Диссертация (1140057), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Антиоксидантную активность растительного сырья вычисляли, исходя из отношения тангенсов угла наклона прямых, полученных для соответствующих образцов водных извлечений и тролокса.АОА караганы гривастой, ммоль/г (M±m): водное извлечение изсбора 2010 г.: 35,50±1,366, из сбора 2015 г.: 43,73± 2,486.73 Полученный нами с помощью ВЭЖХ-ДМД-МС профиль флавоноидовкараганыгривастойпредставленвосновномфлавонолгликозидами –кверцитрином, гиперозидом, мирицитрином, авикулярином, ларицитрин-3рамнозидом. Определена антиоксидантная активность водных извлеченийкараганы гривастой из сырья 2010 и 2015 гг.
методом активированной хемилюминесценции АБАП in vitro. Также отмечено, что при стандартных условиях хранения изменения в химическом составе сырья (сравнивались сборы2010 и 2015 гг.) и в антиоксидантной активности носили незначительный характер.74 ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИЛИОФИЛИЗИРОВАННОГО ВОДНОГО ИЗВЛЕЧЕНИЯКАРАГАНЫ ГРИВАСТОЙ4.1. Токсикологические исследованиялиофилизированного водного извлечения караганы гривастой4.1.1. Результаты исследования острой токсичностилиофилизированного водного извлечения караганы гривастойОднократное введение максимальной технически возможной дозы(7000 мг/кг) не вызвало гибели животных.
Таким образом, можно сделатьвывод, что согласно ГОСТ 12.1.007-76 исследуемое вещество соответствует4-му классу опасности «Вещества малоопасные». Класс токсичности вещества в соответствии с модифицированной классификацией Организации экономического содействия и развития (OECD) – VI, вещество относительнобезвредно.
Результаты исследования острой токсичности представлены втабл. 13.Таблица 13Определение острой токсичности лиофилизированноговодного извлечения караганы гривастойДоза(мг/кг)Кол-во выжившихживотныхZDD/Z62610002000300040005000600070006666666603740010000010000010000010000010000010000010000Z – показатель разницы между количеством погибших животных при использовании двух соседних доз; D – показатель разницы между количеством двух соседних доз.75 4.1.2. Результаты исследования острой накожной токсичностилиофилизированного водного извлечения караганы гривастойРезультаты исследования острой накожной токсичности ЛВИК представлены в табл. 14. Однократное нанесение максимальной дозы (7000 мг/кг)не вызвало гибели животных.
Таким образом, можно сделать вывод, что согласно ГОСТ 12.1.007-76 исследуемое вещество соответствует 4-му классуопасности «Вещества малоопасные». Класс токсичности вещества в соответствии с модифицированной классификацией Организации экономическогосодействия и развития (OECD) – VI, т. е. вещество относительно безвредно.Таблица 14Определение острой накожной токсичности лиофилизированноговодного извлечения караганы гривастойДоза626100020003000400050006000 7000(мг/кг)Кол-во66666666выжившихживотныхZ00000000D374100010001000100010001000 1000D/Z00000000Z – показатель разницы между количеством погибших животных при использовании двух соседних доз; D – показатель разницы между количествомдвух соседних доз.4.2.
Исследование дерматотропной активностилиофилизированного водного извлечения караганы гривастой4.2.1. Результаты исследования противовоспалительнойактивности лиофилизированного водного извлечениякараганы гривастой при накожном применениина модели контактного дерматитаВ ходе эксперимента было выявлено, что спустя 4 суток после нанесения однократных аппликаций раствором 2,4-ДНХБ у исследуемых животных76 сформировался локальный очаг воспаления со всеми признаками развитияконтактного дерматита (табл.
15, рис. 10). Это проявилось появлением плотных геморрагических корок.Таблица 15Влияние изучаемых средств на течениемодельного контактного дерматита у крыс, M ± m (n=10)Тяжесть поражения,Толщина кожной складки, ммбаллыПосле нанесения 2,4-динитрохлорбензола в течение 4 сутокКонтрольная4,96±0,18*7,73±0,80*Опытная4,97±0,23*7,68±0,78*Сравнения4,95±0,21*7,71±0,78*Интактная02,5±0,327-е сутки исследованияКонтрольная4,56±0,15*6,81±0,76*,Опытная3,54±0,22* **5,08±0,55*,**Сравнения3,50±0,32*,**5,18±0,34*,**Интактная02,5±0,2912-е сутки исследованияКонтрольная3,91±0,17*5,83±0,81*Опытная2,43±0,33*3,08±0,28*,**Сравнения2,45±0,25*3,1±0,17*,**Интактная02,5±0,31ГруппаРисунок 10.
