Диссертация (1140070), страница 18
Текст из файла (страница 18)
У больных ВСМ группы –ситуация обратная: по мере повышения площади, занимаемой маркером белкаMTHSP70, увеличиваются баллы RRF: прямая корреляция площади, занимаемоймаркером MTHSP70, с баллами RRF (коэф. корр. +0,45; p<0,01). По всейвероятности, это связано с увеличением количества митохондрий, что можетподтверждать данные о компенсаторном характере митохондриальных скопленийпри ВСМ [Влодавец, 2009; Сухоруков, 2011; Виноградская, 2014], в то время какпримитохондриальнойснижены,посколькумиопатии,компенсаторныепреобладаетпатологическирезервызначительноизмененнаяпопуляциямитохондрий. Таким образом, в ответ на патологическое состояние, появляетсяновая адаптивная субпопуляция митохондрий, что приводит к увеличениюгетерогенностимитохондриальногопулаиможетобъяснятьотсутствиекорреляции средней активности белка MTHSP70 с признаками митохондриальнойпролиферации в общей и ВСМ группах.Косвенновышесказанноеподтверждаетсяидругимивыявленнымикорреляциями.
Особого внимания заслуживают связи белка MTHSP70 и маркеранаружной мембраны митохондрии (НММ): на основании полученных данных,можно сделать вывод об определенной автономности функционирования системыбелка MTHSP70 – митохондриальная пролиферация не приводит к повышениюплощади,занимаемоймитохондриальноймаркеромгруппе):MTHSP70обратные(каккорреляцииэтобылоплощади,показановзанимаемоймаркером MTHSP70, со средней яркостью маркера НММ (коэф. корр. -0,46;p<0,05). Интересно, что при врожденных структурных миопатиях, митохондрииподвергаются большей деструкции при снижении активности белка MTHSP70:обратные корреляции тона маркера НММ со средней яркостью маркераMTHSP70 (коэф. корр.
-0,63; p<0,01), в отличие от митохондриальной группы, вкоторой выраженность деструкции зависела от площади данного маркера.Принципиальным отличием ВСМ группы от группы митохондриальныхмиопатий,являетсяналичиеобратныхвзаимосвязеймеждуплощадью,115занимаемой маркером MTHSP70, и активностью митохондриального комплексаIV: обратные корреляции площади, занимаемой митохондриальным комплексомIV, со средней яркостью маркера MTHSP70 (коэф. корр. -0,49; p<0,001). Мыпредлагаем этому следующее объяснение: снижение активности COX, по всейвероятности, является триггерным механизмом, лежащим в основе усилениясинтеза белка MTHSP70. Учитывая важную роль данного белка в сборкемитохондриального комплекса IV [Micketal., 2011; Böttingeret.al., 2013],подобное усиление синтеза MTHSP70 в ответ на недостаточность COX, можетиметь важное компенсаторное значение.
Это предположение подкрепляется иналичием в ВСМ группе выраженной прямой связи между минимальнойактивностью белка MTHSP70 и минимальной активностью митохондриальногокомплекса IV, что не было характерно для митохондриальной группы: обратнаякорреляцияминимальнойяркостимитохондриальногокомплексаIVсминимальной яркостью маркера MTHSP70 (коэф. корр. -0,40; p<0,01). Интересно,что в отличие от митохондриальной группы, в которой белок MTHSP70активизируется при снижении максимальной активности митохондриальногокомплекса IV, в группе ВСМ связи между данными показателями не обнаружено,что может свидетельствовать о более выраженной недостаточности COX в ВСМгруппе, и необходимости продолжительной компенсаторной активации MTHSP70для поддержания средней активности митохондриального комплекса IV науровне, соответствующем потребностям мышечной ткани: прямая корреляциясредней яркости митохондриального комплекса IV со средней яркостью маркераMTHSP70 (коэф.
корр. +0,34; p<0,05).ВВСМпроисходитгруппе,нафонеповышениесреднейувеличенияактивностиплощади,белка MTHSP70занимаемоймаркероммитохондриального комплекса V, в отличие от группы митохондриальныхмиопатий, в которой связь между данными параметрами была отрицательной:прямая корреляция площади, занимаемой митохондриальным комплексом V, сосредней яркостью маркера MTHSP70 (коэф. корр. +0,40; p<0,05). Еще однимотличием от митохондриальной группы, является наличие обратной корреляции116среднейактивностибелкаMTHSP70схарактеромсвечения(«тоном»)флуоресцентного маркера митохондриального комплекса V: обратная корреляциятона митохондриального комплекса V со средней яркостью маркера MTHSP70(коэф. корр. -0,83; p<0,001), что может свидетельствовать о деструкциикомплекса V при снижении активности белка MTHSP70.Интересно,чтовВСМгруппепомересниженияактивностимитохондриальных комплексов IV и V, наблюдается увеличение площади,занимаемой маркером MTHSP70, в то время как при митохондриальныхмиопатиях данные корреляции носили прямой характер: обратные корреляцииплощади,занимаемоймаркеромMTHSP70,сосреднейяркостьюмитохондриальных комплексов IV и V (коэф.
