Диссертация (1140073), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Диапазон этих различий связан свозрастнымиособенностямиактивациигипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной оси при хроническом стрессе.Проведенное исследованиепоказало наличие иммуносупрессивныхизменений в селезенке у неполовозрелых крыс, состав и выраженностькоторых различаются у животных разных возрастных групп (инфантильногои перипубертатного возраста) при хроническом действии гетеротипическихстрессоров по сравнению с гомотопическим стрессом.Полученные данные могут использоваться при разработке адресных мерпрофилактики иммуносупрессивных нарушений в растущем организме,пережившем хроническое действие гомо- или гетеротипических стрессоров.Результаты диссертационного исследования могут применяться в учебномпроцессе и быть использованы при написании учебных пособий по клеточнойбиологии, цитологии, гистологии, иммуноморфологии.Основные положения, выносимые на защиту1.Стресс-ассоциированные изменения в селезенке растущего организмапри хроническом действии гомо- и гетеротипических стрессоров различаются9динамикой клеточных популяций лимфоцитов и дендритных клеток,уровнями апоптоза и пролиферации клеток в ее Т- и В-зонах.2.Диапазон этих различий имеет возрастные закономерности, связанные сособенностями активации гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной осипри хроническом стрессе в различные возрастные периоды до наступленияполовой зрелости.Личный вклад автора в проведенное исследованиеНаучные результаты, обобщенные в диссертационной работе полученыавтором самостоятельно Автором лично проведены морфологические,гистохимическиеиморфометрическиеисследования,выполненыстатистическая обработка, анализ и трактовка полученных результатов,сформулированы выводы и практические рекомендации, подготовленынаучные публикации и доклады.Соответствие диссертации паспорту научной специальностиНаучные положения диссертации отвечают паспорту специальности 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистологияПубликации и апробация материалов диссертацииМатериалыконференцияхгосударственногодиссертациидокладывалисьнастудентов и молодых ученыхитоговыхнаучныхВолгоградскогомедицинского университета, 2005, 2008, 2009, 2014 гг.
,Тhe 24th Meeting of the Malaysian Society of Physiologists and Pharmacologists,Shah Alam, June 2010; Proceedings of the 6th APICA, Surabaya, Indonesia, July2011По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ, в томчисле - 4 (2- оригиныльных, 2- обзорных) в изданиях, рекомендованых ВАКМинистерства образования и науки РФ, 3 публикации в зарубежных изданиях.10Объем и структура работыДиссертация изложена на 103 страницах машинописного текста исостоитиз введения, обзора литературы, описания материалов и методовисследования, собственных результатов, их обсуждения, выводов, заключенияи списка литературы, включающего российских и зарубежных источников.Работа иллюстрирована 9 рисунками.Материалы и методы исследованияИсследование выполнено на 48 крысах породы Спрег-Доули в возрасте20 и 45 суток, что соответствовало инфантильному и перипубертатномупериодам постнатального развития.
На момент окончания экспериментавозраст был 28 и 53 суток соответственно [151]. . В каждой возрастной группе,включающей 24 особи, животных подразделяли на 3 подгруппы: контрольнуюи 2 экспериментальные для моделирования хронического гомотипического игетеротипического стресса [66].В качестве гомотипического стрессорного воздействия применялсястресс «избегания воды», а в качестве гетеротипического — использоваласьнепредсказуемая последовательность действия трех стрессоров: «избеганияводы», водной иммерсии и иммобилизации при температуре 4 °С.
Животныхсодержали в стандартных условиях вивария при температуре +20...20 °С сдоступом к воде и пище ad libitum. Экспериментальных животных ежедневнона протяжении 9 суток по 2 ч в день, начиная с 9 ч утра, подвергалистрессорному воздействию, в то время как животные групп возрастногоконтроля находились вне аудио- и видеодосягаемости от экспериментальныхживотных. После последнего сеанса стресса животных под анестезиейдекапитировали, селезенку извлекали, фиксировали формалином и заливали впарафин.Гистологические срезы селезенки окрашивали гематоксилином эозином и иммуногистохимически поликлональными антителами к белкуS100 (Дако, Дания, Z0311), а также моноклональными антителами к PCNA11(клон PC 10) - ядерного антигена пролиферирующих клеток (AbDSerotec,США, MCA 1558); CD4 (клон W3/25) - маркеру Т-хелперов и тимоцитов(AbDSerotec, США, МСА55); CD8 (клон MRC ОХ8) - маркеру тимоцитов, Тклеток и NK-клеток (AbDSerotec, США, МСА48), CD90 (клон HIS51) маркеру тимоцитов, недавних тимусных иммигрантов (BD Biosciences,#550570), каспазы-3 - маркеру апоптоза (AbDSerotec, США, #AHP476), 0X62(клон MRC 0X62) - маркеру дендритных клеток (AbDSerotec, США, MCA1029); CD20 (клон R1N- 9D3) - маркеру пре- и зрелых В-лифмоцитов(AbDSerotec, МСА#1432).Для визуализации применяли стрептавидин-биогин - пероксидазныйметод по стандартным методикам в соответствии с рекомендациямипроизводителей реактивов.
