Диссертация (1140205), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Кожный покров пациентоввизуализировался в виде квадратов, размерами 5мм×5мм, мощность лазерасоставляла 21,7 mW. С помощью конфокального лазерного сканирующего in vivoмикроскопа проведен подсчет количества клещей в фолликулах, количествофолликул на единицу площади, определены средние размеры фолликул и клещей,глубина залегания клещей.Для оценки достоверности метода конфокальной лазерной сканирующей invivo микроскопии обследование проводилось во всех трех группах исследуемых иу респондентов, не вошедших в исследование (n=212).
Проведено сравнительноеисследование по эффективности методов конфокальной лазерной сканирующей in78vivo микроскопии и соскоба с последующим микроскопическим исследованием.Полученные данные представлены в таблице 4.2.Таблица 4.2. Сравнительный анализ методов исследования на наличие клещейрода Demodex в диагностически значимых количествахИдентификацияклещей Demodex(>5 особей на 1см2)ПоложительныйанализОтрицительныйанализИтогоСветовая микроскопия соскобов60 (43.58) [6.18]80 (96.42) [2.79]6 (22.42) [12.02]66 (49.58) [5.43]66146ПоложительныйОтрицительныйанализанализБольные розацеа140Здоровые лица72Итого212ИдентификацияИтогоклещей Demodex(>5 особей на 1см2)Конфокальная лазерная сканирующая in vivo микроскопияБольные розацеа80 (60.75) [6.1]60 (79.25) [4.67]140Здоровые лица12 (31.25) [11.85]60 (40.75) [9.09]72Итого92120212Таблица содержит следующую информацию: наблюдаемые значения, (ожидаемые значения) и[χ2 статистика для каждой ячейки], p<0.05χ2 для световой микроскопии соскобов равен 26.4324, результат значителенпри p<0.05, χ2 для конфокальной лазерной сканирующей in vivo микроскопииравен 31.7122, результат значителен при p<0.05.Сравниваярезультаты,полученныеметодомсоскобаисветовоймикроскопии и конфокальной лазерной сканирующей in vivo микроскопии убольных розацеа и здоровых лиц выявлено, что в большем количестве случаевклещи рода Demodex обнаруживаются методом конфокальной лазернойсканирующей in vivo микроскопии, тогда как соскоб у данных больных былотрицательный (p<0.05).
Положительный результат на наличие клещей родаDemodex методом световой микроскопии соскобов имели 60 больных розацеа79(28.3%), методом конфокальной лазерной сканирующей in vivo микроскопии – 80больных (37.7%).Методом конфокальной лазерной сканирующей in vivo микроскопиитакже удалось выявить клещей рода Demodex у здоровых лиц (n=12; 5.7%),причем, при проведении световой микроскопии соскобов клещи рода Demodex вколичестве 5 особей на 1 см2 были обнаружены только у шести здоровых лиц(n=6; 2.8%), у остальных 66 человек (31.1%) данные световой микроскопиисоскобов были отрицательными (p<0.05). Полученные данные демонстрируют нетолько высокую информативность метода конфокальной лазерной сканирующейinvivoмикроскопии,диагностикой.ноиегоПоложительныйпревосходстворезультатунадздоровыхмикроскопическойлицподтверждаетпредположения некоторых авторов о том, что клещи могут быть сапрофитами(Бутов Ю.С., Акилов О.Е., 2003; Сирмайс Н.
С., Абесадзе Г.А., Устинов М.В.,2013).4.2.Совершенствование лабораторной диагностики по определениюклещей рода DemodexВ настоящее время нет четких алгоритмов и рекомендаций по порядкупроведения световой микроскопии соскобов для определения наличия клещейрода Demodex. Забор материала производится стерильным скальпелем снескольких наиболее пораженных зон лица, а анализ считается положительнымпри нахождении хотя бы одной особи. При этом в клинической практике диагноз«Демодекоз»невыставляетсявообще,ацелесообразностьназначенияпротивопаразитарного лечения решает врач.В научной литературе при проведении стандартизированной поверхностнойкожной биопсии (SSSB) считается, что клещи рода Demodex начинают проявлятьпатогенные свойства при количественной нагрузке более 5 клещей на 1 см280(Forton F., Seys B.
1993). Руководствуясь этими данными, забор материалапроводился методом световой микроскопии соскобов на заранее очерченномучастке кожи в 1 см2. По нашим данным, обнаружить клеща методом световоймикроскопии соскобов на 1 см2 кожи довольно сложно (таблица 4.3).Таблица 4.3. Обнаружение клещей рода Demodex методом световой микроскопиисоскобовБольныерозацеа сналичиемклещей родаDemodexБольные розацеа сотсутствием клещейрода DemodexНаличиеклещей родаDemodex>5/см2Отсутствие клещейрода Demodex60; 28.360; 28.380; 37.880; 37.8Таблица содержитсоотношение (%)следующуюЗдоровыелицаНаличиеклещейродаDemodex>5/см22; 0.9информацию:НаличиеклещейродаDemodex<5/см24; 1.972; 33.9n=количествоИтогоОтсутствиеклещейродаDemodex66; 31.1наблюдений;212;100процентноеЗа время исследования метод световой микроскопии соскобов кожи сцелью обнаружения клещей рода Demodex был проведен 212 респондентам,включая больных розацеа и здоровых лиц.
