Диссертация (1140232), страница 17
Текст из файла (страница 17)
Образцы аппаратуры ихпредназначение и клиническое применение представлены ранее.На этом этапе исследования были решены следующие задачи:1) Выбор фотосенсибилизатора с наибольшим квантовым выходомлюминесценции при его резонансном облучении (подбор зондирующеголазерного излучения)2) Подбор оптимальных параметров дозы облучения при диагностике илечениигиперпластическихпроцессовэндометрия(подбортакихпараметров излучения и регистрации сигнала, которые не искажают сигналза время записи и не повреждают здоровые клетки).1193) Обоснование и отработка клинического алгоритма активации препарата(описание явления активации и поступлении препарата в репродуктивныеорганымалоготаза) лазерным излучениемиэкспериментальноеподтверждение его фото-ингибирующего действия на пролиферативнуюактивность биологических объектов - на тест объектах микрофлоры илабораторных мышах (карцинома Эрлиха).4) На основании исследований по пункту 1-3 объективно обоснован выбороптимальных параметров лазерного облучения для диагностики и леченияхронического эндометрита (этап включает подбор и таких параметровизлучения и регистрации сигнала, которые не искажают сигнал за времязаписи и не повреждают здоровые клетки).В результате проведенного экспериментального исследования можнополагать, что при использовании хлорофилл содержащего препарата вусловиях вне организменной активации лазерным излучением приводит к егонакоплению в патологических клетках эндометрия и к активации клеточногоапоптоза.
Это определяется тем, что при добавлении кислород-содержащегопрепарата к ХСП и активации его лазерным излучением с длиной волны 0, 63,0. 514, 0. 405 мкм в дозе 0. 2-20 дж/мл, происходит взаимодействиевозбужденного фотосенсибилизатора с молекулой кислорода.
В результатеэтого образуется синглентный кислород, который является цитотоксическимдля живых клеток, будучи сильным окислителем биомолекул. Синглентныйкислород также образуется в фагоцитах при реакциях дыхательного взрыва.Имеются доказательства высокой бактерицидной эффективности активныхформ кислорода (синглентный кислород, радикал супероксида, перекисьводорода, гидроксильный радикал) в отношении большинства микробов.[11,151,194,196] Можно предположить, что взаимодействие активированногоХСП с микробной клеткой схожа с кислород-зависимой подсистемоймикробоцидной системой фагоцитов, к которой нет привыкания.120Таким образом, способность фотосенсибилизатора накапливаться визмененных тканях, микробных клетках с реализацией эффекта летальнойфото-сенсибилизации бактерий должна проявляться, по-видимому, и прилечении гиперплазии эндометрия и хронического эндометрита, в том числеприприсутствииантибиотико-резистентныхштаммовпатогенныхмикроорганизмов (что объективно показано нами в эксперименте).Другим доказательством воздействия разработанной технологии напролиферирующие клетки - это изучение её эффективности в эксперименте(мыши с карциномой Эрлиха).Как было упомянуто ранее, в исследовании использовали 60лабораторных мышей (из них 15-контрольная группа).
В опытной группе 15мышей принимали не активированный препарат, 15 мышей принималиактивированный препарат с максимальной дозой лазерного облучения вразведении 1:10, в следующей группе 15 мышей принимали аналогичныйактивированный препарат в разведении 1:1000. Дополнительно к группе сприемом препарата в качестве контроля использовали мышей, которые непринимали препарат-7 мышей (пили чистую воду-чистый контроль), которыепринимали раствор перекиси водорода 3%, разбавленный в 10 раз (доноркислорода, используемый для активации хлорофилл содержащего препарата).Прием указанных препаратов осуществляли 2 месяца.
Через 2 месяца всеммышам (кроме группы с чистым контролем ввели внутрибрюшинно взвеськультуры клеток карциномы Эрлиха объемом 0. 1 мл (дополнительнокультуру ввели еще 10 мышам, которые не принимали никаких препаратов ипили чистую воду-второй чистый контроль). В дальнейшем проводилидинамическое ежедневное наблюдение для учета результатов исследования.Было установлено, что мыши в группе с чистым контролем былиактивны и живы в течении всего исследования (1 год).
