Диссертация (1139975), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Установить частоту носительства генотипов по CYP2C19 ассоциированных свысокой остаточной реактивностью тромбоцитов на фоне примененияклопидогрела в трех этнических группах, проживающих в РеспубликеДагестан (лакцы, аварцы и даргинцы) в сравнении с русскими Московскогорегиона.4. Оценить перспективы использования генотипирования и фенотипированияизоферментов цитохрома Р-450 для прогнозирования антиагрегантногодействия клопидогрелаНаучная новизна1. ВпервыеизученавзаимосвязьактивностиизоферментаСYP3A4,измеренную методом определения концентрации 6-бета-гидроксикортизолаи эндогенного кортизола в утренней моче, с остаточной реактивностьютромбоцитов у больных с острым коронарным синдромом, перенесшихчрескожное коронарное вмешательство.2.
Впервые выявлена частота носительства различных аллельных вариантовгенов CYP2C19 и ABCB1 среди здоровых добровольцев - представителей12трех коренных этнических групп, проживающих в Республике Дагестан:лакцев, аварцев и даргинцев и сравнена с популяцией русских Московскогорегиона.3. Предложены перспективы разработки собственного комплексного алгоритмапрогнозирования антиагрегантного действия блокаторов P2Y12-рецепторовс учетом генетических, демографических, этнических и клиническолабораторных особенностей пациента.Теоретическая и практическая значимость работыПолученные в исследовании результаты оценки влияния приема блокатораP2Y12-рецепторов - клопидогрела на активность изофермента СYP3A4, а так жевзаимосвязи активности данного изофермента и полиморфизма генов CYP2C19и ABCB1 с остаточной реактивностью тромбоцитов у больных с острымкоронарным синдромом, перенесших чрескожное коронарное вмешательство,позволят повысить эффективность антиагрегантной терапии у данной категориибольных, что приведет к снижению частоты повторных тромботическихсобытийпослеинфарктамиокарда.Выявленныеособенностираспространенности клинически значимых полиморфизмов генов, кодирующихбелки биотрансформации и транспортеров лекарственных средств, средиразличных этнических групп Республики Дагестан будут полезны дляоптимизации фармакотерапии социально значимых заболеваний в данномрегионе и профилактики ятрогенных поражений внутренних органов, связанныхс повышенной этнической чувствительностью к лекарственным препаратам.Данные о роли генотипирования по CYP2C19, ABCB1 и фенотипирования поCYP3A4, полученные исследовании, могут быть использованы для оптимизацииантиагрегантнойтерапииинфарктамиокардакардиологическихикардиореанимационных отделениях стационаров, а так же в образовательномпроцессе в рамках программы подготовки специалистов по профилюклиническая фармакология, кардиология, терапия.13Возможные формы внедрения результатов исследования: 1) пособия ипрактические рекомендации для врачей по подбору антиагрегантной терапиейблокаторами P2Y12-рецепторов; 2) методические рекомендации МинздраваРеспублики Дагестан касательно важных этнофармакологических аспектовприменения лекарственных препаратов субстратов СYP2C19 и ABCB1 уразличных коренных этнических групп на территории республики; 3)разработка методического пособия и материалов для Школы пациентов,принимающих антиагреганты.Соответствие паспорту специальностиДиссертационное исследование Мирзаева К.Б.
включающее вопросысовершенствования прогнозирования антиагрегантного действия клопидогрела сцелью повышения эффективности профилактики тромботических осложнений убольных с острым коронарным синдромом, перенесших чрескожное коронарноевмешательствосоответствуетформулеспециальности14.03.06–Фармакология, клиническая фармакология и областям исследований: п. № 4 "Исследованиевзаимодействиймеждуорганизмомилекарственнымисредствами, изучение их фармакодинамики, фармакокинетики и метаболизма.Установление связей между дозами, концентрациями и эффективностьюлекарственных средств. Экстраполяция фармакологических параметров сбиологических моделей на человека", п.
№ 7 - "Исследование фармакокинетикилекарственных средств у здоровых добровольцев и пациентов", и п. № 18 –"Разработкаиоптимизацияметодовфармакотерапииипрофилактикизаболеваний у различных групп пациентов с учетом их индивидуальныхособенностей,включаяисследованиеприверженностифармакотерапии(комплаентности)".Методология и методы диссертационного исследованияТеоретической базой исследования является исследования предыдущихавторов, в которых получены данные о влиянии полиморфных маркеров генов,14кодирующих ферменты биотрансформации (CYP2C19, CYP2B6, CYP1A2,CYP3A4, CYP3A5, CYP2C9) и белки-транспортеры лекарственных средств(ABCB1), а так же индукции\ингибирования изофермента CYP3A4 нафармакодинамику блокатора P2Y12-рецепторов-клопидогрела, применяемогодля профилактики тромботических осложнений у больных с инфарктоммиокарда, ишемическим инсультом или окклюзией периферических артерий.Однако, как было показано в последующих исследованиях, генетическиефакторы не могут в полной мере объяснить все случаи развития резистентностик клопидогрелу, более того, роль генетических факторов в прогнозированиифармакодинамическогоответанаклопидогрелможетзначительноварьироваться в различных этнических группах.
