Диссертация (1139891), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Заслуживают внимания 2 этапные модели, при которыхпосле резекции 70% печени, выполняется повторная резекция печени на 7сутки после операции [83].Удаление печени в объеме 85% и болеесопровождается высокой летальностью [178]. Так при резекции 90%печени у крыс, без лечения все крысы умирают в течение 48 часов от ОПНи гипогликемии [94]. Модель с резекцией 90% печени у крыс считаетсяуспешной, так как модель воспроизводима, сопровождается развитиемОПН и при использовании современных подходов лечения в экспериментеможно добиться 92.6% выживаемости [85]. В частности, именно даннаямодель примененав работах для оценки эффективности лечения ОПНразличными клеточными продуктами [85; 94].
Однако, при обширныхрезекцияхвыживаемость зависит не только от исследуемого препарата, ноиот применяемого наркоза, лечения гипогликемии [73; 178].Модели с полной или частичной деваскуляризацией печени и модели,сочетающиерезекциюдеваскуляризациипеченипечениидеваскуляризацию.При(формированиепортокавальногополнойанастомоза«конец в бок» в сочетании с лигированием печеночной артерии)продолжительность жизни животных составляла 10 -19 ч(в зависимости отвида животного)[118].В связи с чем, в настоящее время используютсямоделисчастичнойдеваскуляризацией(формированиепортокавальногоанастомоза по типу «конец в бок» с последующимвременным пережатием печеночной артерии), резекцией 75 – 80% печении временной ишемией или лигированием желчного протока [110; 118; 163].Активное внедрение микроинструментов послужило стимулом ксозданию новых экспериментальных моделей и значительно облегчило30техникуоперации.Намелкихживотныхописановыполнениепортокавального шунтирования, частичной, субтотальной и тотальнойрезекциипечени,резекциижелчныхпротоков,гетеротопической,ортотопической трансплантации печени [17].Химические моделиБольшаямозаичномучастьтоксическихповреждениюхимическихпечени,привеществприводиткоторомкнекротизируютсяцентральные либо периферические зоны долек.Для моделирования ОПНможет потребоваться повторное введение повреждающего агента.
Вбольшинстве случаев печень регенерирует до нормальной, не измененнойструктуры ткани с постоянным числом ее структурно-функциональныхединиц (долек). В других случаях, обычно при более длительномвоздействии веществ, после регенерации нарушается архитектоника тканипечени с образованием цирроза [171]. Основными химическими моделямиявляются: введениие ацетаминофена [74]; D-галактозамина [131; 132;184]четыреххлористого углерода(ЧХУ, CCl4) [32; 41; 171]тиоацетамида(ТАА) [68; 131] азоксиметана[23], конканавалина А [134; 159].Другие моделиВирусные модели.
Вирусные гепатиты являются основной причинойОПН во многих странах [81; 131; 163]. В основном применяются вирусныемодели на мышах и кроликах (мыши с гиперэкспрессией белков вирусагепатита В (HBV) или BALB/cj мышей инфицированных MHV-3,кроликовcэкспериментально индуцированной вирусной геморрагическойболезньюкролика(ВГБК))[163].Данныемоделиявляютсяпредпочтительными для оценки ОПН вирусной этиологии.В настоящее время существует большое количество моделей ОПН,однако ни одна из них не является идеальной и универсальной.
Каждая из31них имеет свои недостатки и преимущества [118; 163]. Выбор моделидолжен определяться задачами конкретного эксперимента. Представляетсяобоснованным, что для оценки аппаратов «искусственной печени» болеепредпочтительны модели на основе гепатэктомии. Для изучения ОПНпосле обширных резекций печени более актуальными являются модели срезекцией печени, а для оценки эффективности терапии при ОПНвирусной этиологии – модели с использованием различных вирусов, приОПН токсической этиологии - химические модели. Таким образом, припланированииисследованиядляоценкиэффективноститерапиинеобходимо,использовать модель (или несколько моделей) наиболее полносоответствующую замыслу исследования [118; 163].На наш взгляд, в настоящее время, из всех перечисленных моделей,наиболееинформативнаядлямоделированияостройпеченойнедостаточности при резекции печени является резекция печени у крыс вобъеме 70% и более.
Причем, модели,которые не сопровождаются высокойлетальностью, удобны для оценки эффективности лечения в разные срокипосле операции, а модели с запредельными резекциями 85–90% для оценкилетальности и продолжительности жизни. Данные модели являетсяобратимыми (лечение может привести к полному восстановлениюпеченочныхфункцийиулучшитьвыживаемость),воспроизводимыми(операция является простой), они несут минимальныйриск для персонала выполняющего исследование.
При обширныхрезекциях печени выживаемость животныхтакже зависит от применяемогонаркоза [73].В России все чаще в качестве наркоза в экспериментеприменяется Золетил [4]. Таким образом, необходимы дальнейшиеисследования для поиска наиболее информативной модели острой печенойнедостаточности при резекции печени.321.5 Оценка эффективности клеточнойтерапииС целью оценки эффективности клеточного продукта после ОРПмогут быть использованы критерии анализа массы животного, печени,летальности, выживаемости,функции печени, морфологические методы,оценка повреждения печени по активности печеночных ферментови др.Анализ летальности и продолжительности жизниДанный показатель характерен для экспериментальной модели свысокой летальностью [41; 64; 106; 175].При выполнении резекции печениболее70%увеличиваетсяуменьшаетсяпродолжительностьчастотажизнилетальности[122].Данныйипоказательиспользуется при моделировании печеночной недостаточности у крыс срезекцией 90% печени, при резекции 70% в сочетании с моделированнымциррозом печени, при химических моделях и при облучении животных[85;106; 182].