Причем, клещи рода Demodex вдиагностически значимом количестве (>5 особей на 1 см2) выявились у 60больных розацеа (28.3%), вошедших в I группу. У 80 больных розацеа (37.8%)клещи рода Demodex отсутствовали вовсе при развернутой клинической картинезаболевания.Интересныеданныеполученыприобследованииздоровыхлиц.Отрицательный анализ на наличие клещей рода Demodex имели 66 человек81(31.1%), при этом, клещи рода Demodex обнаруживались в диагностическизначимом количестве (более 5 особей на 1 см2) у двоих исследуемых (0.9%), учетверых респондентов клещи обнаружились в количестве менее 5 особей на 1см2 (1.9%).
Учитывая способность клещей к передвижению по поверхностикожного покрова со скоростью 8-16 мм/ч (Hoekzema R. Et al., 1995; Demler M., deKaspar H.M., 1997), а также случайный выбор исследуемого участка, данный фактне доказывает отсутствие клещей. Учитывая видовую принадлежность клещейрода Demodex у здоровых лиц (у всех был обнаружен Demodex folliculorumbrevis), отсутствие клинической картины заболевания подтверждает, что данныйвид относится к сапрофитам кожи лица.При исследовании тех же респондентов методом конфокальной лазернойсканирующей in vivo микроскопии, были получены следующие данные (таблица4.4):Таблица 4.4. Обнаружение клещей рода Demodex методом конфокальнойлазерной сканирующей in vivo микроскопииБольныеБольные розацеа срозацеа сотсутствиемналичиемклещей родаклещей родаDemodexDemodexНаличие клещейОтсутствиерода Demodexклещей рода2>5/смDemodex80; 37.860; 28.380; 37.860; 28.3Таблица содержитсоотношение (%)следующуюЗдоровыелицаНаличиеОтсутстклещей родавие клещей2Demodex >5/см рода Demodex12; 5.760; 28.372; 34информацию:n=количествонаблюдений;Итого212; 100процентноеПри анализе данных таблицы 4.4 обращает на себя внимание тот факт, чтометодом конфокальной лазерной сканирующей in vivo микроскопии удаетсядетально проанализировать большую поверхность кожного покрова, просмотреть82большое количество выводных протоков сальных желез и волосяных фолликул.Менее 5 особей клещей на 1 см2 ни в одном случае обнаружено не было.Таким образом, конфокальная лазерная сканирующая in vivo микроскопия,являясь более точным методом диагностики на наличие клещей рода Demodex посравнению со световой микроскопией соскобов, доказывает, что при наличиихотя бы одного клеща в соскобе, имеется высокая вероятность паразитированияклещей в других местах кожи лица или в недоступных для соскоба зонах.Забор материала с разных зон лица при проведении световой микроскопиисоскобовнаналичиеклещейродаDemodexувеличиваетвероятностьобнаружения клещей.
Отрицательный анализ световой микроскопии соскобов наналичие клещей рода Demodex не доказывает его достоверного отсутствия накоже, поэтому также важным является анализ биологического материала снескольких областей лица, проведение нескольких последовательных соскобовилиподтверждениеналичия/отсутствияклещейродаDemodexдругимдиагностическим методом.4.3. Конфокальная лазерная сканирующая in vivo микроскопия вдиагностике наличия клещей рода DemodexПрипроведенииконфокальнойлазернойсканирующейinvivoмикроскопии клещи рода Demodex были обнаружены у всех больных розацеа Iгруппы (n=60) и у здоровых лиц (n=12).Данные, полученные двумя методами исследования – соскобом споследующей микроскопией и конфокальной лазерной сканирующей in vivoмикроскопией на наличие клещей рода Demodex совпали у больных I группы.Опровергая данные, полученные при проведении световой микроскопиисоскобов, методом конфокальной лазерной сканирующей in vivo микроскопииклещи рода Demodex были также найдены у больных розацеа II группы (n=20;839.4%) и у здоровых лиц в большем количестве случаев (n=12; 5.7%).
Клещи родаDemodex определялись в виде округлых или длинных конусообразныхобразований в устьях волосяных и сальных желез c наличием контурации попериферии (рисунок 4.1) в количестве от одной до 25 особей (в среднем 3.37).Рисунок 4.1. Изображения, полученные на конфокальном лазерном сканирующеммикроскопе VivaScope 1500 ® (Lucid Inc., Rochester, NY, USA). Волосяныефолликулы и протоки сальных желез с наличием (слева) и отсутствием (справа)клещей рода DemodexПолучая поочередно снимки всех слоев эпидермиса с шагом в 3 мкм,конфокальная лазерная сканирующая in vivo микроскопия позволяет обнаружитьклеща на глубине залегания, недоступного для скарификации, как, например, впротоках сальных желез.
Клещ регистрировался на всем протяжении эпидермиса.Средняя глубина залегания клещей составляет 46.63±6.78 мкм, что соответствуетуровню шиповатого слоя эпидермиса. Пенетрации паразита в верхние слои дермывыявлено не было.84Использованиеконфокальноголазерногосканирующегоinvivoмикроскопа позволило определить средние размеры клещей рода Demodex.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
