Диссертация (1140073), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Он включаетиммуноцитохимические методы с последующей цифровой обработкойизображения.Имидж-анализ является наиболее чувствительным и специфичнымметодом в современных морфологичеких исследованиях.Иммуногистохимическая реакция на различные группы дендритныхклеток, лимфоцитов и клеток, гибнущих путем апоптоза, показала влияниеобоих видов стресса на динамику данных клеточных популяций.УменьшениедолиCD8+клетокселезенкибылосвязаносинтенсивностью действия стрессора: при гетеротипическом стрессе лишьединичные иммунореактивные клетки отмечались во внутренней зоне ПАЛВ,в то время как при гомотипическом стрессе они персистировали и в наружнойзоне ПАЛВ, и в маргинальной зоне.71После воздействия стресса имело место заметное снижение удельной долиНТИ – клеток с фенотипом CD90+ .
Изменение удельной площади CD90+позволило продемонстрировать разреженность иммунопозитивных клеток вселезенке, значительно сильнее выраженную при гетеротипическом стрессепо сравнению с гомотипическим стрессом, а при последнем – по сравнению сконтролем.Изучение динамики рaспределения CD90+ клеток показало, что данныйпоказатель, характеризующий траффик лимфоидных клеток из «центра» на«периферию» достоверно снижался у крыс всех возрастов.
Такая динамикаCD90+ иммунореактивных клеток обусловлена активацией симпатическойнервной системы. Содержание CD90+ иммунореактивных клеток оказалосьсамым чувствительным маркером в оценке иммуномодуляционных измененийв селезенке при разных видах стресса. Этот показатель с высоким уровнемзначимости различался у животных экспериментальных и контрольных группвсех возрастов при каждом виде стресса.Некоторые исследователи считают, что иммобилизационный стресс,оказывает влияние на Т-лимфоциты значительно в большей степени, чем наВ-клетки.
Другими исследователями показано, что этот вид стресса напротивв большей степени влияет на В-клетки и CD8+ Т-клетки, чем на CD4+ Тклеткивселезенке,чтосвязаносадренергическойстимуляцией,интенсивность которой обусловлена количеством бета-адренорецепторов улимфоцитов, а оно оказалось различным у разных типов клеток (больше у Вклеток и СD8+клеток, меньше у CD4+клеток) [90,100,162,169]Считается, что параметрыприобретенного иммунного ответареализуются с помощью Т- и В-лимфоцитов и антиген-презентирующихклеток. Противоположные данныеприменениемколичественнойполучены другими авторами симмуногистохимии.Некоторыевторыдопускают, что ФДК наиболее очевидный источник антигенов, необходимыхдля дифференцировки В-клеток центров размножения, и что основная масса72пролиферирующих В-клеток гибнет путем апоптоза. Имидж-анализ показалприсутствие макрофагов с клеточными детритами по всемуцентруразмножения, причем максимальная клеточность отмечалась в местенахождения более густой сети ФДК.
На основании полученных данных можносогласится с мнением тех авторов, которые считают, что ФДК вовлечены вовступление В-клеток на путь апоптоза [ 128,151], на что указывает их тесныйконтакт с ФДК.Существуют исследования, которыепродемонстрировали,чтонекоторые ФДК экспрессируют Fas-лиганд. Такие данные свидетельтвуют,что ФДК могут играть важную роль в апоптозе В-клеток герминативныхцентров через взаимодействия Fas-Fas-лиганд.Мыпроизвелипостстрессовойоценкугипоплазиинесколькихселезенки:уровнявозможныхмеханизмовпролиферацииклеток(окрашивание на PCNA), гибели апоптозом (окрашивание на каспазу-3).При окраске на PCNA площадь иммунореактивных клеток в ПАЛВ снижаласьумеренно в инфантильной группеи резко – в перипубертатнойэкспериментальной группеЭкспрессия РСNA по-разному снижалась при гомо- и гетеротипическомстрессе, при гетеротипическом стрессе: с большей достоверностью у крысперипубертатного возраста по сравнению с крысами, взятыми в экспериментв инфантильный период.
