Диссертация (1139891), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Полученные результатыв целом не противоречат другим исследованиям. В большинстве работ потрансплантации «классических» ММСК после резекции 90% печени неотмечалосьстатистическизначимыхизмененийвлетальностиипродолжительности жизни [73; 85]. Статистически значимые отличия вданных показателях наблюдали припредварительной «подготовки» данныхклеток(преддифференцировкавгепатоцито-подобныеклетки,инкапсулирование, предварительная гипоксия клеток) [72; 85; 106; 178].Таким образом, предварительно не «подготовленные» ММСК невлияют на летальность и продолжительность жизни животного послерезекции 90% печени.Влияние ММСК на массу печени отмечали и другие авторы, однакоони использовали другой показатель (соотношение массы печени к весуживотного),модельинкапсулированных(90%ММСКврезекциипеченисселезенку),статистическивведениемзначимыеизменения выявили на 2 сутки после операции, в то время как прииспользовании «свободных» ММСК статистически значимых измененийне было выявлено (оценивали только 2 и 14 сутки) [85].Улучшение синтетической функции печени после трансплантацииММСК также было отмечено в зарубежных публикациях [179].
Однако,при использовании других моделей им так же удалось выявитьстатистически значимые различия и при анализе уровня общего65билирубина [83]. Работ оценивающих влияние ММСК на коагулограммупри печеночной недостаточности крайне мало, в основном это единичныеклинические случаи применения ММСК, однако и в данных работахотмечено улучшение свертывающей системы крови [72].При анализе полученных данных, затруднительно ответить навопрос, почему в экспериментальной группе с 1 по 4 сутки отмеченоулучшение показателей МНО и АЧТВ (1 сутки), а более высокий уровеньальбумина и общего белка в той же группе выявили на 4 и 14 сутки послерезекции печени.
Если АЧТВ и МНО отражают синтетическую функцию(все факторы свертывания, за исключением фактора VIII синтезируются впечени), то почему синтез альбумина и общего белка происходит на болеепоздние сроки после операции. Возможно, имеются другие механизмывлияния ММСК на свертывающую систему крови.Из полученных данных следует, что трансплантация аллогенныхММСК КМ способствует более раннему восстановлению синтетическойфункции печени.Влияние ММСК на активность печеночных ферментов в целом непротиворечат данным иностранных авторов.
Однако, стоит отметить, чтозарубежные коллеги оценивали преимущественно АЛТ и АСТ, отметивстатистически значимые различия в исследуемых группах. Полученныеразличия можно объяснить использованием другой экспериментальноймодели острой печеночной недостаточности (фармакологической иливыполнение 2 этапной операции) и сроками вывода из эксперимента [83;148; 179].
Кроме того в литературе имеются случаи, когда даже при однойхимической модели, в одни и те же сроки после операции при оценкеодного и того же клеточного продукта и показателя (АЛТ и АСТ)отмечены статистически значимые различия на разные сроки. Однако, как66мы уже говорили ранее, во всех исследованиях отмечали улучшенияпоказателей активности печеночных ферментов [148; 179].Таким образом, трансплантация ММСК КМ уменьшает активностьЩФ, но не влияет на АЛТ и АСТ.Учтывая полученные данные, можно сделать вывод, что системноевведение аллогенных ММСК КМ после обширной резекции печениспособствуетраннемувосстановлениюоставшейся паренхимы печени.функциипечениимассы67Глава 5. Влияние трансплантации аллогенных ММСК КМ напролиферативную, митотическую активность гепатоцитов иморфометрические критерии регенерации паренхимы печени послеобширной резекции печени в эксперименте.Влияния аллогенных ММСК КМ после ОРП на морфологическиеизменения в печени оценены на модели с 70% резекцией печени на 1, 2, 4,14 сутки после операции.5.1 Определение количества митозовПик митозов приходился на 2 сутки, как в контрольной, так и вэкспериментальной группе, однако статистической достоверности присравнении двух групп не было выявлено (рисунок 15, 20 - 24).Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК КМ не влияет наколичество митозов после 70% резекции печени.Рис.
15. Количество митозов на разные сроки после операции сприменениемаллогенныхММСККМ(мезенхимальные68мультипотентныестромальныеклеткикостногомозга)ибезприменения ММСК КМv - статистически значимый результат между 0 сутками ивыбранными сутками в одной группе (P<0,05).5.2 Определение количества PCNA позитивных клетокКоличество PCNA позитивных клеток увеличивалось с 1 суток,достигая своего пика на 2 сутки, нормализовалось к 14 суткам (рисунок21). При анализе 2 групп выявили статистически достоверные различия на1 и 2 сутки после операции (рисунок 16, 25 - 29).Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК КМ увеличиваетколичество пролиферирующих гепатоцитов после 70% резекции печени.Рис.
16. Количество позитивных PCNA на разные сроки послеоперации с применением аллогенных ММСК КМ (мезенхимальныемультипотентныестромальныеклеткикостногоприменения ММСК КМ* - статистически значимый результат (P<0,05).мозга)ибез69v - статистически значимый результат между 0 сутками ивыбранными сутками в одной группе (P<0,05).5.3 Определение диаметра ядра гепатоцитовНаибольший диаметр ядра отмечен на 1 сутки в 2 группах.Повышение диаметра ядра отмечено на всех сроках после операции.Однако при сравнении двух групп, статистической достоверности не быловыявлено (рисунок 17, 20 - 24).Рис.
