Диссертация (1140205), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Исследуемый материал помещают напредметное стекло с 10% раствором щелочи (КОН, NaOH), накрываютпредметным стеклом и просматривают под малым увеличение микроскопа.Помимо щелочи в качестве иммерсионной среды возможно использование 50%глицерина, иммерсионного масла. Преимущество методики заключается ввозможности анализа наличия клещей не только на поверхности кожного покрова,37но и непосредственно в сальных желез. Здесь возникает другая проблема – невсегда удается добраться до клещей в глубине сальных желез. Недостаткомявляется также травматизация эпителия, иногда с возникновением кровотечения,обследование небольших по величине участков поражения, относительнаяболезненность процедуры, дискомфорт пациентов после эпиляции и затратавремени (Forton F., Song M., 1998; Сирмайс Н.С., Абесадзе Г.А., Устинов М.В.,2013).Возможнопроведениестандартизированнойповерхностнойкожнойбиопсии (SSSB) (Bonnar E., Eustace P., Powell F.C., 1993; Forton F., Seys B.
1993;Crawford G.H., Pelle M.T., James W.D., 2004). На обезжиренное покровное стеклонаносят каплю клея цианокрилата (БФ-6, сульфакрилат), затем приклеивают кпораженной поверхности на 1 минуту. На капле цианоакрилата обозначаетсяучасток равный 1см2 для дальнейшего подсчета клещевой количественнойнагрузки. После снятия наносится раствор щелочи, накрывается поверхпокровным стеклом и рассматривается под микроскопом на малом увеличении(Forton F., Song M., 1998).
Недостатками диагностики может служить то, чтоклещи не всегда адгезируются на поверхность капли клея, а иногда примикроскопии их не удается выявить из-за того, что между клещами и клеем могутнаходиться ороговевшие клетки эпителия или кожное сало. Поэтому, передпроведением исследования кожу необходимо обезжиривать эфиром (Forton F.,Song M., 1998).Модификацией методики является использование скотча («скотч-проба»),размером 1 см2, который после снятия приклеивается к покровному стеклу нараствор щелочи. При снятии покровного стекла или скотча, на их поверхностиостается слой эпидермиса, содержимое сальных желез с имеющимися тамклещами. Плюсами метода является проведение процедуры на любом участкекожного покрова, а также простота применения.
Травматизация эпителия,трудность получения материала с крыльев носа, неполная стерильность38получаемых препаратов являются недостатком метода (Сирмайс Н.С., АбесадзеГ.А., Устинов М.В., 2013).Еще одним методом диагностики демодекоза является проведение кожнойбиопсии с последующей гистологией полученных препаратов.
С этой цельюпункционным (панч) или эксцизионным (скальпель) методом берут небольшойучасток кожи, фиксируют его в течение суток 10% нейтральным растворомформалина,уплотняютпарафиномиокрашиваютгематоксилин-эозином.Гистологическое исследование дает массу преимуществ. В частности, можнополностью посмотреть сальную железу и окружающие ее участки. Главнымнедостатком метода является травматизация кожного покрова с образованиемрубца, а также невозможность обследования большой поверхности кожногопокрова (Сирмайс Н.С., Абесадзе Г.А., Устинов М.В., 2013). По мнению М.В.Камакиной (2002), при наличии клинической картины заболевания существуетстатистическая возможность отрицательного результата анализа, составляющая1,5% (Камакина М.В., 2002).В качестве диагностического инструмента для выявления клещей родаDemodex Segal R. et al. (2010) предложили использовать дерматоскоп.
Прииспользовании дерматоскопии, как метода исследования при демодекозе, авторописывает три патогномоничных характерных признака: «демодекс хвосты» - ввиде белесоватых нитей длиной 1-3 мм с локализацией в устье волосяныхфолликул или выводных протоках сальных желез; расширенные фолликулы сналичием серых или коричневых пробок внутри, а также горизонтальнорасположенные расширенные кровеносные сосуды (Segal R. et al., 2010).Марвин Мински в 1957 г. запатентовал «сканирующий микроскоп сдвухстадийной фокусировкой» (термин «конфокальный» - основанный насопряжении фокусов). Если в обычных флуоресцентных микроскопах в качествеисточника света, возбуждающего флуоресценцию, используется ртутная иликсеноновая лампа, то в современных конфокальных микроскопах – это лазер.39Впервые лазер в конфокальной микроскопии применил Давидович П.
в 1969 г. Вкачестве источника монохроматического и когерентного света в современныхконфокальных микроскопах используется диодный лазер с целью более точнойработыоптическойсистемымикроскопа,снижениячислабликовнаизображениях, улучшения фокусировки пучка света (Митрошина Е.В., 2012).Сфокусированный лазерный луч освещает определенную точку кожного покрова(Psaty E.L.,микроскопадиафрагмаHalpernзаднийA.C., 2009). Вследствиефокусфотоприемника,конденсора,совпадаетгдесопределенногоустановленапереднимустройства«конфокальная»фокусомобъектива,получаются изображения с очень тонкого слоя объекта - «оптические срезы»(Штейн Г.И., 2007).
