Диссертация (1140070), страница 12
Текст из файла (страница 12)
корр. -0,45; p<0,05); обратныекорреляции средней яркости маркера MTHSP70 с площадью (коэф. корр. -0,54;p<0,01), занимаемой маркером HIF-1α, и интервальной яркостью этого маркера(коэф. корр. -0,74; p<0,01). При этом, выражено усиление средней активностимаркера MTHSP70 при повышении аналогичного показателя HIF-1α: прямыекорреляции средней яркости маркера MTHSP70 со средней яркостью маркераHIF-1α (коэф. корр. +0,59; p<0,01).В целом, учитывая отличия показателей корреляций при митохондриальныхзаболеваниях от таковых в общей группе, можно считать, что белок MTHSP70находится в значительно большем функциональном напряжении, объясняющемсяпопытками обеспечения компенсаторных процессов в мышечной ткани.723.2.1.
Характеристика иммуногистохимического распределения изучаемыхфлуоресцентных маркеров в скелетной поперечнолосатой мышечной тканибольных с врожденными структурными миопатиями3.2.1.1. Миопатия центрального стержняУ больных с миопатией центрального стержня в более чем в 60%мышечных волокон на фоне равномерного свечения флуоресцентного маркеранаружной мембраны митохондрии (НММ), в центре мышечного волокнаопределялась округлая (на поперечных срезах) зона интенсивной флуоресценцииуказанного маркера («центральная» зона центрального стержня), которая былаокружена зоной значительного снижения (а в некоторых случаях отсутствия)флуоресцентного свечения маркера НММ, очевидно соответствовавшей такназываемой «промежуточной» зоне центрального стержня, описанной приисследовании ультраструктурных изменений скелетной мышечной ткани упациентов с вышеуказанной патологией [Шаталов, 2013].
У части больных былообнаружено повышение флуоресценции данного маркера в субсарколеммальныхучастках мышечных волокон. Количество подобных субсарколеммальныхскоплений было сравнительно невелико (обнаружены в 30-35% мышечныхволокон), а выраженность свечения составляла 1-2 балла.
(Рис.14).А.73Б.Рис.14.Скелетнаяпоперечнополосатаямышечнаятканьпациентасврождённоймиопатиейцентрального стержня. Возраст 9 лет. Иммуногистохимическое распределение флуоресцентногомаркера наружной мембраны митохондрии (НММ) (зеленый). Увеличение х400. А. В центре мышечныхволокон обнаружена округлая зона интенсивной флуоресценции маркера НММ - «центральная» зонацентрального стержня (красная стрелка), окруженная зоной отсутствия флуоресцентного свеченияданного маркера, - так называемая «промежуточная» зона (белая стрелка). Умеренно выраженныесубсарколеммальные скопления маркера НММ, часть из них располагается оппозиционно друг другу(желтая стрелка).
Б. Этот же участок мышечной ткани в проходящем свете (слабая диффузнаяфлуоресценция указанных маркеров удалена, показано распределение максимумов флуоресценции).ВажнойотсутствиеособенностьюсвечениямаркерацентральностержневоймитохондриальногомиопатиикомплексаявляетсяIVкакв«центральной», так и в «промежуточной» зонах центрального стержня (Рис.15),что может свидетельствовать о функциональной неполноценности митохондрий в«центральной» зоне центрального стержня.Иммуногистохимическоераспределениефлуоресцентногомаркерамитохондриального комплекса V полностью совпадало с распределением маркераНММ и отличалось интенсивностью свечения в «центральной» зоне центральногостержня, а также отсутствием флуоресценции в «промежуточной» зонецентрального стержня, что в совокупности полученных нами данных, указываетна значительное снижение митохондрий в этой зоне мышечного волокна (Рис.16).Втожевремя,всубсарколеммальныхзонахмышечныхволокон74иммуногистохимическое распределение трех вышеуказанных митохондриальныхфлуоресцентных маркеров соответствовало друг другу (Рис.14, 15, 16).А.Б.Рис.15.Скелетнаяпоперечнополосатаямышечнаятканьпациентасврождённоймиопатиейцентрального стержня.
Возраст 9 лет. Иммуногистохимическое распределение флуоресцентногомаркера митохондриального комплекса IV (красный). Увеличение х400. А. В центре мышечных волоконобнаружена округлая зона отсутствия флуоресценции маркера митохондриального комплекса IV (белаястрелка). Центральной зоны интенсивного свечения указанного маркера не обнаружено.
Умеренновыраженные субсарколеммальные скопления указанного маркера (желтая стрелка). Б. Этот же участокмышечной ткани в проходящем свете (слабая диффузная флуоресценция указанного маркера удалена,показано распределение максимумов флуоресценции.).75А.Б.Рис.16.Скелетнаяпоперечнополосатаямышечнаятканьпациентасврождённоймиопатиейцентрального стержня.
Возраст 9 лет. Иммуногистохимическое распределение флуоресцентногомаркера митохондриального комплекса V (синий). Увеличение х400. А. В центре мышечных волоконобнаружена округлая зона интенсивной флуоресценции маркера митохондриального комплекса V –«центральная»зонацентральногостержня(краснаястрелка),окруженнаязонойотсутствияфлуоресцентного свечения данного маркера, - так называемая «промежуточная» зона центральногостержня (белая стрелка).
