Автореферат (1140230), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Зуев, 2016]В качестве фотосенсибилизирующего препарата для его активации вэндометрии использовали хлорофиллин - натрия [Э.Н. Бикбов, Jonathan S., 2005]Экспериментально-теоретическое обоснование применения активированногохлорофилл содержащего препарата для клинического применения при лечениигиперпластических процессов эндометрияМетод ФИГТ основан на способности фотосенсибилизатора (типа и\или аналогаРадахлорофилла-РХ) селективно накапливаться в злокачественных, патологическиизмененных или пораженных вирусами (микробами) клетках и изменять их структуруи функцию после воздействия на них источника света или лазерного излученияопределенной длины волны.Рисунок 1. Подобраны оптимальные параметры регистрации сигнала (мощность ивремя экспозиции) для лазера 637 нм, при которых эффект выгорания составляет неболее 6% (применяются для диагностики). Показано, что наиболее эффективнымидлинами волн для возбуждения являются волны – 405 нм и 637 нм (что полностьюсогласуется с рисунком ниже)11Рисунок 2.
Спектры поглощения «Хлорофилл–содержащего препарата».«Хлорофилл–содержащийпрепарат®»(ХСП)обладаетспособностьюпоглощать свет в видимой области, результатом чего является его фото-активация.Последнее приводит к окислительным процессам в биологических тканях, ихповреждению и последующему разрушению (некрозу).Моделирование объемной ФИГТ in vitroПредставленные данные теоретически обосновывают предложенную намиинновационную концепцию ФИГТ. – активация фотосенсибилизатора РХ внеорганизма, что подтверждено в эксперименте (Рисунок 3).Рисунок 3. Активация и ауто-восстановление амплитудно-спектральныххарактеристик препарата.Установлено, что выгорание люминесценции РХ: при поглощении 1 Дж – 5%,при поглощении 3 Дж – 18%, при поглощении 10 Дж – 25%. Установлено, что12увеличение дозы более 30 Дж активность и интенсивность ответной реакции неувеличивает.Изучениеэффектанакопленияактивированногоинеактивированногопрепарата Х в органы и ткани животных (мыши)Рисунок 4.
Накопление активированного и/или не активированного хлорофиллсодержащего препарата в ткани (мыши).В эксперименте на животных (мыши) показана реальная возможностьактивации хлорофилл- содержащего фотосенсибилизатора вне БО и его накопление ворганах и тканях (Рисунок 4). Это позволило впервые обосновать методику объемнойактивированной ФИГТ микрофлоры.Экспериментальноеобоснованиеэффективностиобъемнойактивированной ФИГТ (in vitro)Для проведения эксперимента были взяты два микроорганизма Ps. aeruginosa иS.
aureus. В качестве основы для эксперимента был взят диско-диффузионный метод,основанный на диффузии антибиотиков и\или РХ из носителя в плотнуюпитательную среду и ингибиции роста исследуемой культуры в той зоне, гдеконцентрация используемого препарата обладает бактерицидным действием.Показана эффективность ФГД активированного препарата на микрофлору(большая зона отсутствия роста микрофлоры вокруг диска с активированным13препаратом 25-30 см). Можно предположить, что взаимодействие активированногоХСП с микробной клеткой схожа, по-видимому, с кислород-зависимой подсистемой имикробоцидной системой фагоцитов, к которой не выявлено привыкания.
Вотдельном исследовании было показано, что способность фотосенсибилизаторанакапливаться в измененных тканях, микробных клетках с реализацией эффекталетальной фото-сенсибилизации бактерий может быть использована при леченииантибиотико-резистентных штаммов патогенных микроорганизмов.Апробация методики объемной активированной ФИГТ при леченииопухолей (карцинома Эрлиха у мышей)В исследовании использовали 6о лабораторных мышей (из них 15-контрольнаягруппа). В опытной группе 15 мышей принимали не активированный препарат вразведении 1:10, 15-активированный препарат (активирован максимальной дозойлазерного облучения) в разведении 1:10, в следующей группе 15 мышей принималианалогичный активированный препарат в разведении 1:1000.