Работа конфокального лазерного сканирующего in vivoмикроскопа основана, преимущественно, на способности различных структуркожного покрова преломлять лазерное излучение, таким образом, получатьизображения слоев эпидермиса и дермы (Rajadhyaksha M., 1998) и оцениватьсостояние сосудов кожи и волокон дермы (Nwaneshiudu A. et al., 2012).Конфокальная лазерная сканирующая in vivo микроскопия представляет собойновый метод изучения структур кожи в виде картин бело-серо-черных оттенков.Изображения структур достигается путем преломления света от фокальнойобласти и чем глубже участок, тем более высокая мощность лазера требуется(Hofmann-Wellenhof R. et al., 2012).
Меланоциты и кератиноциты на снимкахвыглядят ярко-белыми, воздух, серозная жидкость - черные (Кубанова А.А. исоавт., 2014). Конфокальная лазерная сканирующая in vivo микроскопияпозволяет определить толщину и визуализировать различные слои кожи. Такимобразом, метод предоставляет дополнительную информацию о составе иструктурекожи(NeerkenS.etal.,2003).Вофтальмологииудаетсявизуализировать изменения мейбомиевых желез в виде расширения илиобструкции, наличие воспалительных инфильтратов, а также обнаружить клещейрода Demodex (Messmer E.M. et al., 2005). Метод конфокальной лазерной40сканирующей in vivo микроскопии можно приравнять к гистологическомуисследованию кожи с тем преимуществом, что исследование выполняетсянеинвазивно (Rajadhyaksha M., 1998). По разным данным, в зависимости отнозологии, чувствительность метода составляет 83-91%, специфичность - 95-99%(Nori S.
et al., 2004; Gerger A., Koller S., Kern T. et al., 2005; Gerger A., Koller S.,Weger W. et al., 2006).Использование конфокальной лазерной сканирующей in vivo микроскопиивдерматологиинасегодняшнийденьсчитаетсяоднимизнаиболееперспективных методов, несмотря на то, что имеет ряд недостатков (получениеотносительно поверхностных изображений до 200 мкм, что ограничиваетвозможность исследования более глубоких слоев кожного покрова, отсутствиевозможностиполучениявертикальныхизображений,высокаястоимостьоборудования и его эксплуатации и, как следствие, недоступность для большегочисла дерматологов) (Штиршнайдер Ю.Ю.
и соавт., 2011; Nwaneshiudu A. et al.,2012).По сравнению с обычной световой микроскопией преимуществами методаявляется получение высококонтрастных изображений с высокой разрешающейспособностью, их трехмерная реконструкция, цифровая обработка полученныхданных, а также возможность проведения исследования в динамике и,непосредственно, у постели больного вследствие портативности устройства(Штейн Г.И., 2007; Nwaneshiudu A. et al., 2012; Hofmann-Wellenhof R. et al., 2012).Однимизпреимуществметодаявляетсявозможностьобнаруженияиколичественной оценки Demodex folliculorum на коже лица пациентов с розацеа,подсчет количества клещей и фолликул на единицу площади (Sattler E.C. et al.,2012).
Sattler E.С. et al. (2012), обследуя кожный покров пациентов с розацеа,описали наличие демодекса в виде округлых или длинных конусообразныхструктур (Sattler E.C. et al., 2012). Kojima T. et al., (2011) продемонстрировалииспользование конфокальной лазерной сканирующей in vivo микроскопии для41диагностики демодекоза глаз (Kojima T. et al., 2011).
Авторам удалось обнаружитьклещей в терминале луковиц ресниц, воспалительные инфильтраты вокругмейбомиевых желез и конъюнктивы.Таким образом, по данным научной литературы конфокальная лазернаясканирующая in vivo микроскопия является неинвазивным и быстрым методомобнаруженияклещейродаDemodex,превосходястандартныеметодыисследования (Turgut E.A. et al., 2014).Несмотря на достаточный объем научного материала по изучениюдерматозов, сопровождающихся папулопустулезными высыпаниями, актуальнымявляется поиск нетравматичных и достоверных способов оценки кожныхизменений. Одним из современных методов является применение конфокальноголазерногосканирующегоinvivoмикроскопа.Конфокальнаялазернаясканирующая in vivo микроскопия - инновационный метод, достоинства которого- неинвазивность и высокая информативность. Данный метод для исследованияпапулопустулезных дерматозов и выявления клеща ранее не применялся, хотяиспользование неинвазивных методик всегда считается приоритетным вмедицине.Имеющиесятребованиямметодысовременнойдиагностикимедицины,демодекозаненегарантируютудовлетворяютабсолютнойдостоверности результатов анализов, нередко травматичны и не объективны.
Втаком случае, альтернативным направлением в современной инструментальнойдиагностике может стать конфокальная лазерная сканирующая in vivoмикроскопия, которая позволит выявить клещей рода Demodex неинвазивно свысоким процентом достоверности.421.8. Антипаразитарная терапия у больных розацеа при наличии клещей родаDemodexПри выборе терапии необходимо учитывать клиническую картинузаболевания, тяжесть процесса, а также сопутствующую патологию больного(Франкенберг А.А. и соавт., 2007).Особенность строения клещей создает дополнительную трудность длятерапии.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