Состояние кожного покрова через 4 сутокпосле аппликаций 2,4-ДНХБ77 В контрольной группе у всех животных на 7-е сутки эксперимента сохранилась картина развитой патологии. Выраженность воспаления и толщинакожной складки уменьшились незначительно (табл. 15, рис. 11).Рисунок 11. Состояние кожного покрова у животныхконтрольной группы на 7-е сутки экспериментаПоложительная динамика наступила на 12-е сутки исследования: очагконтактного дерматита сохранялся, но выраженность воспаления на пораженном участке кожи и толщина кожной складки существенно уменьшилисьпо сравнению с результатами на 7-е сутки исследования (табл.
15, рис. 12).Рисунок 12. Состояние кожного покрова у животныхконтрольной группы на 12-е сутки эксперимента78 У животных опытной группы и группы сравнения на 7-е сутки эксперимента была отмечена положительная динамика. Толщина кожной складкии выраженность воспаления значительно уменьшились при достоверной разнице с контрольной группой по обоим показателям (табл. 15, рис.
13, 14).Рисунок 13. Состояние кожного покрова у животныхопытной группы на 7-е сутки экспериментаРисунок 14. Состояние кожного покрова у животныхгруппы сравнения на 7-е сутки экспериментаНа 12-е сутки эксперимента у животных опытной группы и группысравнения наблюдалась регенерация пораженного участка кожи, но сохранялись единичные покраснения без геморрагических корок и отека кожи. Вы-79 раженность воспаления и толщина кожной складки достоверно отличались отпоказателей контрольной группы (табл. 15, рис. 15, 16). Несмотря на то, чтооба параметра характеризовали тяжесть контактного дерматита, у животныхопытной группы и группы сравнения достоверное отличие на 7-е и 12-е суткиэксперимента было выше, чем у интактной группы, однако наблюдалось ихдостоверное снижение по сравнению с контрольной группой.
Показателиопытной группы и группы сравнения достоверно не отличались, что говорито сопоставимом действии препаратов.Рисунок 15. Состояние кожного покрова у животныхопытной группы на 12-е сутки экспериментаРисунок 16. Состояние кожного покрова у животныхгруппы сравнения на 12-е сутки эксперимента80 Результаты гематологических исследованийВ начале исследования у всех животных, пораженных контактнымдерматитом, наблюдалась реакция на воспалительный процесс, что проявлялось достоверным увеличением СОЭ в 3 раза, лейкоцитозом и сдвигом лейкоцитарной формулы влево (показатели сегментоядерных нейтрофилов увеличивались на 16%, а лимфоцитов – снижались на 17%). На 7-е сутки у животных опытной группы и группы сравнения все показатели незначительноулучшились.
В последние сутки исследования у животных контрольнойгруппы еще наблюдались явления лейкоцитоза (количество лейкоцитов быловыше, чем в интактной группе, на 37%). Также сохранялся сдвиг лейкоцитарной формулы влево (сегментоядерные нейтрофилы были повышены на10%, а лимфоциты уменьшены на 13%). Все показатели крови опытной игруппы сравнения достоверно не отличались от показателей интактных животных (табл. 16).Таким образом, было установлено, что лиофилизированное водное извлечение караганы гривастой при накожном применении устраняет признакивоспалительного процесса в периферической крови животных с контактнымдерматитом.81 Таблица 16Показатели периферической крови крыс с индуцированным контактным дерматитом, M ± m (n=10)ПоказательСОЭ,мм/чЛейкоциты, 109/лПалочкоядерныенейтрофилы, %Сегментоядерныенейтрофилы, %Базофилы,%Моноциты, %Эозинофилы, %Лимфоциты, %Интактная2,2±0,146,9±0,762,9±0,15Группы животныхПосле индукции КДНа 7-е сутки экспериментаНа 12-е сутки экспериментаКонКонСравнеКонСравнеОпытная СравненияОпытнаяОпытнаятрольнаятрольнаяниятрольнаяния6,14±0,4 6,0±0,32* 6,11±0,23* 5,9±0,44* 4,3±0,23*,* 4,8±0,32*,* 