17. Диаметр ядра на разные сроки после операции сприменениемаллогенныхмультипотентныестромальныеММСКклеткиКМ(мезенхимальныекостногомозга)ибезприменения ММСК КМv - статистически значимый результат между 0 сутками ивыбранными сутками в одной группе (P<0,05).Таким образом, трансплантация ММСК не влияет на диаметр ядрагепатоцитов после 70% резекции печени.705.4 Определение площади гепатоцитовНаибольшая площадь гепатоцитов отмечена на 1 и 14 сутки в двухгруппах.Статистическиеразличиямеждуконтрольнойиэкспериментальной группой не отмечены на всех сроках после операции(рисунок 18, 20 - 24)Рис. 18.
Площадь гепатоцита на разные сроки после операции сприменением аллогенных ММСК КМ (мезенхимальные мультипотентныестромальные клетки костного мозга) и без применения ММСК КМ.v - статистически значимый результат между 0 сутками ивыбранными сутками в одной группе (P<0,05).Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК КМ не влияет наплощадь гепатоцитов после 70% резекции печени.5.5 Определение размера печеночных долекРазмеры печеночной дольки были больше нормы на 1,2,4 суткипосле операции.Наибольший размер печеночных долек отмечен на 4 суткипосле операции в 2 группах, с последующим восстановлением их размеров71к 14 суткам (табл.7, рисунок 19, 20 - 24).
Статистически значимыхразличий при анализе 2 групп не было выявлено на всех сроках послеоперации.Таблица 7Оценка площади долькиОценкаСутки0Площадь дольки(%)*Контрольная группаПроцентили (25 % Медиана75 %)10060,13 - 151,86Экспериментальная группаПроцентили (25 % Медиана75 %)10060,13 - 151,86Р-1121,5079,05 – 159,77110,3565,40 – 253,070,802177,30101,06 – 322,70173,02107,95 – 245,440,664221,12129,11 – 430,14223,07131,32 – 489,790,500,5014119,7980,44 – 239,82131,79* % от площади дольки нормальной печени.58,76 – 225,85Рис. 19. Площадь печеночной дольки на разные сроки послеоперации с применением аллогенных ММСК КМ (мезенхимальныемультипотентныестромальныеприменения ММСК КМклеткикостногомозга)ибез72v - статистически значимый результат между 0 сутками ивыбранными сутками в одной группе (P<0,05).Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК не влияет наплощадь печеночной дольки после 70% резекции печени.Рис.
20. Срез печени здоровой крысы, окраска гематоксилиноми эозином х 400Рис. 21. Срез печени крысы на 1 сутки после резекции 70%печени, окраска гематоксилином и эозином х400. А - без примененияаллогенных ММСК КМ. Б – с применением аллогенных ММСК КМ73Рис. 22. Срез печени крысы на 2 сутки после резекции 70%печени, окраска гематоксилином и эозином х 400. А - без примененияаллогенных ММСК КМ. Б – с применением аллогенных ММСК КМРис. 23.
Срез печени крысы на 4 сутки после резекции 70% печени,окраска гематоксилином и эозином х 400. А - без примененияаллогенных ММСК КМ. Б – с применением аллогенных ММСК КМ74Рис. 24. Срез печени крысы на 14 сутки после резекции 70%печени, окраска гематоксилином и эозином х 400. А - без примененияаллогенных ММСК КМ. Б – с применением аллогенных ММСК КМРис. 25. Срез печени здоровой крысы после резекции 70%печени, окраска антителами к PCNA х 40075Рис. 26.
Срез печени крысы на 1 сутки после резекции 70%печени, окраска антителами к PCNA х 400. А - без примененияаллогенных ММСК КМ. Б – с применением аллогенных ММСК КМРис. 27. Срез печени крысы на 2 сутки после резекции 70%печени, окраска антителами к PCNA х 400. А - без примененияаллогенных ММСК КМ. Б – с применением аллогенных ММСК КМ76Рис. 28. Срез печени крысы на 4 сутки после резекции 70%печени, окраска антителами к PCNA х 400. А - без примененияаллогенных ММСК КМ. Б – с применением аллогенных ММСК КМРис.
29. Срез печени крысы на 14 сутки после резекции 70%печени, окраска антителами к PCNA х 400. А - без примененияаллогенных ММСК КМ. Б – с применением аллогенных ММСК КМ775.6 ОбсуждениеММСК могут влиять на восстановление печени 3 основными путями.1замена–поврежденныхинедостающихклетокпутемтрансдифференцировки в гепатоциты и/или слияния с гепатоцитами. 2 синтез ростовых факторов и цитокинов.
3 – прямое и опосредованноевоздействие на Т и В лимфоциты, что уменьшает степень активностивоспалительного ответа в поврежденной печени [84].Сложно сказать, в какой мере конкретный механизм действияММСКвлияетнаполученныйрезультат.Данные,касающиесявыживаемости ММСК, после их трансплантации, разнятся и зависят отпути введения клеток, экспериментальной модели и используемого методамаркировки клеток [31]. При использовании аналогичной нашей модели(резекция 70% печени и внутривенное введение ММСК крысам) меченыеММСК обнаруживали в печени на 3 сутки после операции, они составляли8 % от всех клеток печени [15].Прианализеморфометрическихпоказателейневыявленостатистически значимых отличий в 2 группах (группы 2,3 на 3 этапеисследования) при определении количества числа митозов, диаметра ядра,площади гепатоцитов и печеночных долек, но выявлены статистическиеотличия при анализе количества PCNAпозитивных гепатоцитов (рисунок15-29).Этот факт наводит на мысль, что аллогенные ММСК КМпосредством синтеза ростовых фаторов и цитокинов способствуютпролиферации гепатоцитов, что подтверждается при анализе количестваPCNA - позитивных клеток.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