Контроль-7 мышей.Прием указанных препаратов осуществляли 2 месяца. Через 2 месяца всем мышам,кроме группы с чистым контролем ввели внутрибрюшинно взвесь культуры клетоккарциномы Эрлиха объемом 0. 1 млМыши с карциномой- контроль быстро увеличивались в размерах (асцит) ипогибали на 4-6 день. Мыши, принимавшие не активированный хлорофиллсодержащий препарат или раствор 1:10 Н2О2 3% погибали на 6-12 день.
Мышипринимавшие активированный препарат в разведении 1:10 жили 21-24 дня, а при егоразведении 1:1000-погибали в пределах 10 дней.Таким образом, доказан антимикробный и противоопухолевый эффектхлорофилл содержащего препарата, активированного вне организма. Представленныеисследования явились обоснованием применения активированного РХ в клинике.Кроме представленного эффекта препарат по данным его производителей обладает ифото-иммуноактивирующим действием, что не противоречило концепции лечениягиперплазии эндометрия.Метод лечения – объемная фото-ингибирующая терапия (ФИГТ)Объемная ФИГТ с использованием препарата, содержащего активную формухлорофилла (хлорин Е6) была проведена 88 пациенткам – 45 женщинам сгиперплазией эндометрия и 43 пациенткам с сочетанными формами заболевания –14гиперплазии эндометрия и хроническим эндометритом.
Препарат, содержащийхлорин Е-6, принимали дробно в режиме дискретного увеличения дозы от 0.1 мл до20 мл. Рассчитанный период приема препарата основывался на результатахэкспериментального факта накопления препарата в тканях и составлял 12-18 дней.После определения уровня накопления препарата проводили внешнюю активациюфотосенсибилизатора с помощью излучения He-Ne лазера в дозе 100 - 160 мДж втечении 3 минут. В случае рецидивирующего гиперпластического процессадополнительно на фоне приема препарата per os проводили внутриматочнуюактивацию фото - сенсибилизатора (фото-иммунную и фото-ингибирующую) в дозе100-160 мДж 3-4 мин, что соответствовало 1,5-2,0 мВт на выходе световода.Оценку результатов лечения осуществляли через 2-3 недели после его окончания.Контрольную оценку морфофункционального состояния эндометрия производиличерез 4-6 недель после лечения с использованием гистероскопии, лазернойспектральной конверсионной диагностики и патогистологического исследования.Статистическая обработкаВсеанамнестические,клинические,лабораторныеданныебылипроанализированы с использованием стандартных прикладных программ длястатистической обработки «Microsoft Exell – 7,0» версия XP, раздел «Анализданных», подразделение «Описательная статистика» и пакета прикладных программ«Statistica for Windows» 6,0.Результаты клинических наблюденийБыли обследованы 108 женщин в возрасте 32-47 лет, которые обратились вклинику с бесплодием с целью реализации репродуктивной функции.Первая группа в зависимости от морфологического диагноза была разделена на 4подгруппы в зависимости от морфологического диагноза:А.
Простая железистая гиперплазия эндометрия без атипииБ. Простая железисто-фиброзная гиперплазия эндометрия без атипииВ. Сложная гиперплазия эндометрия без атипииГ. Сложная железисто-фиброзная гиперплазия эндометрия без атипииВторая группа была разделена на 2 подгруппыА. Простая железистая гиперплазия эндометрия и хроническим эндометритомбез атипии15Б. Сложная гиперплазия эндометрия без атипии и хроническим эндометритомПациентки с простой и сложной железистой гиперплазией эндометрия с атипиейбыли исключены из исследования.
При формировании групп были использованыпринципы разделения по морфологическому диагнозу согласно Международнойклассификации ВОЗ(1980). Распределение больных с учетом морфологическойкартины эндометрия представлены в таблице №1.Таблица 1Результаты гистологического исследования эндометрияКоличество№Результат гистологического исследованияАПростая железистая гиперплазия эндометрия без атипии29БПростая железисто-фиброзная гиперплазия без атипии12ВСложная железистая гиперплазия без атипии5ГСложная железисто-фиброзная гиперплазия эндометрия безатипиибольных7АПростая гиперплазия и хронический эндометрит38БСложная гиперплазия и хронический эндометрит7Обследованные пациентки были в возрасте от 28 до 47 лет. Средний возрастженщин: I - 38±0,7 лет, II - 41±0,6, III - 39±0,2 года.
