Автореферат (1140275), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Исследование морфологии очага ишемии проводили через3, 7, 14, 30 суток после моделирования ишемии.Оценка неврологического статуса по шкале Garcia J. H. Данный тест позволяетоценивать параметры, характеризующие поведенческую активность животных, двигательную,чувствительную, стато-координаторную функцию: спонтанная активность, симметричность вдвижении всех конечностей, симметричность в движениях передних конечностей придвижении вперед, способность забираться по стенке клетки, оценка проприоцептивнойчувствительности, ответ на прикосновение к вибриссам. Для интегральной оценкиподсчитывали сумму баллов оцениваемых параметров: минимальное количество баллов (3балла) – выраженный неврологический дефицит, максимальное (18 баллов) – отсутствиеневрологического дефицита.Этологические методы исследования.
Животным всех групп проведено исследованиеэтологического статуса с использованием актографа «открытое поле». Регистрировалигоризонтальную активность, вертикальную активность, исследовательскую активность, числоактов груминга, количество фекальных болюсов.Оценка микроциркуляции в очаге ИКГМ методом допплеровской флоуметрии.Проводили с использованием прибора ЛАКК-01 (Россия) на основе инфракрасного лазера спомощью трехканального светового зонда, смонтированного из кварцевых моноволоконныхсветоводов.
Время записи флоуграммы 5 мин. С помощью комплекта программ ООО «Лазма»(Россия) определяли показатель микроциркуляции в перфузионных единицах (пф. ед.).Гематологические методы исследования. На автоматическом гематологическоманализаторе для ветеринарии ВС-2800 Vet (Mindray, Китай), откалиброванном для крови крыс,определяли количество лейкоцитов, лимфоцитов, нейтрофилов, моноцитов, эритроцитов,концентрацию гемоглобина, гематокрит, средний объем эритроцита, среднее содержаниегемоглобина в эритроците, среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците, количествотромбоцитов.Методы иммуноферментного анализа использовали для определения концентрацииэритропоэтина в сыворотке крови с помощью автоматического иммуноферментногоанализатора Personal LAB (Италия) с применением специфической тест-системы для крысфирмы Cloud-Clone Corp (США).Морфологические и иммуногистохимические методы.
После выведения животных изэксперимента ГМ извлекали и фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина.11Серийные срезы ГМ окрашивали гематоксилином и эозином, по методу Бильшовского, пометоду Шпильмейера для выявления миелиновых волокон, по методу Ниссля для определениятигроидного вещества Ниссля, глиальных клеток. Подсчитывали на микроскопе Leiсa DMRXA(Германия) на 1 мм2 среза количество нейронов (интактных, с хроматолизом, клеток-теней),глиоцитов и мелких кровеносных сосудов, а также площадь ишемического очага (в мкм2) приувеличении х400 и х200 соответственно. Морфометрические исследования проводили спомощью компьютерной программы анализа изображений Image Scope M (Россия). Оценкуэкспрессиифактораростаэндотелиясосудов(VEGF)втканиГМпроводилииммуногистохимическим методом с использованием набора первичных специфических длякрыс антител к VEGF (клон SP 28, тип Rabbit, SpringBio).Статистические методы исследования. Результаты обрабатывали с использованиемпрограмм IBM SPSS Statistics 19.
Показатели представлены в виде медианы (Ме) и квартилей[Q1-Q3]. Значимость различий между группами оценивали при помощи критериев Крускалла–Уолиса, Манна–Уитни. Анализ динамики изученных показателей в процессе леченияосуществляли с помощью критерия Фридмана и парного критерия Вилкоксона. Для выявлениясвязи между изучаемыми параметрами использовали коэффициент корреляции Спирмена (R).Отличия считали статистически значимыми при р≤0,05.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕМорфофункциональные изменения при экспериментальнойишемии коры головного мозгаВ динамике экспериментальной ИКГМ (3, 7, 14, 30 сутки наблюдения) в очагеповреждения наблюдаются морфологические признаки глубокой церебральной ишемии –дистрофия и некроз нейронов и нейроглии, образование клеток-теней и амебовидныхастроцитов,фрагментацияглиосоединительнотканногоирубца.распадмиелиновыхМорфометрическийволокон,анализобластиформированиеишемическогоповреждения ГМ позволил установить, что от 3 к 30 суткам эксперимента наблюдаетсяснижение количества интактных нейронов, увеличение количества мелких сосудов, количестванейронов с хроматолизом, клеток-теней, площади инфаркта.
При иммуногистохимическомисследовании очага ишемического повреждения выявлено повышение экспрессии VEGF во всесроки наблюдения. Корреляционный анализ установил, что в динамике экспериментальнойИКГМ количество мелких сосудов в очаге ишемического повреждения нарастает по мереповышения экспрессии VEGF. Полученные данные согласуются с результатами другихисследователей по изучению морфологии очага церебральной ишемии в экспериментальныхусловиях на животных и в клинических условиях у людей.