Умеренно выраженные субсарколеммальные скопления указанного маркера(желтая стрелка). Б. Этот же участок мышечной ткани в проходящем свете, слабая диффузнаяфлуоресценция указанных маркеров удалена, показано распределение максимумов флуоресценции.Как и при митохондриальной миопатии, часть обнаруженных прицентральностержневоймиопатиисубсарколеммальныхмитохондриальныхскоплений располагалась в соседних мышеных волокнах друг напротив друга(Рис.14, 15, 16, желтые стрелки).76Из вышеизложенного следует, что при миопатии центрального стержнянаблюдаются две разные популяции митохондрий: одна из них, расположенная в«центральной»зонецентральногостержня,характеризуетсяотсутствиемфлуоресценции маркера митохондриального комплекса IV при интенсивнойфлуоресценции маркеров НММ и митохондриального комплекса V; другаяпопуляция митохондрий располагается субсарколеммально и характеризуетсяинтенсивной флуоресценцией трех вышеперечисленных маркеров.Важноотметить,чтозначительноеснижениесреднейяркостимитохондриального комплекса IV в скелетной поперечнополосатой мышечнойткани пациентов было характерно для всей группы исследованных врожденныхструктурных миопатий (Рис.17).
При этом, средняя яркость митохондриальногокомплекса V оставалась относительно высокой (Рис.5), а средняя яркость маркераНММ – самой высокой среди всех исследованных групп (Рис.18), что можетсвидетельствовать о выраженной пролиферации митохондрий при врожденныхструктурных миопатиях.Средняя яркость маркера митохондриальногокомплекса IV11,0010,5010,009,509,008,508,007,50Общая группаМышечныедистрофииСтруктурныемиопатииМитохондриальнаямиопатияРис.17. Средняя яркость маркера митохондриального комплекса IV в скелетной поперечнополосатоймышечной ткани больных различными миопатиями (в ед. яркости).77Средняя яркость маркера НММ18,5018,0017,5017,0016,5016,0015,5015,0014,50Общая группаРис.18.СредняяяркостьмаркераМышечныедистрофиинаружнойСтруктурныемиопатиимембраныМитохондриальнаямиопатиямитохондрии(НММ)вскелетнойпоперечнополосатой мышечной ткани больных различными миопатиями (в ед.
яркости).В мышечной ткани пациентов с миопатией «центрального стержня»наблюдался феномен колокализации маркеров НММ и HIF-1α (Рис.19): при этом,ярко выраженное интенсивное флуоресцентное свечение (3 балла) маркера HIF-1αбыло обнаружено преимущественно в «центральной» зоне центрального стержняи соответствовало распределению маркеров НММ и митохондриальногокомплекса V. В крупных субсарколеммальных скоплениях также наблюдалосьсовпадение локализаций маркеров НММ и HIF-1α.78А.Б.В.Рис.19.Скелетнаяпоперечнополосатаямышечнаятканьпациентасврождённоймиопатиейцентрального стержня. Возраст 9 лет.
Увеличение х400. Проходящий свет (слабая диффузнаяфлуоресценция указанных маркеров удалена, показано распределение максимумов флуоресценции). А.Иммуногистохимическое распределение флуоресцентного маркера наружной мембраны митохондрии(зеленый). В центре мышечных волокон обнаружена округлая зона интенсивной флуоресценциимаркера НММ - «центральная» зона центрального стержня (белая стрелка), окруженная зонойотсутствия («промежуточная» зона центрального стержня) флуоресцентного свечения данного маркера.79УмеренновыраженныесубсарколеммальныескоплениямаркераНММ(желтаястрелка).Б.Иммуногистохимическое распределение флуоресцентного маркера HIF-1α (красный) соответствуетраспределению маркера НММ.
В. Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеровНММ (зеленый) и HIF-1α (красный). Совпадение локализаций указанных маркеров – желтый цвет.Наблюдается совпадение локализаций указанных маркеров в «центральной» зоне центрального стержня(белая стрелка), а также в зоне субсарколеммальных скоплений (желтая стрелка). Ядра окрашеныфлуоресцентным красителем DAPI (синий).Флуоресценция маркера белка MTHSP70 в скелетной мышечной тканибольных с центральностержневой миопатией была сравнительно выше, чем убольных с митохондриальными миопатиями (Рис.10, 12, 20).
При этом,интенсивное флуоресцентное свечение (2-3 балла) маркера MTHSP70 былообнаружено в «промежуточной» зоне центрального стержня, а также в единичныхмитохондриях, расположенных под сарколеммой и между миофибриллами,однако полностью отсутствовало в «центральной» зоне центрального стержня(Рис.21).Рис.20.Скелетнаяпоперечнополосатаямышечнаятканьпациентасврождённоймиопатиейцентрального стержня. Возраст 13 лет. Иммуногистохимическое распределение флуоресцентныхмаркеров наружной мембраны митохондрии (зеленый) и MTHSP70 (красный). Увеличение х1000.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