3,2±0,46* 3,0±0,412,9±0,21***412,8±0,7 12,9±0,7 11,7±0,52* 12,1±0,4 10,4±0,13* 10,9±0,21* 9,3±0,68* 7,0±0,85** 6,9±0,72**,**,**3*1*6*2,9+0,193,2±0,153,4±0,11* 3,3±0,14* 3,5±0,16*3,3±0,11* 3,0±0,13*,* 3,0±0,22*,* 3,2±0,12*29,0±1,1* 27,9±0,54*14,4±0,7431,0±0,44*0,5±0,051,2±0,05* 0,8±0,09* 0,9±0,04*,**28,0±0,23**25,0±0,23* 25,4±0,37* 23,0±0,20* 14,9±0,72* 13,0±0,1**,**,***1,3±0,09* 0,7±0,02*,* 0,8±0,09*,* 0,7±0,02,***0,6±0,020,5±0,06***2,1±0,193,2±0,14* 3,2±0,41* 2,8±0,323,3±0,14* 3,1±0,2*3,2±0,11*2,9±0,2*2,4±0,132,3±0,442,2±0,214,1±0,2*3,9±0,45* 3,2±0,12*3,2±0,33*3,4±0,15*2,1±0,1**2,0±0,12**80,9±0,4663,0±0,4* 63,1±0,7* 62,3±0,5*61±0,71*66,1±0,4*,* 67±0,50*76±0,65**70,1±0,7*,*3,5±0,33* 3,4±0,24**65±0,54*,****82 Результаты оценки противовоспалительной активностиПолученные данные показали, что изучаемое водное извлечение и препаратсравнения проявили выраженный противовоспалительный эффект при достоверном отличии от контрольной группы.Показатели индекса ингибирования воспалительной реакции, M ± m (n=10): опытная группа – (61,50 ± 0,24**, #) %, контрольная группа – (26,89 ± 0,17) %, группа сравнения – (58,68 ± 0,45**) %.Результаты гистологических исследованийВ образцах кожи контрольных животных были обнаружены эрозии кожи:некротический детрит с подлежащей грануляционной тканью, выраженный акантоз, паракератоз и гидропическая дистрофия.
В подлежащей дерме местами обнаруживалась интенсивная лимфогистиоцитарная инфильтрация с примесью большого количества нейтрофилов и эозинофилов, полнокровные сосуды с явлениямиэритродиапедеза. В ряде случаев обнаружено острое экссудативное гнойное воспаление в сосочковом слое дермы (рис. 17).У животных, получавших аппликации раствора ЛВИК и препарата сравнения, эрозий обнаружено не было. Был выявлен слабый акантоз и умеренный гиперкератоз. В дерме выявлен лимфоцитарный инфильтрат с небольшой примесьюнейтрофилов и эозинофилов, причем инфильтрат преобладал в поверхностныхслоях, также обнаружено умеренное полнокровие сосудов.
Вышеуказанные изменения в коже соответствуют слабой степени выраженности контактного аллергического дерматита и воспаления (рис. 18).83 3 1 2Рисунок 17. Микропрепарат кожи крысы контрольной группы(увеличение 1:200): 1 – гидропическая дистрофия, 2 – полнокровие сосудов,3 – инфильтрация лимфоидными и гистиоцитарными элементами1Рисунок 18. Микропрепарат кожи крысы опытной группы (увеличение 1:200):1 – слабо выраженная инфильтрация лимфоиднымии гистиоцитарными элементамиРезультаты исследования активности миелопероксидазыВ контрольной группе пероксидазная активность составляла (22,0 ± 3,7*)ед/г и достоверно превышала соответствующий показатель: в опытной группе он84 составлял (13,3 ± 2,4**) ед/г, в группе сравнения – (12,5± 3,6**) ед/г, в интактнойгруппе – (9,5 ± 2,8) ед/г.Основным источником МПО в коже и ткани раны являются полиморфноядерные лейкоциты, участвующие в развитии местной воспалительной реакции вострый период [Михальчик Е. В., Титкова С.
М., 2006]. Снижение миелопероксидазной активности также подтверждается гистологическими исследованиями: вотличие от контрольной группы, у животных опытной группы и группы сравнения в дерме не отмечалось инфильтраций полиморфноядерными лейкоцитами.4.2.2.
Результаты исследования противовоспалительной активностилиофилизированного водного извлечения караганы гривастойпри пероральном применении на модели контактного дерматитаСпустя 4 суток после однократных аппликаций раствором 2,4-ДНХБ у исследуемых животных формировался локальный очаг воспаления со всеми признаками контактного дерматита и с появлением плотных геморрагических корок.Кожа вокруг очага имела отечный и гиперемированный вид (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