корр. -0,40; p<0,05 и -0,42; p<0,05соответственно). Эти данные подтверждает нашу гипотезу о том, чтоувеличение площади, занимаемой белком MTHSP70, имеет компенсаторныйхарактер.Говоря о взаимосвязи выявленных нами проявлений активности HIF-1α ибелка MTHSP70 следует сказать, что мы определили в ней значительно меньшееколичество взаимных корреляций указанных параметров (обратная корреляцияплощади, занимаемой маркером MTHSP70, со средней яркостью маркера HIF-1α(коэф. корр. -0,43; p<0,05), что может объясняться менее выраженным дефектомэнергообмена по сравнению с митохондриальной миопатией.1173.3.1.
Характеристика иммуногистохимического распределенияизучаемых флуоресцентных маркеров в скелетной поперечнополосатоймышечной ткани больных с мышечными дистрофиямиПримышечныхдистрофияхнаблюдалосьравномерноедиффузноераспределение маркера наружной митохондриальной мембраны (НММ), при этомфлуоресценция этого маркера в крупных мышечных волокнах была интенсивнее,чем в дистрофированных, что, по всей вероятности, имеет компенсаторныйхарактер.
У 6 из 30 больных наблюдались субсарколеммальные скоплениямитохондрий, выраженностью 1-2 балла, локализованные в крупных мышечныхволокнах (Рис.44).Рис.44. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с ПМД Дюшенна. Возраст 7 лет.Иммуногистохимическое распределение флуоресцентного маркера наружной мембраны митохондрии(зеленый) в проходящем свете (слабая диффузная флуоресценция указанных маркеров удалена,распределение максимумов флуоресценции).
Увеличение х400. В крупных мышечных волокнахопределяются умеренно выраженные субсарколеммальные скопления митохондрий (белые стрелки).118А.Б.В.Рис.45. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с ПМД Дюшенна. Возраст 9 лет.Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеров наружной мембраны митохондрии(зеленый, рис.А) и митохондриальных комплексов IV (красный, рис.Б) и V (синий, рис.В). Увеличениех400. Флюоресценция указанных маркеров соответствует друг другу и повышена в крупных мышечныхволокнах.Иммуногистохимическое распределение и интенсивность флуоресценции(1-2 балла) маркеров митохондриальных комплексов IV и V в целомсоответствовали данным показателям маркера НММ (Рис.45), что можетсвидетельствоватьофункциональнойполноценностимитохондрийпри119мышечныхдистрофиях.Однако,важноотметить,чтосредняяяркостьмитохондриального комплекса V в скелетной поперечнополосатой мышечнойткани больных миодистрофиями была ниже, чем в других изученных группах, вто время как средняя яркость митохондриального комплекса IV была достаточновысокой (Рис.5).
По нашему мнению, это может объясняться большейзависимостью активности АТФ-синтазы от целостности плазмолеммы мышечноговолокна,участвующейвподдержаниипротонногоэлектрохимическогоградиента, необходимого для синтеза АТФ.ФлуоресценциямаркераHIF-1αхарактеризоваласьзначительнойвариабельностью. Так, при умеренно выраженных признаках дистрофиинаблюдались зоны интенсивного свечения (1-2 балла) данного маркера,соответствующие зонам интенсивного свечения маркера НММ (Рис.46).А.Б.Рис.46. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с ПМД Беккера. Возраст 6 лет.Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеров HIF-1α (красный, рис.А) и НММ(зеленый, рис.Б) Увеличение х400.
Наблюдаются выраженные зоны интенсивной флуоресценцииуказанных маркеров (белые стрелки). Феномен колокализации.120При более тяжелой миодистрофии отмечалось появление выраженных зонинтенсивной флуоресценции маркера HIF-1α (2-3 балла) не соответствующиераспределению маркера НММ (Рис. 47, 48, 49), что указывает на нарастаниегипоксическихизменениймышечнойтканиприпрогрессированиимиодистрофии.Рис.47. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с ПМД Дюшенна. Возраст 6 лет 10месяцев. Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеров НММ (зеленый) и HIF-1α(красный).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
