Диссертация (1139911), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Количество ретикулоцитов определяли в мазках,окрашенных суправитально бриллиант крезилблау.39Сывороточныйэритропоэтинопределялипостандартнымпротоколам иммуноферментного анализа с использованием реактивов«Вектор-Бест» (Россия).2.9 Определение содержания CD 34+ клеток периферическойкрови человека методом проточной цитометрииОценкасодержанияCD34+/45+клетокосуществляласьнапроточном цитофлюориметре BD FACS Canto II (BD Biossciences) сиспользованием реактивов CD45+-FITC/CD34+-PE (BD Biossciences) постандартизированному протоколу c определением относительногоколичества клеток.2.10.
Методы статистической обработки результатовСтатистическую обработку полученных данных проводили спомощью лицензионного пакета прикладных программ Statistica 6.0(StatSoft Inc, США). Статистическая значимость различий сравниваемыхпризнаков в группах (каждая экспериментальная группа состояла из 5животных) проводилась с помощью непараметрического U-теста МаннаУитни. В клиническом разделе исследования применялся критерийВилкоксона. Различия считались статистически значимыми при уровнеp<0,05, что соответствует 95% вероятности безошибочного прогноза.[ГланцС.,1998;АвтандиловГ.Г.,2002].40ГЛАВА3.РЕЗУЛЬТАТЫИССЛЕДОВАНИЯИИХОБСУЖДЕНИЕ.3.1Динамикаобластейповреждениямиокардапослелазерного облучения зон локализации костного мозгаСравнительный анализ гистологических препаратов от животных смоделью диффузного повреждения миокарда проводился, начиная с 1сутокпосле окончаниякурса лазерного воздействия (т.к.
крысынаходились в условиях гиподинамии 30 суток, затем в течение 10 сутокпроводилось лазерное воздействие, фактически это были 41 суткиэксперимента).В группе диффузного повреждения миокарда без лазерноговоздействия при анализе гистологических препаратов на этом срокеисследования выявлялись однотипные изменения (Рисунок 2).абРисунок 2.
Диффузное повреждение миокарда без воздействия лазера накостный мозг, 1 сутки, ГОФПК ув. 400 а) миоцитолизис б) глыбчатыйраспад кардиомиоцитов.41Артерии всех калибров имели утолщенные стенки за счетплазматического пропитывания средней оболочки сосуда. В некоторыхартериях среднего и мелкого калибра констатировались набухание ипереориентировка эндотелиоцитов с образованием фигур «частокола».Отмечалось паретическое полнокровие тонкостенных вен и капилляров.В субэндокардиальной зоне наблюдалось малокровие с участкамидистонии и спазма сосудов среднего и мелкого калибра. Вокругнекоторых сосудов локализовались инфильтраты из лимфоцитов спримесью нейтрофильных лейкоцитов.
Во всех полях зрения отмечалисьотек и разволокнение межуточной ткани.При окраске ГОФПК в субэндокардиальных зонах левого и правогожелудочков выявлялись мелкоочаговые диффузно рассеянные участкифуксинофильнойпреимущественнодегенерациикардиомиоцитов.представленыучасткамиИзмененияглыбчатогобылираспадамышечных волокон и миоцитолизиса.
Наряду с этим встречалиськардиомиоцитысусилениемпоперечнойисчерченности(гиперрелаксация). Вблизи от эндокарда очаги сливались между собой иобразовывали распространенные поля фуксинофильной дегенерациикардиомиоцитов.В группе животных с диффузным повреждением миокарда,которые получали лазерное воздействие на красный костный мог насроке 1 сутки мы не отметили достоверной динамики площадиишемических изменений (фуксинофильных изменений по ГОФПК)(Таблица 1).Однако на 10 сутки отмечалось значительное уменьшениеплощади ишемических изменений миокарда.
Это происходило по всейплощади препарата миокарда при воздействии лазера с длиной волны670 нм, и только в области основания желудочков при воздействии длныволны 980 нм (Таблица 1, Рисунок 3).42Таблица 1.ДинамикаотносительнойплощадиишемическихГОФПК) в миокарде с диффузным повреждениемизменений(попосле лазерноговоздействия на красный костный мозг, %.зонаСрокДиффузноеиссле-повреждение повреждение +повреждение +дованиябезлазерноелазерноелазерногооблучениеоблучениевоздействия980 нм670 нм11,2 (8,3;9,2 (7,7; 13,2)9,9 (7,9; 14,3)15,6)р1=0,345р2=0,345верхушка 1 суткиДиффузноеДиффузноер3=0,40110 сутки 10,5 (8,0;14,2)8,1 (6,3; 10,1)8,7 (6,9; 12,1)р1=0,012р2=0,009р3=0,529основание1 сутки14,3 (8,1;11,3 (7,2; 16,2)11,9 (7,9; 16,0)18,1)р1=0,346р2=0,401р3=0,91610 сутки 13,1 (7,6;17,1)10,1 (5,2; 14,1)11,3 (7,4; 16,1)р1=0,008р2=0,008р3=0,525р1 -между группами без лазерного воздействия и с лазернымвоздействием 980 нмр2 -между группами без лазерного воздействия и с лазернымвоздействием 670 нмр3-между группами с лазерным воздействием 980 и 670 нм43абРисунок 3.