Выявлена схожесть в снижении экспрессия РСNA вселезенке при обоих видах стресса. Стоит отметить, что самые существенныеразличия этого показателя в обеих экспериментальных группах отмечены пригетеротипическом стрессе и в старшей возрастной группе. Это демонстрируетнеобходимость определенной степени зрелости иммунной системы длядифференцировки вида стрессорного воздействия.Активированные Т-клетки участвуют в регуляции фолликулярныхдендритных клеток .
И фолликулярные клетки В-зон и интедигитирующиеклетки Т-зон гибнут каспаза-3-медиированнм апоптозом. Как и при другихметодах окрашивания,различия между экспериментальными группами73выражены ярче, при окрашивании на каспазу-3. Выявилось, что увеличениеколичества клеток, гибнущих путем апоптоза, находилось в прямойкорреляции с частотой выявлениямакрофагов с апоптозными тельцами,Изменение реакции на каспаза-3-иммунореактивные клетки было заметновышепригетеротипическомстрессеуживотныхперипубертатнойэкcпериментальной группы.Увеличение экспрессии каспазы-3 отмечалось главным образом влимфоидных узелках и ПАЛВ. Доказано, что активация ГГНС и повышениесодержания кортикостероидов в крови приводит кповышению уровняапоптоза. Различия в степени повышения данного параметра в разныхвозрастных группах свидетельствует с одной стороны о меняющейсячувствительности к действию кортикостероидов и с другой стороны о степенизрелости самой ГГНС в растущем организме.Существуютэкспериментальныеданные,доказывающие,чтовоздействие хронического стресса у крыс приводит к появлению в селезенкезначительного числа макрофагов с неокрашенной цитоплазмой и сприсутствием в ней апоптозных телец [143].
Аналогичные изменения быливыявлены и в нашем исследовании. Такие результаты свидетельствует о том,что интенсивности апоптоза можно судить также по количеству макрофаговс апоптозными тельцами в цитоплазме, а повышение после воздействиястресса расшифровывает важнейший механизм гипоплазии иммунныхорганов при стрессе – избыточный апоптоз иммуноцитов.При анализе полученных нами данных выявляласьотчетливаятенденция: максимальная степень снижения клеточных популяций с селезенкепосле воздействия обоих видов стресса отмечалась у животных инфатильногопериода, что может быть связано с особенно высокой чувствительностьюорганов иммуногенеза к действию стресса после перехода на самостоятельноепитание.Вследствие функциональной незрелости иммунной системы, хрупкогобаланса между врожденным и приобретенным иммунным ответом в раннем74возрасте, усиление силы стрессорного воздействия приводит к нарастающейгипоплазии периферических иммунных органов, прежде всего селезенки,причем в инфантильном периоде в большей степени повреждается Тклеточный компартмент, а в перипубертатном – и Т-, и В-зоны.Проведенное нами исследование показало, что иммуноцитохимическиеметоды оценки уровня иммуномодуляционных изменений достаточночувствительны для того, чтобы уже на качественном уровне оценитьнаправленность сдвигов большинства иммунных параметров в селезенке приразличных видах стрессового воздействия у животных разных возрастныхгрупп.
С их помощью было продемонстрировано, чтостресс вызываетизменения в селезенке, преимущественно соответствующие состояниюиммуносупрессии: снижение клеточности (преимущественно в белой пульпеи маргинальной зоне), уменьшение доли супрессоров/цитотоксическихСD8+клеток (в ПАЛВ), доли PCNA-иммунореактивных клеток, отражающийпролиферативные потенцииклеточных популяций в большей степени влимфоидных узелках, ПАЛВ и маргинальной зоне.Из литературных данных известно, что процессы пролиферации иклеточной гибели контролируются глюкокортикоидами.