Мыши со вторымчистым контролем быстро увеличивались в размерах (асцит) и погибали на 4-1216 день. Мыши, принимавшие не активированный хлорофилл содержащийпрепарат или раствор 1:10 Н2О2 3% погибали на 6-12 день. Мышипринимавшие активированный препарат в разведении 1:10 жили 21-24 дня, апри его разведении 1:1000-погибали в пределах 10 дней.
Следует отметить, чтомыши, которые принимали сразу только активированный препарат такжепогибали на 10-12 день. То есть, предварительный относительно длительныйприем не активированного хлорофилл содержащего препарата до назначенияего активированной формы является необходимым этапом разработанноймедицинской технологии, что скорее всего связано с фото-иммунной егоактивностью, описанной в литературе.Таким образом, был доказан антимикробный и анти-опухолевыйэффект хлорофилл содержащего препарата, активированного вне организма.Выявленный эффект существенным образом зависел от концентрациивводимого активированного препарата, длины волны и дозы лазерной энергии,использованной для его активации.
В результате, можно полагать, чтоспособность фотосенсибилизатора накапливаться в измененных тканях,микробных клетках с реализацией эффекта летальной фотосенсибилизациипролиферирующих клеток может быть использована, по-видимому, и прилечении хронического эндометрита и сопутствующего гиперпластическогоизменения тканей эндометрия.Клиническоеприменениеиподтверждениеэффективностиразработанной методики представлено в клиническом разделе научнойработы.В клиническом разделе научной работы показано, что для достиженияцели- повышение эффективности и качества диагностики и лечениягиперпластических процессов эндометрия у женщин с хроническимэндометритом в программах ВРТ на основе использования лазернойконверсионной экспресс-диагностики (флюоресцентная составляющая) иобъемной фото-ингибирующей терапии нами были обследованы 126 женщин,которые были разделены на 2 группы, - основную (80) и группу сравнения (46),122сопоставимых по возрасту с документально подтвержденным отсутствиемгиперплазии эндометрия и хронического эндометрита.Все женщины обратились в клинику в связи с бесплодием с цельюэкстракорпорального оплодотворения (ЭКО).Как уже было отмечено диагностике и лечению гиперпластическихпроцессов эндометрия (ГПЭ), посвящено большое количество научныхисследований.
Современное состояние вопроса заключается в том, чтосредний возраст женщин, потенциально готовых к рождению детейсущественно возрос и превышает 32±1, 2 года (Сухих Г. Т., 2017) Все большеженщин, прибегающих в клиники репродуктивной медицины для реализациисобственной репродуктивной функции старше 35 лет. Большая доля женщин,не сумевших реализоваться с позиции материнства уже после 40 лет. А частотахронических воспалительных заболеваний и гиперпластических процессовэндометрия к этому возрасту превышает 45% (Сидорова И.
С. 2016)В результате исследования установлено, что в основной группе к этомувозрасту 39, 7% женщин ранее никогда не имели беременности, а 53 (60, 2%)ранее имели беременности, но при этом роды были только у 26 (29, 5%). Уостальных 62 (70, 4%) пациенток были самопроизвольные выкидыши инеразвивающиеся беременности (1-3). 76, 1% женщин обратились сединственной жалобой и проблемой – бесплодие.В анамнезе обращает на себя внимание высокая частота необоснованныхвыскабливаний матки или связанных с прерыванием беременности 61 (69, 3%)или с эвакуацией неразвивающегося плодного яйца.Абсолютное подавляющее большинство пациенток жаловались на то,что «их не берут в программу ЭКО, т.