а) Диффузное повреждение миокарда без воздействиялазером на костный мозг, 10-е сутки. ГОФПК ув. 200; б) Диффузноеповреждениемиокарда,10-есуткипослеокончаниялазерноговоздействия на красный костный мозг. ГОФПК ув. 200.Площадьколлагеновыхволоконсоединительнойтканивдиффузно поврежденном миокарде, в группах животных, получившихлазерную терапию, в первые сутки не менялась. На 10 сутки послеокончания воздействия происходило ее уменьшение по сравнению сгруппой животных без воздействия лазера в области основания44желудочков сердца. Но между разными лазерами при этом ненаблюдалось отличий (Таблица 2).Таблица 2.Динамикаотносительнойплощадиколлагеновыхволоконсоединительной ткани (по Ван Гизон) в миокарде с диффузнымповреждением после лазерного воздействия на костный мозг, %.ЗонаСрокДиффузноеДиффузноеповреждениеповреждение + повреждение +миокардабез лазерноелазерноелазерногооблучениеоблучениевоздействия980 нм670 нмверхушка 1суткиДиффузное1,05 (1,00; 3,00)1,03 (1,00; 2,75)1,04 (0,9; 2,76)р1=0,673р2=0, 347р3=0,75410сутки1,04 (1,00; 3,00)1,01 (1,00; 2,55)1,02 (0,9; 2,73)р1=0,675р2=0, 459р3=0,753основани1есутки2,61 (1,62; 5,01)1,46 (1,05; 2,93)1,68 (1,04; 2,78)р1=0,173р2=0,347р3=0,46310сутки2,51 (1,04; 4,01)1,35 (1,02; 2,62)1,54 (1,04; 2,30)р1=0,007р2=0,023р3=0,307р1 -между группами без лазерного воздействия и с лазернымвоздействием 980 нмр2 -между группами без лазерного воздействия и с лазернымвоздействием 670 нмр3- между группами с лазерным воздействием 980 и 670 нм45Диаметр локального повреждения миокарда после окончания курсалазерноговоздействияначиналуменьшатьсяспервыхсутокнаблюдения, на 10 сутки также имелись достоверные отличия отконтроля.
Разницы между воздействием двух лазеров не отмечалось(Таблица 3).Таблица 3Динамика диаметра (мм) локального повреждения миокарда послелазерного воздействия на костный мозг.1ЛокальноеЛокальноеЛокальноеповреждение безповреждениеповреждениелазерного+лазерное+лазерноевоздействияоблучение 980 нмоблучение 670 нм3,1 (2,6; 3,9)2,6 (2,2; 3,0)2,7 (2,3; 3,4)р1=0,008р2=0,008суткир3=0,4103,0 (2,3; 3,8)суток2,2 (2,0; 2,6)2,3 (2,1; 3,0)р1=0,013р2=0,02р3=0,759р1 -между группами без лазерного воздействия и с лазернымвоздействием 980 нмр2 -между группами без лазерного воздействия и с лазернымвоздействием 670 нмр3-между группами с лазерным воздействием 980 и 670 нмОтносительной площадь коллагеновых волокон соединительной ткани(по Ван Гизон) в миокарде с локальным повреждением после лазерноговоздействия на костный мозг на первые сутки была достоверно выше,чем в группе сравнения, на 10 сутки разница между группами исчезала.Можно предположить, что проявлялась тенденция к замедлениюколлагенообразования в группе с лазерным воздействием на красныйкостный мозг (Таблица 4).46Таблица 4.Динамикаотносительнойплощадиколлагеновыхволоконсоединительной ткани (по Ван Гизон) в миокарде с локальнымповреждением после лазерного воздействия на костный мозг, %.ЗонаСрокпери-1фока-суткильнаяЛокальноеЛокальноеЛокальноеповреждение без повреждениеповреждениелазерного+лазерное+лазерноевоздействияоблучениеоблучение980 нм670 нм8,33 (6,22; 10,12)12,15 (11,06;13,22 (12,81;15,85)16,85)р1=0,009р2=0,09р3=0,34710сутки17,89 (12,6; 25,1)14,72 (10,11;15,99 (11,17;19,37)21,42)р1=0,347р2=0,347р3=0,347очаг1поврежде суткиния16,12(12,34;17,47)10сутки8,14 (6,15; 9,25) 7,25 (5,78;10,11)р1=0,009р2=0,009р3=0,91722,65 (14,89;21,92 (15,71;26,62 (18,31;23,65)25,93)28,93)р1=0,147р2=0,147р3=0,754р1 -между группами без лазерного воздействия и с лазернымвоздействием 980 нмр2 -между группами без лазерного воздействия и с лазернымвоздействием 670 нмр3-между группами с лазерным воздействием 980 и 670 нм47Таким образом, воздействие лазерного излучения на красныйкостный мозг приводило к редукции зоны повреждения миокарда какпри диффузном характере ишемии, так и в случае локального очага.
Приэтом динамика зон повреждения миокарда при облучении лазерами сдлиной волны 980 нм и 670 нм достоверно не отличалась. Висследованиях, проведенных ранее по изучению непосредственноговлияния лазерного воздействия на костный мозг, было показано, чтоинфракрасное воздействие вызывает боле выраженные изменения вреакции сосудов и тучных клеток, чем лазер излучающий, в красномспектре [Кравченко Т.Г., Головнева Е.С., 2008]. Соответственно, можнобыло ожидать более интенсивной репарации поврежденного миокардапри использовании инфракрасного излучения для воздействия накогстный мозг, но по нашим данным этого не произошло.Наши результаты по влиянию лазерного облучения костного мозганаусилениерепарациимиокардаслокальнымповреждениемподтверждаются данными, полученными группой израильских ученыхпод руководством U.
Oron, которая работала с волной излучения 804 нм.Эти авторы отметили значительное уменьшение площади ишемическихизмений миокарда крыс после воздействия на костный мозг лазеромчерез 20 минут и 4 часа после формирования экспериментальногоинфаркта. В группе леченных животных достоверно увеличивалоськоличествопролиферирующихклеток(PCNA)награницеишемизированного и нормального миокарда [Oron U., 2011; Tuby H.,Yaakobi T.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
