Диссертация (1140070), страница 24
Текст из файла (страница 24)
корр. +0,50; p<0,02 и +0,53; p<0,02соответственно) RRF, митохондриальным индексом (коэф. корр. +0,50; p<0,04),с площадью, занимаемой маркером наружной мембраны митохондрии (НММ)(коэф. корр. +0,57; p<0,01), а также с площадью митохондриальных комплексовIV и V (коэф. корр. +0,57; p<0,01 и +0,56; p<0,01 соответственно). Полученныенами данные позволяют предположить, что усиление активности HIF-1α прямокоррелирует с митохондриальной пролиферацией: прямая корреляция среднейяркости маркера HIF-1α со средней яркостью (коэф.
корр. +0,35; p<0,05)маркера НММ; прямые корреляции интегральной яркости маркера HIF-1α сплощадью и интегральной яркостью маркера НММ (коэф. корр. +0,53; p<0,03 и+0,52; p<0,03 соответственно), с площадью митохондриальных комплексов IV(коэф. корр. +0,48; p<0,03) и V (коэф. корр. +0,45; p<0,03), а также сколичеством и баллами RRF (коэф. корр.
+0,36; p<0,05 и +0,47; p<0,03соответственно) и митохондриальным индексом (коэф. корр. +0,44; p<0,03).При этом, повышение активности HIF-1α может приводить к активации факторароста эндотелия сосудов (VEGF). Доказано, что VEGF не только индуцируетангиогенез, увеличивая таким образом доставку кислорода тканям, но истимулирует биогенез митохондрий [Wright et al., 2008]. Интересно, что даннаягипотеза подтверждается частой локализацией аномальных субсарколеммальныхмитохондриальных скоплений в соседних мышечных волокнах друг напротивдруга, причем в эндомизии между мышечными волокнами, демонстрирующимисубсарколеммальные скопления, часто находится кровеносный сосуд, вероятнотак же развивающийся под действием VEGF.148При анализе общей группы обследованных пациентов мы установили, чтостабилизация HIF-1α напрямую связана с наличием функционально активнойCOX: прямая корреляция средней яркости маркера HIF-1α со средней яркостью(коэф. корр.
+0,49; p<0,02) митохондриального комплекса IV; прямые корреляцииинтегральной яркости митохондриального комплекса IV с площадью иинтегральной яркостью маркера HIF-1α (коэф. корр. +0,54; p<0,02 и +0,47;p<0,03 соответственно), что подтверждает данные о том, что клетки, необладающиефункциональноактивнымкомплексомIV,нестабилизировать фактор HIF-1α в гипоксических условиях [DirmeierспособныR.etal.,2004]. При этом, стабилизация HIF-1α наблюдалась при усилении функциимитохондриального комплекса V: прямые корреляции интегральной яркостимитохондриального комплекса V с площадью и интегральной яркостью маркераHIF-1α (коэф.
корр. +0,55; p<0,03 и +0,48; p<0,03 соответственно).3.4.5. Маркер регуляторного белка MTHSP70На основании данных, полученных при обследовании общей группыбольных, было обнаружено, что у больных с более тяжелыми формамизаболевания отмечается сниженная активность белка MTHSP70: обратныекорреляции степени тяжести заболевания со средней яркостью маркераMTHSP70 (коэф.
корр. -0,36; p<0,05). При этом, активность последнего прямокоррелирует с показателем мышечной силы пациента: прямая корреляцияпоказателя мышечной силы пациента с интегральной яркостью маркераMTHSP70 (коэф. корр. +0,41; p<0,04). Важно отметить, что при усилениидеструктивных и гипоксических изменений мышечной ткани в общей группе (чтопроявляетсяростомкомпенсаторное,показателейповышениеКФКактивностииЛДГ),белканаблюдается,MTHSP70,вероятноотражающееадаптивное напряжение процессов с участием этого белка: прямые корреляциисредней яркости маркера MTHSP70 с показателями ЛДГ (коэф.
корр. +0,42;p<0,04) и КФК (коэф. корр. +0,40; p<0,05).149При анализе полученных данных в общей группе, было обнаружено, чтосредняя активность белка MTHSP70 достоверно не коррелирует как с базовыми(натощак) показателями лактата, пирувата и коэффициента лактат/пируват, так и сданными параметрами через час после нагрузки глюкозой. Наиболее достоверныекорреляции достигаются спустя три часа после нагрузки глюкозой: вероятно, вответналактат-ацидозиповышениекоэффициенталактат/пируват,увеличивается активность белка MTHSP70: прямые корреляции средней яркостимаркера MTHSP70 с показателями лактата и коэффициента лактат/пируватспустя три часа после нагрузки глюкозой (коэф.