Стресс являетсяадаптационным физиологическим ответом живых систем на реальную иливоображаемую угрозу жизни [B.K.Choudhury et al., 2009]. Он инициирует ворганизме цепь интегрированных реакций эндокринной, нервной и иммуннойсистем. Такие реакции обусловленны активацией гипоталамо-гипофизарноадренокортикальной (ГГАО) и симпато-адреналовой осей, что приводит квысвобождению глюкокортикоидов и выбросу катехоламинов: адреналина инорадреналина,обуславливающихсложныеиммуномодуляционныеизменения.Высвобождение кортикотропин – рилизинг - фактора, активирующегогипоталамо-гипофизарно-адренокортикальнуюнейроэндокриннуюось,приводит к высвобождению группы гормонов и нейротрансмиттеров, каксистемно, так и селективно в тканях определенных органов.
Высвобождение75нейротрансмиттеров вызывает практически немедленный ответ со стороныоргана-мишени, в то же время более постепенное высвобождение гормоновэндокринными железами может увеличивать и поддерживать стрессорныйответ достаточно продолжительное время [С.Л.Кузнецов и др., 2008, 2009;М.Ю.Капитонова и др., 2008; 2010; A.M. Bao et al., 2008; A.Armario et al., 2009].Такиеизмененияособеннолегкопровоцируютсявраннемпостнатальном онтогенезе по причине морфофункциональной незрелостилимфоидных органов и отсутствия прочных связей между ними, ихкомпартментами и субкомпартментами.[22,40,66,71,86,123,147], выбросразличных медиаторов в кровь при стрессе связан с активацией гипоталамогипофизарно-надпочечниковойсистемы[63],причемуровеньфункциональной зрелости последней также весьма динамично меняется наранних стадиях постнатального онтогенеза.Как уже указывалось, глюкокортикоиды оказывают как позитивный, таки негативный эффект на иммунное состояние организма, обусловленноемощным двусторонним действием на лимфопоэз и различные компонентыиммунного ответа.
Продемонстрировано, что ммунодепрессивный эффектглюкокортикоидов связан преимущественно с угнетающим действием на Тлимфоциты, главным образом, Т-хелперы. ГКС вызывают модуляцию генов,которые вовлеченны в примирование врожденного иммунного ответа.Кортикостероиды воздействуют на их транскрипцию и на рецепторы кгормонам у Т-клеток [87,93].Селезенка имеет значительное количество внутриклеточных рецепторовкглюкокортикоидам.Важноймишеньюкортикостероидовслужатдендритные клетки – один из ключевых компонентов врожденного иммунногоответа, через которые стероидные гормоны также оказывают своеиммуносупрессивное действие.
Нарушение созревания дендритных клетокприводит к изменению Т-клеточного иммунного ответа. Роль дендритныхклеток в кортикостероидо-индуцированной иммуносупрессии установленасравнительно недавно. С учетом ключевой роли Toll-подобных рецепторов в76инициировании созревания дендритных клеток изучена экспрессия ТПР 2, 3,4 у дендритных клеток, обработанных кортикостероидами, а также упопуляции дендритных клеток пациентов, получающие большие дозыкортикостероидов. Дифференцировка дендритных клеток в присутствииглюкокортикостероидов затрагивала только небольшую популяцию клеток сярко выраженными отличительными признаками, которые были не способныиндуцировать адекватный иммунный ответ, в то же времявлияниеглюкокортикоидов на процесс созревания дендритных клеток резко понижалопродукцию ими IL-12 p70 и ФНО, а также их способность активировать Тклетки [26,151,172].Становление иммунной системы продолжается длительное время иявляется сложным, многоэтапным процессом.
Для каждого периодахарактерны определенные онтогенетические особенности, в основе которыхлежат геномические, функциональные, структурные, нейрогуморальныеперестройки, детерминированные возрастной стратегией развития организма.Периоды повышенной чувствительности иммунной системы к действию эндои экзогенных повреждающих факторов (критические периоды) определяютпроявление наследственных вариаций силы иммунного ответа. Действиестресса на растущий организм оказывает на него очень сильное воздействие,котороенередко сохраняется на протяжении достаточно длительноговремени взрослой жизни.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
