Диссертация (1139911), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Фактор роста сосудистого эндотелия является более85специфичным по своему действию цитокином, чем другие факторыроста. Несмотря на широкий круг клеток, в том числе стволовые клеткии мастоциты, которые могут его синтезировать, активация митотическихвозможностей под действием VEGF затрагивает только эндотелий игладкие мышцы сосудов [Theoharides T.C. et.al., 2010; Ekström K. et.al.,2012].Важным свойством VEGF является повышение сосудистойпроницаемости, присутствие VEGF провоцирует выход составляющихплазмы во внеклеточный матрикс и активацию процессов свертывания ифибринолиза,формирующих(плазминзависимыйпротеолиз)необходимуюдляферментнуюнеоангиогенезавбазузонахповрежденных тканей.
Также известно, что VEGF воздействует насинтетическиевозможностикакэндотелиальных,такигладкомышечных сосудистых клеток, в том числе по производству имиактиваторов плазминогена и матриксных металлопротеиназ в культуре[Jimenez-Andrade G.Y. et.al., 2013; Kim S et.al., 2013]. VEGFпредотвращает апоптоз различных клеток, особенно эндотелиальных,противодействует про–апоптотическим эффектамTNF-α, которыйвыделяется в зонах повреждения тканей [Kim S et.al., 2013].863.6.Динамикаактивностиматриксныхметаллопротеиназвмиокарде после лазерного воздействия на красный костный мозг.Активность желатиназ в локально поврежденном миокардеизначально была закономерно выше, чем в интактном (Таблица 29).
Зонаострого воспаления с первых минут является местом притяжениянейтрофилов и макрофагов, выделяющих достаточное количествоТаблица 29Активность желатиназ в миокарде через 1 сутки после лазерноговоздействия на красный костный мозг, усл.ед.Без лазерногоЛазерноеЛазерноевоздействияоблучениеоблучение980 нм670 нминтактный145,6149,4148,5миокард(136,8;152,4)(137,6;159,9)(139,9;163,4)р1=0,464р2=0,401р3=0,601диффузное165,9189,2185,6стрессовое(149,5;178,3)(184,2;193,1)(180,1;193,1)р1=0,009р2=0,009р3=0,528р4=0,009повреждение р4=0,117р4=0,009локальное172,9189,4190,5лазерное(167,1;182,3)(185,6;192,1)(185,9;199,6)р1=0,009р2=0,009р3=0,529р4=0,009повреждение р4=0,009р4=0,009р1-между группами без лазерного воздействия и с лазерным воздействием 980 нмр2-между группами без лазерного воздействия и с лазерным воздействием 670 нмр3-между группами с лазерным воздействием 980 и 670 нмр4-между группой интактного контроля и группами с повреждением миокарда87ферментов.
Молодые формы фибробластов и разнообразные клеткииммунной системы также вносят свой вклад в общую ферментнуюактивностьочагаповреждения.Желатинолитическиеферментынеобходимы как для перестройки структур поврежденной ткани, так идля миграции клеток соединительной ткани и сосудистых стенок принеоангиогенезе [Головнева Е.С., 2003; Tyagy S.
2001].Лазерное облучение красного костного мозга приводило кповышению желатинолитической активности в поврежденном миокарде,отмечаемой на 1 сутки и 10 сутки (Таблица 29, 30).Активность протеаз примерно одинаково изменялась как придиффузном, так и при локальном повреждении. Отличий междувоздействием разных лазеров не обнаруживалось. На всех срокахисследования ферментная активность в поырежденном миокарде послелазерного воздействия на красный костный мозг была выше чем винтактном миокарде без лазерного воздействия.
Лазерное воздействиена красный костный мозг у животных с интактным миокардом невызывало повышения ферментной активности.Видимо после лазерного воздействия на красный костный мозг вповрежденном миокарде создавалась достаточная концентрация клетокисточников протеолитических ферментов.По литературным данным известно, что клетки сосудистогоэндотелия и сосудистые гладкомышечные клетки в обычных условияхмогут производить ММП 2 (желатиназы А), а при внешней стимуляциицитокинами- (желатиназы В). Тучные клетки в своих гранулах содержатпроэнзимы ММП 2 и ММП 9. Проколлагеназы, как известно, необладают литической активностью, однако показано, что химаза сериноваяпротеаза,активироватьэтисодержащаясяферментыпривмастоцитахсовместном-способнавыделениивовнеклеточный матрикс.
Таким образом, процесс дегрануляции тучныхклеток оказывает прямое регуляторное воздействие на локальный88протеолиз. Синтез мРНК металлопротеиназ контролируется факторомроста тучных клеток, синтезируемым фибробластами и стволовымиклетками [Galli S.J. , 2000; Frossi B. et.al., 2004].Таблица 30Динамика активности желатиназ в миокарде.
10 суток после лазерноговоздействия на красный костный мозг, усл.ед.Без лазерногоЛазерноеЛазерноевоздействияоблучениеоблучение980 нм670 нминтактный145,6139,1142,6миокард(136,8;152,4)(132,4;157,1)(134,7;161,2)р1=0,916р2=0,916р3=0,347диффузное155,8185,1190,2стрессовое(145,7;181,3)(183,3;198,2)(189,2;196,2)р1=0,009р2=0,009р3=0,916р4=0,009повреждение р4=0,117р4=0,009локальное169,9184,1185,9лазерное(154,3;179,9)(180,7;192,3)(180,3;190,4)р1=0,028р2=0,028р3=0,600р4=0,009повреждение р4=0,012р4=0,009р1-между группами без лазерного воздействия и с лазерным воздействием 980 нмр2-между группами без лазерного воздействия и с лазерным воздействием 670 нмр3-между группами с лазерным воздействием 980 и 670 нмр4-между группой интактного контроля и группами с повреждением миокардаСтимулированные макрофаги синтезируют интерстициальнуюколлагеназу,стромелизиниММП9,фибробластыспособнысинтезировать ММП 2 и ММП 9.