корр. +0,42; p<0,04 и +0,38;p<0,05 соответственно). При этом, снижается соответствующий показательпирувата, что может указывать на усиление его утилизации: обратная корреляциясредней яркости маркера MTHSP70 с показателем пирувата спустя три часапосле нагрузки глюкозой (коэф. корр. -0,40; p<0,05). Кроме того, при подъемепостнагрузочных показателей пирувата, наблюдается повышение реактивностисистемы белка MTHSP70 (прямые корреляции площади, занимаемой маркеромMTHSP70, с показателями пирувата спустя час и три часа после нагрузкиглюкозой (коэф. корр. +0,62; p<0,02 и +0,79; p<0,01 соответственно); прямыекорреляции интегральной яркости маркера MTHSP70, с показателями пируватаспустя час и три часа после нагрузки глюкозой (коэф. корр.
+0,61; p<0,01 и+0,76; p<0,01 соответственно)), по-видимому, оказывающее компенсаторныйэффект и снижающий базовый и постнагрузочный коэффициенты лактат/пируват:обратныекорреляцииинтегральнойяркостимаркераMTHSP70скоэффициентом лактат/пируват натощак, спустя час и три часа час посленагрузки глюкозой (коэф. корр. -0,36;p<0,05; -0,40; p<0,05 и -0,66; p<0,01соответственно).Полученные нами данные позволяют считать, что повышение концентрациимолекул MTHSP70, которую мы с определенной долей допущения позволяем себесчитатьактивизациейэтогобелка,сопровождаеткомпенсаторнуюмитохондриальную пролиферацию: прямые корреляции интегральной яркостимаркера MTHSP70 с количеством (коэф. корр.
+0,37; p<0,05) и баллами (коэф.150корр. +0,45; p<0,05) RRF, а также с митохондриальным индексом (коэф. корр.+0,47;Вp<0,05).митохондриальногорезультатепулаи,последнейсоответственно,увеличиваетсяобщееколичествоплощадьмаркераMTHSP70: прямые корреляции площади, занимаемой маркером MTHSP70, сбаллами RRF (коэф. корр. +0,46; p<0,05), а также с митохондриальныминдексом (коэф. корр. +0,47; p<0,05). При этом, средняя яркость маркераMTHSP70 достоверно не коррелирует с показателями митохондриальнойпролиферации,чтоможетотражатьувеличениемитохондриальнойгетерогенности в ответ на патологическое состояние мышечной ткани ивозникновение новой адаптивной субпопуляции митохондрий.УсилениемитохондриальнойпролиферацииприактивизациибелкаMTHSP70 подтверждается прямыми связями площади и активности маркераMTHSP70 как с параметрами маркера НММ, так и с показателями площадеймитохондриальных комплексов IV и V: прямые корреляции площади, занимаемоймаркером MTHSP70, с площадью маркеров НММ и митохондриальныхкомплексов IV и V (коэф.
корр. +0,67; p<0,01; +0,68; p<0,01 и +0,61; p<0,01соответственно); прямые корреляции интегральной яркости маркера MTHSP70,с площадью маркеров НММ и митохондриальных комплексов IV и V (коэф. корр.+0,56; p<0,02; +0,57; p<0,02 и +0,50; p<0,03 соответственно); прямаякорреляция интегральной яркости маркера MTHSP70 с интегральной яркостьюмаркера НММ (коэф.
корр. +0,60; p<0,01). Однако средняя активность белкаMTHSP70достовернонекоррелируетсданнымипоказателямимитохондриальной пролиферации, что подтверждает высказанный ранее тезис обувеличении митохондриальной гетерогенности.Рост активности и увеличение площади, занимаемой маркером MTHSP70,не оказывает достоверного влияния на среднюю активность митохондриальныхкомплексов IV и V, что вновь подтверждает гипотезу о митохондриальнойгетерогенности.
