Диссертация (1140070), страница 19
Текст из файла (страница 19)
Совпадение локализаций указанных маркеров – желтый цвет. Увеличение х400. Выраженныепризнаки дистрофии мышечного волокна. Наблюдаются зоны интенсивной флуоресценции маркераHIF-1α не соответствующие распределению маркера НММ (белая стрелка).Рис.48. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с ПМД Дюшенна. Возраст 9 лет.Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеров НММ (зеленый) и HIF-1α (красный).Увеличение х400. Выраженные признаки дистрофии мышечного волокна. Зоны интенсивнойфлуоресценции маркера HIF-1α, не соответствующие распределению маркера НММ (белые стрелки).121Рис.49.
Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с ПМД Дюшенна. Возраст 9 лет.Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеров НММ (зеленый) и HIF-1α (красный)в проходящем свете (слабая диффузная флуоресценция указанных маркеров удалена; показанораспределение максимумов флуоресценции). Совпадение локализаций указанных маркеров – желтыйцвет.Увеличение х100.
Выраженные признаки дистрофии мышечного волокна. Зоны интенсивнойфлуоресценции маркера HIF-1α не соответствующие распределению маркера НММ (белые стрелки).Обзорный рисунок.Нами было обнаружено, что у пациентов с врожденными мышечнымидистрофиями (ВМД) подобный рост экспрессии маркера HIF-1α вне зонмитохондриальных скоплений отмечается в более раннем возрасте (Рис. 50, 51).Выраженность флуоресценции маркера при этом достигала 2-3 баллов.122Рис.50. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с ВМД.
Возраст 1 год 4 месяца.Увеличение х400. Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеров НММ (зеленый) иHIF-1α (красный) в проходящем свете (слабая диффузная флуоресценция указанных маркеров удалена,показано распределение максимумов флуоресценции). Совпадение локализаций указанных маркеров –желтый цвет. Наблюдаются выраженные зоны тканевой гипоксии (красный), располагающиеся напериферии мышечных пучков.
В части мышечных волокон повышена флуоресценция маркера НММ(белая стрелка). Ядра окрашены флуоресцентным красителем DAPI (синий).123Рис.51. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с ВМД. Возраст 1 год 4 месяца.Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеров НММ (зеленый) и HIF-1α (красный)в проходящем свете (слабая диффузная флуоресценция указанных маркеров удалена; показанораспределение максимумов флуоресценции).
Совпадение локализаций указанных маркеров – желтыйцвет.Увеличениех100.Наблюдаютсявыраженныезонытканевойгипоксии(красный),располагающиеся на периферии мышечных пучков. В части мышечных волокон повышенафлуоресценция маркера НММ (белые стрелки). Ядра окрашены флуоресцентным красителем DAPI(синий). Обзорный рисунок.В отличие от практически идентичной выраженности митохондриальныхмаркеров и маркера HIF-1α в разных группах мышечных дистрофий, экспрессиямаркера MTHSP70 при врожденных (ВМД) и прогрессирующих (ПМД)мышечныхдистрофияххарактеризоваласьзначительнойгетерогенностью(Рис.52): от локальной кластерной флуоресценции этого маркера, выраженностью1-2 балла при ВМД (Рис.53) до его значительного диффузного свечения в 2-3балла при ПМД (Рис. 54).
По нашему мнению, это может объясняться большимикомпенсаторными возможностями мышечной ткани при ПМД, что связано сболее активным функционированием зрелых митохондрий у детей старшеговозраста.124Средняя яркость маркера MTHSP707,006,506,005,505,004,504,00ВМДПМДРис.52. Средняя яркость маркера MTHSP70 в скелетной поперечнополосатой мышечной ткани больныхразличными формами миодистрофий (в ед. яркости).Рис.53. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с ВМД (мерозинопатия).
Возраст 3года. Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеров НММ (зеленый) и MTHSP70(красный). Увеличение х1000. Преимущественная кластерная локализация маркера MTHSP70.125Рис.54. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с ПМД Дюшенна. Возраст 8 лет.Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеров НММ (зеленый) и MTHSP70(красный). Увеличение х1000. Значительная диффузная флуоресценция маркера MTHSP70, наиболеевыраженная в дистрофированном мышечном волокне (белая стрелка).3.3.2.
Обсуждение данных корреляционного анализа исследованныхфлуоресцентных иммуногистохимических маркеров в группе больных смышечными дистрофиями3.3.2.1. Маркер наружной мембраны митохондрий (НММ)При исследовании иммуногистохимического распределения маркера НММв группе больных с мышечными дистрофиями было обнаружено увеличениеколичествамитохондрийпомереростаскелетнойпоперечнополосатоймышечной ткани: прямая корреляция возраста пациента при биопсии сплощадью, занимаемой маркером НММ (коэф.