Удельные площади иммунопозитивных клеток,окрашенныхдиаминобензидиномвкоричневыйцвет,оценивалиморфометрически с применением программы Image-Pro+ 8.0 (MediaCybernetics, США), транспортирующей цифровые данные в программу Excel.Определяли среднюю арифметическую величину, среднеквадратическоеотклонение, ошибку репрезентативности. Оценку значимости различийсравниваемых величин проводили с использованием t-критерия Стьюдента.Критическим уровнем значимости считали р<0,05.12ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.ВЛИЯНИЕ ХРОНИЧЕСКОГО СТРЕССА НА СТРУКТУРНОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПАРАМЕТРЫ СЕЛЕЗЕНКИ КРЫС ВРАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ПОСТНАТАЛЬНОГО ОНТОГЕНЕЗА1.1.Иммуноморфология и гистофизиологияселезенки каккрупнейшего периферического органа иммуногенеза.Самым крупным лимфоидным органом человеческого организмаявляется селезенка.
Она вносит большой вклад в развитие и поддержаниеклеточного и гуморального иммунного ответа, врожденного и приобретенногоиммунитета, количественный и качественный состав иммунных клеток крови,лимфы и других лимфоидных органов.Микроархитектоника селезенки человека описана в многочисленныхисследованиях по гистофизиологии и иммунопатологии лимфоидных органов,однако до сих пор представления о микроструктуре и гистофизиологииселезенки остаются весьма противоречивыми [52,56,80,134,175].Схожей чертой периферических лимфоидных органов, и селезенки в томчисле, считается их компартментализированное строение, обеспечивающеевозможность эффективного иммунного ответа. Наличие в селезенке двухпринципиально отличающихся зон – красной и белой пульпы, а в последнейТ- и В – зон с их различнымми компартментами (периартериальныелимфоидные влагалища, лимфоидные узелки, маргинальная зона), различныхпо строению и функции, делает тонкую иммуногистохимическую структуруселезенки весьма информативной в плане оценки иммунного статусаорганизма.Понимание микроморфологии этого органа чрезвычайно важно нетолько для теоретической, но и для практической медицины, посколькуселезенка является важнейшим органом рециркуляции лимфоцитов учеловека.13Послепоявленияметодовиммунногистохимическоговыделениястромальных и гематогенных клеток дифференцировать микроархитектоникуиммунных органов, включая селезенку, стало легче.
Микроморфологическаякомпартментализация,микроциркуляторноеруслоифункциональноесостояние селезенки можно информативно оценить с применением различныхмоноклональных антител.У человека и грызунов селезенка, как крупнейший периферический органиммуногенеза, имеет ряд важных отличительных особенностей в сравнении сдругими иммунными органами [1,39,80,147,168].1.1.1. Иммуноархитектоникаифункциибелойпульпыистромальной зоны селезенки.Белой пульпой селезенки называется скопление лимфоидной ткани,состоящей из лимфоцитов, расположенных около артерий.
Объем белойпульпы составляет от 5 до 20% массы органа. Уникальное кровоснабжениеселезенки определяет особенности ее гистофизиологии. Многочисленныеразветвления селезеночной артерии вкупе составляют сосудистую сеть белойпульпы, в которойТ-клеткиобразуютпериартериальные лимфоидныевлагалища (ПАЛВ), заселенные Т-лимфоцитами, распологающимися средиинтердигитирующихклеток,экспрессирующихгистосовместимости,участвующийвглавныйинициированиикомплексТ-клеточногоиммунного ответа.Лимфоидные узелки представлены скоплениями В-лимфоцитов по ходусосудистой сети. В узелке находится центр размножения– место, гдепроисходит пролиферция В-лимфобластов после на антигенной стимуляции.Вокруг лимфатического узелка выделяют зону, где лимфоциты покидаютмелкие кровеносные капилляры и поступают в маргинальную зону селезенки.Именно из этой маргинальной зоны Т-лимфоциты мигрируют к ПАЛВ, а Влимфоциты попадают в лимфатические узелки.
Обе зоны содержат также14большоеколичествоантиген-презентирующихклетокимакрофагов[1,10,56,127,134,144]Ширина маргинальной зоны вокруг структур белой пульпы составляетоколо 100 мкм. В этой зоне находятся плазмоциты, Т- и В-клетки(дифференцирующиеся для распознавания тимус-независимых антигенов) иинтердигитирующие клетки (антиген-презентирующие). Кровь, поступающаяв краевую зону, течет через богатую макрофагами область. Макрофагифагоцитируютизкровиантигеныидругиечужеродныечастицы.[127,134,147,169].Краевая или маргинальная зона, осуществляющая взаимодействиемежду красной и белой пульпой являетсяразделяющим белую пульпу иуникальным компартментом,красную пульпу. В маргинальной зонекровоток происходит через открытую систему ретикулярных клеток иволокон, в которой расположены многочисленные миелоидные и лимфоидныеклетки, взаимодействующие с популяцией В-клеток. Они располагаютсятолько в маргинальной зоне иактивируются ся при появленииспецифического антигена.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