Помимо объема резекции печени на данные показатели влияетприменяемый наркоз [73; 85; 178].Масса печени, животногоМасса печени является постоянной величиной. Поэтому критериймассы печени используется во многих исследованиях [21; 85; 128; 161]. Вклинике используют компьюторную томографию для оценки объема (веса)печени и скорости регенерации [53]. В ряде работ оценивали весживотного до и после применения препарата, данный показатель скорееотражает общее восстановление при данной патологии, чем динамикулечения печеночной недостаточности.
Однако, показатель прост визмерениях и встречается в современных работах [21].Оценка функции печениОсновная часть этих методов сводится к определению уровнявеществ синтезируемых печенью. Другая к использованию специальных33тестовссульфобромофталеином,индоциановымзеленым,натолерантность к аммиаку.Вещества синтезируемые в печени. Билирубин и его фракции,общий белок, альбумин, мочевина, глюкоза, холестерин, желчные кислоты,прокоагулянты.Концентрация билирубина в крови зависит от многих факторов –скорости образования пигмента, связывания альбумина, гепатобилиарнойциркуляции, хранения, коньюгации и выделения. Концентрация общегобилирубинаобладаетвысокойспецифичностьюинизкойчувствительностью [137].Концентрация холестирина, альбумина, мочевины, глюкозыможетизменятьсяприпоражениидругихоргановбрюшнойполости,метаболических заболеваниях, патологии эндокринных желез, сепсисом ит.д.
[137]. Данные биохимические параметры не очень чувствительны испецифичны к отражению печеночной функции. Однако, используются всовременных исследованиях для оценки эффективности препаратов прирезекции печени и при моделированном циррозе [112; 128; 180].Желчные кислоты образуются гепатоцитами и представляют собойконечный продукт метаболизма холестерина. Желчные кислоты всыворотки крови являются стабильными в течение длительного времени имогут быть заморожены, что удобно, в тех случаях, когда виварийнаходится далеко от лаборатории [137].Тест на толерантность к аммиаку.
Суть метода в измеренииконцентрации аммиака в сыворотке крови натощак и после приема внутрьхлорида аммония [137]. Тест обладает высокой чувствительностью.Недостатки – нестабильность аммиака в образцах сыворотки, что требует34быстрого проведения анализа образцов, для метода нужна специальнооборудованная лаборатория [106; 127].Тест с сульфобромфталеином (СБФ) -метод основан на измененииконцентрации СБФ со временем. Скорость выведения зависит отмножества факторов, таких как связывание с альбумином, портальнымкровотоком, конъюгацией и экскрессией с желчью, связывание с белкамицитозоля и захвата гепатоцитами.
Данный метод является простым,результат теста получается относительно быстро [137].Тест с индоциановым зеленым (ИЦЗ). Широко используется вклиническойпрактикеприпланированииобъемарезекцииивэксперименте [63; 78]. На концентрацию ИЦЗ может влиять множествофакторов, таких как методика забора крови, вес животного, отеки, асцит.Ложно-положительные результаты (так же как и при использовании СБФ)могут наблюдаться при наличае желтухи у животного [137].Морфологические методыК ним можно отнести оценку числа митозов, оценку синтеза ДНК,иммуногистохимия, трансмиссионная электронная микроскопия и др.Оценка числа митоза достаточно часто используется для оценкивосстановительного эффекта [21; 158].
Суть метода заключается в том, чтопослеокрашиваниясрезовпеченигематоксилином/эозиномвопределенном количестве полей зрения ведется подсчет числа митозов.Эксперимент планировался так, что бы учитывался суточный ритммитотической активности гепатоцитов. Преимуществом метода являетсяпростота, по сути, выполняются обычные гистологические процедуры.Недостатком метода - из-за гетерогенности популяции гепатоцитов иразличиями в длительности G1 и 2 фаз клеточного цикла великавероятность ошибки метода [21; 158].35ОценкасинтезаДНКвключениюрадиоактивногогепатоцитов.Обычно,ввыполняетсямеченогокачествеавторадиографическипредшественникапредшественникавпоДНКиспользовалсятимидин, а в качестве радиоактивной метки тритий.
Данный методполучил широкое распространение[92]. Преимущества метода - болеечувствителен, чем метод оценки числа митозов.Недостатки - сложностьметода и относительно большая вероятность ошибки, и невозможностьприменения в клинической практике [92].Иммуногистохимя Метод заключается в фиксации материалаформалином с последующим использованием иммуногистохимическогоисследования с целью определения регенеративной активности ядерныхантигенов таких как Ki-67 (у крыс MIB-5) иядерного антигенапролиферирующих клеток [PCNA][21].
Так же использовались антитела кгепатоспецифичным маркерам, таким как цитокератин 7, 18, фибронектин,a-SMA [41; 182].В работахтакже использоваласьокрашивание TUNEL–иммуногистохимический метод заключающийся в определении ДНКфрагмента в ядрах клеток подвергшимся апоптозу [182]. Преимуществомметода является то, что его можно выполнить в условиях лабораторииприналичие специфических антител.Иммунофлюоресцентныйанализ–методиспользуетсядлявыявления антигенов и антител, основан на использовании меченныхфлюресцентным красителемкомплексысантигенами,реагентов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