Перечисленные обстоятельствапослужили предпосылкой дальнейшего изучения различных фенотипическихметодов прогнозирования эффективности клопидогрела, а так изученияраспространенности полиморфных маркеров генов, изменения в которыхвлияютнафармакодинамикуифармакокинетикуклопидогрела,средиразличных малых этнических групп.Методологическойгенетическихвариантовбазойисследования(полимеразно-цепнаягеновреакцияиCYP2C19дляявляетсяиспользованиеопределенияаллельныхфармакокинетическихABCB1),(высокоэффективная жидкостная хроматография для определения концентрацийсубстрата/метаболита изофермента CYP3A4), фармакодинамических (измерениеостаточнойреактивноститромбоцитовприкроватнымагрегометром)илабораторно-инструментальных методов для изучения роли генотипирования ифенотипированияизоферментовцитохромаР-450впрогнозированияантиагрегантного действия блокатора P2Y12-рецепторов клопидогрела.ПредметомисследованиябезопасностипримененияпациентовострымсявляетсяблокаторакоронарнымпроблемаP2Y12-рецепторовсиндромом,эффективностииклопидогрелауперенесшихчрескожное15коронарноевмешательство,атакжемежэтническиеособенностипредрасположенности к развитию резистентности к антиагрегантам.Объект исследования: 81 пациент с острым коронарным синдромом,перенесший чрескожное коронарное вмешательство и проходивший лечение вГКБ №1 им.
Н.И. Пирогова в г. Москва; 186 здоровых добровольцев из числапредставителей трех коренных этнических групп, проживающих в РеспубликеДагестан: лакцы, аварцы, даргинцы; 146 здоровых добровольцев из числапредставителей русской этнической группы Московского региона.Методы исследования. Для оценки и описания состояния больного,проверки соблюдения критериев включения в исследование использовалиськлинические,биохимическиеиинструментальныеметоды.Носительствополиморфных маркеров генов CYP2C19 и ABCB1 определялось определяться спомощью приборов CFX384 Touch Real-Time PCR Detection System (Bio-RadLaboratories, Inc., USA) и Applied Biosystems StepOne™ (Life Technologies, USA)методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) в реальном времени (Real-Time PCR).Измерение остаточной реактивности тромбоцитов проводилось с использованиемпортативного прикроватного агрегометра «VerifyNow®» (Accumetrics, USA).Содержание 6-бета-гидроксикортизола и кортизола в утренней моче определялосьметодом хромато-масс-спектрометрического анализа на высокоэффективномжидкостном хроматографе Agilent G1978B Multimode Sourse for 6410 Triple QuadeLC/MS (Agilent Technologies, Inc., USA)Положения, выносимые на защиту1.
Установлена ассоциация полиморфизма гена CYP2C19 в виде носительствааллельного варианта CYP2C19*2 с нарушением антиагрегантного ответа наклопидогрел у пациентов с острым коронарным синдромом, перенесшихчрескожные коронарные вмешательства, что позволяет использоватьфармакогенетическое тестирование по CYP2C19 для прогнозирования16эффективности клопидогрела с целью персонализации антитромбоцитарнойтерапии острого коронарного синдрома.2. Доказано отсутствие ассоциации между носительством генотипов по ABCB1и высокой остаточной реактивностью тромбоцитов у больных с острымкоронарнымсиндромом,вмешательства,чтоперенесшихподтверждаетчрескожныенецелесообразностькоронарныеиспользованияданного генетического маркера для прогнозирования фармакодинамическогоответа на клопидогрел с целью персонализации антиагрегантной терапииострого коронарного синдрома.3.
Доказано отсутствие взаимосвязи между активностью изофермента CYP3A4,оцененную по отношению концентрации 6-бета-гидроксикортизола ккортизолу в моче, и антиагрегантным действием клопидогрела, у пациентовс острым коронарным синдромом, перенесших чрескожные коронарныевмешательства,чтоподтверждаетнецелесообразностьиспользованияданного фенотипического метода для прогнозирования антиагрегантногодействия клопидогрела с целью персонализации антиагрегантной терапииострого коронарного синдрома.4. Выявленыразличиявчастотахгенотипов,ассоциированныхсрезистентностью к клопидогрелу в этнических группах РеспубликиДагестан, что доказывает необходимость изучения межэтнических различийв частоте носительства данных генотипов для решения вопроса оприоритетности внедрения в клиническую практику фармакогенетическоготестирования по CYP2C19 с целью оптимизации фармакотерапии острогокоронарного синдрома в определенных этнических группах.Степень достоверности и апробация результатовДостоверность полученных результатов подтверждается тем, что результатыпроведенного исследования получены на сертифицированном оборудовании,17имеющем соответствующую правилам инструкции по эксплуатации приборовкалибровку: 1) носительство полиморфных маркеров генов CYP2C19 и ABCB1определялось с помощью приборов CFX 384 Touch Real-Time PCR Detection System(Bio-Rad Laboratories, Inc., USA, 2013) и Applied Biosystems StepOne™ (LifeTechnologies, USA, 2010); 2) измерение остаточной реактивности тромбоцитовпроводилосьсиспользованиемпортативногоприкроватногоагрегометра«VerifyNow®» (Accumetrics, USA, 2013); 3) содержание 6-бета-гидроксикортизолаикортизолавутреннеймочеопределялосьметодомхромато-масс-спектрометрического анализа на высокоэффективном жидкостном хроматографеAgilent G1978B Multimode Sourse for 6410 Triple Quade LC/MS (AgilentTechnologies, Inc., USA)).Использованыинформации,подбораисследования.численностьсовременныеразмеровметодикисборагруппобоснованиемсиобработкиисходнойвыбораобъектаГруппы обследованных больных подобраны правильно, ихдостаточнаИспользованныеметодыдлявыработкиисследованияобоснованныхсоответствуютзаключений.целямизадачамдиссертационного исследования.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