Причиной обращения в клинику увсех женщин было бесплодие. При этом первичное бесплодие в I группе было у 12(27,9%), вторичное у 31 (72,0%) женщин. Абсолютное бесплодие – отсутствиематочных труб - было у 3 (6,9%) пациенток I группы и у 2 (4,4%) женщин II группы.Продолжительность бесплодия у женщин: I группы была 3±0,6 лет, второй 4±0,9 лет.При этом женщины I группы уже имели в анамнезе 3-4 (3,45±0,4) попытки ЭКО и ПЭ,и пациентки II группы – 4-6 (5±0,7) попыток. Выявлена общая тенденция, ведущая кхроническому воспалению, бесплодию и неразвивающейся беременности – 38,7% искусственные аборты с повторными выскабливаниями.В результате исследования установлено, что в основной группе 35 из 88женщин (39,7%) ранее никогда не имели беременности, 53 (60,2%) ранее имелибеременности, при этом роды были только у 26 (29,5%).
У остальных 62 (70, 4%)пациенток были самопроизвольные выкидыши и неразвивающиеся беременности. 6716(76, 1%) женщины не предъявляли каких-либо жалоб кроме отсутствия беременности,остальные 21 (23, 8%) – жаловались на скудные менструации в течение 1-3 дней,возникшие в последние 1-3 года. В анамнезе обращает на себя внимание высокаячастота диагностических и вынужденных выскабливаний матки, связанных спрерыванием беременности 61 (69, 3%).При ультразвуковом исследовании локальное увеличенное М-эхо от 10 до 15мм было обнаружено у 32 (47, 1%), у остальных 36 (52, 9%) имела местонеравномерная эхогенность эндометрия при явной его «гипоплазии», у 23 (26, 1%) изних эндометрий был тонкий 4 -7 мм.
При допплерометрии у 8 женщин кровотоки всосудах матки были в пределах нормы. У 77 пациенток (87, 5%) были выявленынарушения гемодинамики различной степени.Допплерометрическое исследование кровотока в восходящей ветви маточнойартерии, а также в аркуатных, радиальных, базальных и спиральных артерияхвыявило отклонения от нормальных значений у 83 (94, 3%).
Определялось«обеднение» сосудистого рисунка с уровня радиальных артерий у 21 пациенток (23,9%) а также сигналов от базальных и спиральных артерий у 18 (20, 5%) пациенток.В результате бактериологического обследования рост условно патогеннойфлоры был обнаружен у 20 (22, 7%) женщин. Наибольшее присутствие было уStaphylococcus spp., E. сolli, Enterococcus и Enterococcus faecalis. У этих же пациентокбыли идентифицированы цитологические изменения клеток экто- и эндоцервикса,присущие дисплазии I и II степени воспалительного генеза.При минигистероскопическом исследовании очевидные признаки гиперплазии– полипы, очаговые фокусы гиперплазии были выявлены только у 34 (38, 6%)пациенток.
У всех остальных была картина неравномерно утолщенного эндометрияприсреднейегогипотрофии,одиночныеимультифокуcныеочагигиперваскуляризации и ультра-мелкие сосочковые выросты. У подавляющегобольшинства женщин – 57 (64, 8%)- имели место признаки хронического эндометрита- очаговые и диффузные крупно- и мелкоочаговые геморрагии, а также фиброзныеизменения и синехии как в цервикальном канале, так и в полости матки.В результате патоморфологического исследования у 45 (50, 1%) женщинимелся морфологически верифицированный диагноз: хронический эндометрит, у 17(25, 0%) - признаки гормональной дисфункции и один из вариантов гиперплазии17эндометрия. Одновременно были верифицирована гиперплазия эндометрия у 43 (48, 7%): железистые полипы эндометрия у 21 (23, 9%) женщин, железисто-фиброзныеполипы эндометрия у 6 (6, 8%), простая гиперплазия эндометрия без атипии – у 9(10, 2%) пациенток, сложная гиперплазия эндометрия без атипии у 4 (4, 5%).Иммуногистохимическое исследование (у 21 пациентки) показало, что у всехженщин были явные признаки нарушения рецептивности эндометрия как в I, так и воII фазу менструального цикла, а именно снижение коэффициента Pg/ER до 1, 2-1, 6при норме 2-4, снижение экспрессии LIF на 50-60 %, повышение CD 56 в 1, 5 раза,что свидетельствовало об увеличении NK–клеток в строме эндометрия.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