Важнейшими активаторами латентных89форм ферментов могут являться активные формы кислорода и протеазысистемы плазмина, содержание которого увеличивается в поврежденныхтканях [Головнева Е.С., 2003; Lofredo S. et.al., 2014].Стволовые клетки также производят протеазы системы плазмина иММП 2 и 9, что позволяет им успешно преобразовывать окружающийматрикс [Hatzistergos K.E. et.al., 2010, Lofredo S.
et.al., 2014].Протеолиз различных субстратов сопровождает сосудистый рост ипреобразование тканей при репарации. Факторы роста работаютсинергично с протеолитическими ферментами, так как с одной стороныпроисходит ферментная активация их депонированных форм, а с другой- факторы роста являются стимуляторами синтеза ферментов и ихрецепторов. В нашей работе мы выявили усиление ферментнойактивности и повышения экспрессии фактора роста сосудистогоэндотелия на одних и тех же сроках, причем только в поврежденныхтканях. В интактном миокарде не было отмечено таких реакций, видимоэто объясняется отсутствием в неповрежденной ткани стимулов,вызывающих хоуминг стволовых, тучных клеток и других пришлыхклеток –источников факторв роста и ферментов.903.7.ДинамикапериферическойсодержаниякровиCD34+/45+больныхклетокинфарктомвмиокардапробахпослелазерного облучения зон локализации красного костного мозга.Исследования (2007-2008гг) по изучению миграции CD34+ клетокиз красного костного мозга, проводились на пробах периферическойкрови пациентов с ишемической болезнью сердца, получавшихлазерную терапию с длиной волны 980 нм на области крестца,позвоночника и подвздошных костей.
Через 1 час после воздействияпроисходило увеличение содержания этих клеток в крови не менее чем в2-3 раза (Таблица 31.). У 50% больных наблюдалось увеличениесодержания CD34+ клеток до 10 раз. Например, у больной Ш. довоздействия содержание CD34+ клеток было 0,03%, после воздействия0,34%. Спустя 10 суток после окончания лазерной терапии (больныеполучали 7 сеансов ежедневно) статистически достоверных отличийсодержания CD34+ клеток в периверической крови от исходныхпоказателей не отмечалось. Однако у некоторых больных, с исходнонизким содержанием CD34+ клеток (до 0,05%) этот показатель оставалсязначительно выше исходного значения.Ранеевработах,выполненныхнабазеЧелябинскогогосударственного института лазерной хирургии, было показано влияниелазерного облучения позвоночника, крестца и подвздошных костей наповышение содержаниязаболеваниямиCD 34+ клеток в крови пациентов спериферическихсосудовикритическойишемииконечностей (Головнева Е.С., 2007; Гужина А.О., 2008).
На фонесистемной среднеинтенсивной лазерной терапии происходило 3-4кратное увеличение содержания CD 34+ клеток, у больных улучшалосьсамочувствие, увеличивалась дистанция безболевой ходьбы, исчезалиночные боли и боли в конечностях в покое. Эти данные послужилиосновой для разработки способа лечения сосудистых заболеваний иполучения патента РФ на способ стимуляции выхода стволовых клеток в91периферическую кровь.
В отличии от этого исследования, где усилениемиграции стволовых клеток под действием лазера наблюдалось прихроническом заболевании, представляемые в нашей работе результатыполучены у пациентов с острым заболеванием. Это доказывает широкиевозможности лазерной стимуляции выхода стволовых клеток изкостного мозга, даже в ситуациях, когда есть острое повреждение ткани,являющееся естественным триггером миграции стволовых клеток.Таблица 31.Динамика содержания CD34+/45+ клеток в периферической крови послелазерного облучения зон локализации костного мозга.N, количествоСодержаниеР, в сравнении спроб кровиCD34+ клеток,контролем%(критерийВилкоксона)Контроль (долазерного150,09 (0,03;0,12)150,18 (0,09;0,35)воздействия)Через 1 часпосле лазерногоР=0,009воздействияЧерез 10 сутокпослеокончаниялазерной70,15 (0,06;0,19)Р=0,079терапииБазой получаемого эффекта является комплекс изменений вкостном мозге под действием лазера.
Известно, что перестраиваетсямикроокружение стволовых клеток, благодаря активации дегрануляциитучных клеток красного костного мозга происходит изменение92локальной микроциркуляции с увеличением площади сосудистого руслаипроницаемостисосудистыхстенок,повышениеместнойпротеолитической активности [Кравченко Т.Г., Головнева Е.С., 2008].Видимо при этом меняются адгезивные взаимодействия клеток костногомозга, сосудистых стенок и матрикса, что существенно облегчаетмиграцию клеток.Хотя полученные нами результаты мы связываем, прежде всего, сусилением миграции стволовых клеток CD34+/45+ из костного мозга впериферическую кровь при лазерном воздействии, но повышениемиграции из костного мозга предположительно должно усиливатьпролиферацию оставшихся клеток.Существуют данные об усилении пролиферации под влияниемлазерного облучения клеток костного мозга в культуре.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