Тем не менее, в нашем исследовании было показано, что высокиезначения площади, занимаемой маркером MTHSP70, и активности данного белканеобходимы для поддержания адекватного функционирования вышеуказанных151митохондриальных комплексов: прямые корреляции интегральной яркостимитохондриального комплекса IV с площадью (коэф. корр. +0,71; p<0,01),занимаемой маркером MTHSP70, интегральной (коэф. корр. +0,61; p<0,01)яркостьюэтогомаркера;прямыекорреляцииинтегральнойяркостимитохондриального комплекса V с площадью (коэф. корр.
+0,62; p<0,01),занимаемой маркером MTHSP70, а также с интегральной яркостью (коэф. корр.+0,51; p<0,03) этого маркера. По всей вероятности, изменения активностимитохондриальных комплексов IV и V могут являться сигнальным механизмомдля запуска системы компенсаторных реакций, в которой активизация белкаMTHSP70 играет важную роль.Нами было установлено, что при увеличении площади и показателейактивности фактора HIF-1α, который, как известно, стабилизируется в условияхгипоксии, наблюдается усиление активности и рост площади, занимаемой белкомMTHSP70: прямые корреляции площади, занимаемой фактором HIF-1α, сплощадью (коэф.
корр. +0,54; p<0,03), занимаемой маркером MTHSP70, а такжес интегральной (коэф. корр. +0,50; p<0,03) яркостью данного маркера; прямыекорреляции интегральной яркости фактора HIF-1α с площадью (коэф. корр.+0,42; p<0,05), занимаемой маркером MTHSP70, а также с интегральной (коэф.корр. +0,42; p<0,05) яркостью данного маркера. Это подтверждает тезисы обувеличении митохондриальной популяции в период энергетического стресса.Суммируя данные, полученные при анализе общей группы больных, можносказать, что они подтверждают предположение о компенсаторном участии белкаMTHSP70 в относительно неспецифической реакции организма на гипоксиюмышечной ткани при различных миопатиях.
Более точно патогенетическую рольэтогобелкаможноопределить,оцениваяегоиммуногистохимическиехарактеристики в отдельно взятых группах заболеваний, исследованных внастоящей работе. Нам представляется особенно важным при этой оценкесравнить соответствующие показатели у пациентов с митохондриальнымимиопатиямии«немитохондриальными»заболеваниями.Упоследниххарактеристики белка MTHSP70 вероятно не изменены в связи с отсутствием152первичных повреждений митохондрий. При совпадении этих характеристик вгруппахссоответствующуюразличнымиреактивность«немитохондриальными»указанногонеспецифической и имеющей адаптивное значение.протеиназаболеваниями,можносчитать153ЗАКЛЮЧЕНИЕВ настоящее время появляются данные о модификациях митохондрий прицелом ряде нервно-мышечных заболеваний, при этом подобные изменения могутбыть связаны с непосредственной причиной заболевания (как в случаяхмитохондриальных миопатий) [Greaves et.al., 2012; Gorman et.al., 2015], так и бытьвторичным проявлением другого патологического процесса [Campbell et.al.,2011].
Диагностика митохондриальных изменений, основанная на примененииметодаэлектронноймикроскопии,атакжебиохимическогоигистоферментохимического методов определения активности митохондриальныхферментов в мышечной ткани больных, вызывает значительные затруднения всвязи с многообразием проявлений митохондриальных нарушений, мозаичностиих распределения в тканях организма и сложности их методического выявления.Насегодняшнийденьиммуногистохимическийметодисследованиямитохондриальных белков мало используется в диагностике нервно-мышечныхзаболеваний.Темнеменее,методфлуоресцентнойиммуногистохимиипредставляйся крайне перспективной, поскольку, позволяет применять несколькоантител на одном срезе мышечной ткани для определения пространственного иколичественного соотношения между различными белками на одном срезе ткани.Тем более это актуально при изучении экспрессии генов как мтДНК, так ядернойДНК, что особенно важно при митохондриальных заболеваниях, имеющихдвойное генетическое происхождение.Исходя из вышесказанного, целью нашего исследования было выявитьпараметрыморфофункциональногосостояниямитохондрийвскелетнойпоперечнополосатой мышечной ткани при различных наследственных нервномышечных заболеваниях с помощью флуоресцентного иммуногистохимическогоисследованияиоценитьинформативностьметодавкомплекснойморфологической диагностике.Для достижения поставленной цели в исследовании решались следующиезадачи:1541.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