корр. +0,53; p<0,01). При этом, вмышечной ткани пациентов с мышечными дистрофиями, у которых наблюдалсяболее поздний дебют заболевания, были обнаружены митохондриальныескопления (прямая корреляция возраста дебюта заболевания у пациента сплощадью, занимаемой маркером НММ (коэф. корр. +0,68; p<0,01), что можетсвидетельствовать об их компенсаторной роли.126Митохондриальныйответнанарушениятканевойэнергетикипримышечных дистрофиях сходен с таковым при ВСМ: так, при повышениикоэффициента лактат/пируват натощак, а также при росте постнагрузочныхпоказателей лактата, наблюдалась активизация митохондриальной пролиферации,выражающаяся в увеличении средней яркости маркера НММ, что по всейвероятности является начальной стадией компенсаторного процесса: прямыекорреляции коэффициента лактат/пируват натощак со средней (коэф.
корр.+0,64; p<0,01) и минимальной (коэф. корр. +0,69; p<0,01) яркостью маркераНММ; прямые корреляции показателя лактата спустя час после нагрузкиглюкозой со средней (коэф. корр. +0,80; p<0,001) и минимальной (коэф. корр.+0,89; p<0,001) яркостью маркера НММ; прямые корреляции показателялактата спустя три часа после нагрузки глюкозой с со средней (коэф. корр.+0,98; p<0,001), минимальной (коэф. корр. +0,99; p<0,001) и максимальной (коэф.корр.
+0,88; p<0,001) яркостью маркера НММ.Особенностью данной группы является снижение постнагрузочного лактатацидоза, а также базового и постнагрузочного коэффициента лактат/пируват приповышенииплощадимитохондриальногопула,чтовероятноотражаетследующий этап компенсаторного процесса (обратные корреляции площади,занимаемой маркером НММ, с показателем лактата спустя час после нагрузкиглюкозой (коэф. корр. -0,47; p<0,05), с коэффициентом лактат/пируватнатощак (коэф.
корр. -0,65; p<0,02), через час (коэф. корр. -0,46; p<0,05) и тричаса (коэф. корр. -0,36; p<0,05) после нагрузки глюкозой) и подтверждаетадаптационный характер митохондриальных скоплений при миодистрофиях. Нафункциональную активность митохондрий в подобных скоплениях можетуказывать интенсификация использования ими пирувата (обратная корреляцияпоказателя пирувата через час после нагрузки глюкозой с максимальной (коэф.корр. -0,36; p<0,05) яркостью маркера НММ; обратная корреляция показателяпирувата спустя три часа после нагрузки глюкозой с минимальной (коэф.
корр. 0,39; p<0,05) яркостью маркера НММ). Таким образом, в ответ на дефектытканевой энергетики, активизируется процесс митохондриальной пролиферации,127позволяющий достичь необходимого для адекватной компенсации увеличенияобщего количества функционирующих митохондрий в мышечной ткани пациента.Характер взаимосвязи параметров маркера НММ с такими показателями,как количество и баллы RRF, а также с митохондриальным индексом, могутуказывать на большую точность и специфичность метода флуоресцентнойиммуногистохимии, основанного на применении моноклональных антител кнаружноймитохондриальноймембране,посравнениюсгистоферментохимическим методом определения активности СДГ: прямаякорреляция площади, занимаемой маркером НММ, с количеством (коэф.
корр.+0,91; p<0,001) и баллами (коэф. корр. +0,65; p<0,01) RRF, а также смитохондриальным индексом (коэф. корр. +0,66; p<0,01).3.3.2.2. Маркер митохондриального комплекса IV (COX)В нашем исследовании показано, что основное распределение маркера COXв мышцах у пациентов с миодистрофиями соответствует общему распределениюмитохондрий. Если их количество увеличивается или, что бывает конечно чаще,уменьшается в результате гибели мышечных волокон, то площадь занимаемаяэтим маркером соответственно становится больше или меньше: прямыекорреляции площади, занимаемой маркером митохондриального комплекса IV, сколичеством и баллами RRF (коэф. корр.
+0,91; p<0,001 и +0,65; p<0,01)соответственно), с митохондриальным индексом (коэф. корр. +0,67; p<0,01), атакже с площадью и интегральной яркостью маркера НММ (коэф. корр. +0,99;p<0,0001 и +0,99; p<0,0001 соответственно). У пациентов с отсроченнымдебютом заболевания, наблюдались высокие значения площади, занимаемойданным маркером: прямая корреляция возраста дебюта заболевания у пациентас площадью, занимаемой маркером митохондриального комплекса IV (коэф.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