к. «не растет эндометрий». При этомнекоторыеженщиныприультразвуковомисследованиипоказывалилокальное увеличенное М-эхо от 10 до 15 мм одновременно придопплерометрии у 77 пациенток (87, 5%) были выявлены нарушения123гемодинамики различной степени - в аркуатных, радиальных, базальных испиральных артериях выявило отклонения от нормальных значений у 83 (94,3%) обследованных.В обсуждении активного участия микробного фактора в течении хроническогоэндометритаисопутствующихгиперпластическихпроцессовможемконстатировать, что в данном исследовании рост условно патогенной флорыбыл обнаружен только у 20 (22, 7%) женщин. Наибольшее присутствие былоу Staphylococcus spp., E. Coli, Enterococcus и Enterococcus faecalis.
У этих жепациенток были идентифицированы цитологические изменения клеток экто и эндоцервикса, присущие дисплазии I и II степени воспалительного генеза.Несомненно, что гистероскопия является одним из приоритетных и высокоинформативных методов диагностики патологических процессов эндометриякак воспалительного, так и гиперпластического происхождения. В нашемисследованииприминигистероскопическомисследованииочевидныепризнаки гиперплазии – полипы, очаговые фокусы гиперплазии быливыявлены только у 34 (38, 6%) пациенток.
У всех остальных была картинанеравномерно утолщенного эндометрия при средней его гипотрофии,одиночные и мультифокусные очаги гиперваскуляризации и ультра-мелкиесосочковые выросты. У подавляющего большинства женщин – 57 (64, 8%)имели место признаки хронического эндометрита - очаговые и диффузныекрупно- и мелкоочаговые геморрагии а также фиброзные изменения и синехиикак в цервикальном канале, так и в полости матки.В качестве подтверждения (мы считаем, что предварительный диагнозпатологии эндометрия должен быть установлен эндоскопическим методом, аморфологическоеисследованиедолжноподтвердитьэндоскопическийдиагноз) в результате патоморфологического исследования у 45 (50, 1%)женщин имелся морфологически верифицированный диагноз: хроническийэндометрит, у 43 гиперплазия эндометрия и у 17 (25, 0%) - признакигормональной дисфункции и один из вариантов гиперплазии эндометрия.124Иммуногистохимическое исследование было выполнено у 21 пациенткис целью идентификации влияния фото-иммунной терапии на рецептивностьэндометрия при хроническом воспалении и гиперпластических процессах,которые хорошо известны.Так, выполненное исследование показало, что у всех женщин былиявные признаки нарушения рецептивности эндометрия как в I, так и во II фазуменструального цикла, а именно снижение коэффициента Pg/ER до 1, 2-1, 6при норме 2-4, снижение экспрессии LIF на 50-60 %, повышение CD 56 в 1, 5раза, что свидетельствовало об увеличении NK–клеток в строме эндометрия.При этом у 12 (57, 1%) пациенток имело место снижение экспрессии как ERα,так и PR рецепторов, а у 9 (42, 9%) женщин только PR.
Установлено, чтосредний уровень экспрессии ER-α в эпителии желез у женщин с ПГЭ на фонехронического эндометрита составил 6, 0±0, 7 балла Allred Score и был ниже,чем в контрольной группе, средний уровень PR в эпителии желез составил 5,1±0, 9 балла Allred Score (p <0, 05). У женщин со сложной гиперплазиейэндометрия (СГЭ) на фоне хронического эндометрита уровень экспрессииERα в эпителии желез составил 7, 3±0, 8 балла, а уровень PR - 6, 7±1, 8 баллаAllred Score, что также отличалось от показателей группы сравнения. Крометого, отмечено, что у 18 из 21 (85, 71%) женщин имело место неравномерноераспределение ER-α и/ или PR. Определялись зоны с резким обеднениемрецепторного аппарата ER-α как при ПГЭ, так и при СГЭ на фоне ХЭ.Количество пиноподий было 25-30%.Таким образом, стало очевидным, что ведущим в нарушениирецептивности эндометрия у женщин с гиперплазией эндометрия на фонехронического эндометрита было преимущественное снижение коэффициентарецептивности за счет повышения экспрессии рецепторов к ER при сниженииэкспрессии PgR и LIF на 40-50% и превышении клона CD56 –позитивныхлимфоцитов в 1, 5 раза.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