Клиническим эквивалентом12обнаруженных морфологических изменений в ГМ при экспериментальной ИКГМ на всехсроках наблюдения является обнаружение у крыс очагового неврологического дефицита в видедвигательных,чувствительныхистато-координаторныхрасстройств,угнетенияориентировочно-исследовательской активности животных.С использованием метода лазерной допплеровской флоуметрии установлено снижениемикроциркуляции в очаге ИКГМ, показатель частично восстанавливается к 30 суткамэксперимента.
Таким образом, облитерация пиальных сосудов и снижение кровотока в коре ГМпозволили моделировать морфологические и клинические признаки фокальной ишемии.НаличиевЦНСочагаишемическогоповрежденияприводитксистемнымгематологическим эффектам. Так, по показателям лейкона при экспериментальной ИКГМ укрыс на 3, 7, 14 сутки наблюдается лейкоцитоз за счет увеличения в крови количестванейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов. Полагаем, что полученные изменения обусловленысинтезом медиаторов воспаления в очаге повреждения, которые стимулируют миелоидный илимфоидный ростки костного мозга и вносят вклад в эскалацию деструктивных процессов засчет нейтрофильной инфильтрации, расширения зоны пенумбры и обеспечивают репаративныепроцессы с участием лимфоцитов и моноцитов. По всей видимости, цитокинемияпровоспалительных факторов (ИЛ-1β, ФНО-альфа и др.) ограничивает синтез ЭПО в почках,что приводит к снижению концентрации ЭПО в крови.
Последний факт был зафиксирован на 3сутки экспериментальной ИКГМ.Одним из последствий гипоэритропоэтинемии при ИКГМ, а также, по даннымлитературы, за счет нарушения метаболизма железа, активации гемолиза и др. факторовразвиваются признаки анемии. Так, на 3 и 7 сутки экспериментальной ИКГМ в крови снижаетсяколичество эритроцитов, гемоглобина, гематокрита, на 7 сутки снижается среднее содержаниегемоглобина в эритроците и средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах.В определенной мере вклад указанных системных гематологических изменений впатогенез проявлений при инсульте подтверждается данными корреляционного анализа.
Намиустановлена ассоциация между показателем неврологического статуса по шкале Garcia J. H. иколичеством эритроцитов, лейкоцитов, нейтрофилов, концентрацией гемоглобина в крови.Нейропротекторные аспекты применения эритропоэтина приэкспериментальной ишемии коры головного мозгаСистемноеприменениеЭПОвсуммарнойдозе15000МЕ/кгмассыприэкспериментальной ИКГМ приводит к изменению клинической картины – чувствительности,двигательнойактивности,стато-координаторнойспособностииориентировочно-исследовательского поведения. Интегральный показатель неврологического статуса,13оцениваемый по шкале Garcia J.
H., восстанавливается частично на 3 и 7 сутки, полностью – к14 суткам наблюдения. В тесте «открытое поле» ориентировочно-исследовательское поведениекрыс восстанавливается частично на 3, 7 и 14 сутки, полностью – к 30 суткам эксперимента.Нейропротекторные эффекты ЭПО реализуются в том числе и через улучшениемикроциркуляции очага ишемического повреждения. В условиях применения ЭПО показательмикроциркуляции в очаге ишемии полностью восстанавливается на 14 и 30 сутки наблюдения.Клинико-инструментальные изменения нашли отражение в морфологической картине очагаишемии при экспериментальной ИКГМ в условиях применения ЭПО. Установлено, что в очагеишемического повреждения на 3, 7, 14, 30 сутки наблюдения увеличивается представительствоинтактных нейронов и мелких кровеносных сосудов, снижается количество нейронов схроматолизом и количество клеток-теней, снижается площадь инфаркта.
Однако экспрессияVEGF в очаге ишемии не изменяется, что позволяет предположить активацию неоангиогенезаза счет других механизмов, прежде всего, собственного пролиферативного эффекта ЭПО вотношении ангиобластов.Уменьшение площади очага повреждения, количества поврежденных и погибшихнейронов, увеличение кровоснабжения приводят к меньшей выраженности системныхгематологических проявлений при экспериментальной ИКГМ в условиях применения ЭПО –количества лейкоцитов, количества эритроцитов и концентрации гемоглобина в крови.Выявлено увеличение количества эритроцитов, гемоглобина, гематокрита на 7, 14, 30 суткиэксперимента, снижение среднего эритроцитарного объема на 7 и 14 сутки, снижение среднегосодержания гемоглобина в одном эритроците на 14 сутки эксперимента. Максимальнаявыраженность эритропоэтического эффекта ЭПО наблюдается на 7 сутки эксперимента.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
