кистовидной полости в зонекровоизлияния на 14 сутки эксперимента (окраска гематоксилиноми эозином, ув.
х200)Площадь инфаркта на 3 сутки эксперимента на фоне применения ЭПОуменьшилась по медиане на 25%. Количество глиоцитов в очаге ишемическогоповреждения в условиях применения ЭПО значимо не изменялось на всех срокахнаблюдения.Аналогичные по направленности изменения морфометрических показателейзафиксированы на 7 и 14 сутки экспериментальной ИКГМ в условиях примененияЭПО. Так, количество интактных нейронов возрастает на 7 сутки на 131%, на 14сутки – на 196%.
Количество нейронов с хроматолизом на 7 сутки снижается в 2,9раза, на 14 сутки – в 4,9 раза. Количество клеток-теней на 7 сутки снижается в 6раз, на 14 сутки – в 10,4 раза. Представительство мелких кровеносных сосудовувеличивается на 7 сутки на 72%, на 14 сутки – на 74%.
Наконец, площадь77инфаркта в условиях применения ЭПО снижается на 7 сутки на 27,2%, на 14сутки – на 41,3%.АБВРисунок 6 – Морфологические изменения в очаге ишемическогоповреждения головного мозга в условиях применения эритропоэтинана 30 сутки эксперимента: А – сохранившиеся нейроны, отдельные изних гиперхромные, с признаками набухания и сморщивания (окраскагематоксилином и эозином, ув. х200); Б – пролиферация с формированиемкапилляров и артериол (окраска гематоксилином и эозином, ув. х200);В – неповрежденные нервные волокна (окраска гематоксилиноми эозином, ув.
х400)Показательно, что максимальной выраженности эффект ЭПО достиг на 30сутки эксперимента, когда в группе животных с ИКГМ после активациинеоангиогенеза и реперфузии формировались признаки синдрома церебральнойишемии–реперфузии в связи с поступлением фагоцитов и активации процессовсвободнорадикального окисления, повреждением нейронов и расширением очагаповреждения за счет области полутени (на 33% по сравнению с 14 суткамиэксперимента). В условиях применения ЭПО на 30 сутки количество интактныхнейронов возросло по медиане на 264% по сравнению с группой животных сИКГМ без терапевтического воздействия; количество нейронов с хроматолизомбыло меньше в 7 раз, а количество клеток-теней – в 23,1 раза.
При этомколичествомелкихкровеносныхсосудовбыловышена44,1%.Таблица 13Влияние эритропоэтина на морфометрические показатели в очаге повреждения приэкспериментальной ИКГМ (Me [Q1-Q3])Показатели3 суткиГруппа 2.Группа 3.ИКГМИКГМ +(n=10)ЭПО (n=10)7 суткиГруппа 2.Группа 3.ИКГМИКГМ +(n=10)ЭПО (n=10)14 суткиГруппа 2.Группа 3.ИКГМИКГМ +(n=10)ЭПО (n=10)30 суткиГруппа 2.Группа 3.ИКГМИКГМ +(n=10)ЭПО (n=10)83,430,3889,9425,2191,26[79,30[23,08-36,39][87,64[15,96-32,29][84,7187,86] *91,65] *98,25]*9,2434,10НХр,7,0842,106,102[8,96[32,03-35,09]ед./мм[6,78[40,45-43,10][5,9910,65] *7,73] *6,18] *10,2870,75КТ,6,7676,353,302[67,04-72,68][9,29ед./мм[6,15[70,77-78,01][2,7111,65] *7,64] *3,95] *Гл,129,28133,53138,54120,03129,222ед./мм[125,13[130,48[130,65[117,96[118,23136,89]142,36]123,62]135,83]132,54]12,278,8415,4114,26МС,20,632[11,93-16,01][11,62[7,73-10,14][14,52ед./мм[18,7614,04] *16,42] *22,60]*557,13423,23604,06440,17734,66431,50994,65346,28ПИ,2[327,98[541,38[410,90[593,48[426,27[718,89[423,40[968,38мкм450,69]*744,00]441,81]*995,85]358,30]*437,93]*625,80]582,23]Примечание: * – значимые (р<0,01) различия с группой 2; ИН – интактные нейроны, НХр – нейроны с хроматолизом, КТ –клетки-тени, Гл – глиоциты, МС – мелкие сосуды, ПИ – площадь инфаркта.ИН,ед./мм240,47[37,2546,54]36,44[31,9638,11]*56,74[51,6960,03]123,55[115,20138,16]5,27[4,43-5,55]74,98[71,0078,43] *14,65[11,9517,23] *12,43[10,8913,45] *132,75[129,11139,33]8,92[7,15-9,86] *36,50[30,8742,77]25,94[25,2126,73]62,25[58,0866,84]119,45[115,54125,13]7,13[6,41-7,87]79Наконец, интегральный показатель интенсивности деструктивных процессов вочаге повреждения – площадь инфаркта – снижался по медиане на 65,2% посравнению с группой животных с ИКГМ.Результаты исследования экспрессии VEGF в очаге повреждения приэкспериментальной ИКГМ в условиях применения ЭПО представлены в таблице14.
Как видно, ЭПО не изменяет экспрессию VEGF в очаге ишемическогоповреждения на 3, 7, 14, 30 сутки наблюдения.Таблица 14Влияние эритропоэтина на экспрессию VEGF в очаге повреждения приэкспериментальной ИКГМ (Me [Q1-Q3], количество клеток / у.е. площади)Группыживотных1. Ложнооперированные2. ИКГМ3. ИКГМ + ЭПОРазличия(критерий Манна–Уитни)3 сутки7 сутки14 сутки8,509,50[7,00; 9,00] [8,00; 10,00]13,5019,50[12,75; 15,0] [18,0; 20,25]30 сутки10,00[8,75; 11,25]30,00[28,75;31,00]14,0020,0030,00[12,75;15,0] [17,75;21,25] [28,75;31,5]10,00[10,00; 12,00]39,50[38,00; 41,25]P1-2<0,001P1-3<0,001P1-2<0,001P1-3<0,001P1-2<0,001P1-3<0,01P1-2<0,001P1-3<0,00140,50[39,0;42,25]Таким образом, при экспериментальной ИКГМ в условиях применения ЭПОустановлено, что в очаге ишемического повреждения на 3, 7, 14, 30 суткинаблюдения увеличивается представительство интактных нейронов и мелкихкровеносных сосудов, снижается количество нейронов с хроматолизом и клетоктеней, снижается площадь инфаркта, не изменяется экспрессия VEGF.По всей видимости, активация неоангиогенеза и установленное ранееувеличение количества мелких кровеносных сосудов при морфометрическомисследовании очага ишемии обусловлено прямыми рост-стимулирующимиэффектами ЭПО.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
