Диссертация (1139891), страница 4
Текст из файла (страница 4)
В первую очередь дефицит человеческих донорских органов, применение ксеногенныхклеток, связано с высоким риском заражения прионами и другимиинфекциями. Так же при применении донорских гепатоцитов реципиентунеобходимо длительно получать иммуносупрессивные препараты, чтосущественноактульнымснижаеткачествоявляетсяжизни.Учитываякультивированиевышеописанное,гепатоцитовилигепатоцитопободных клеток из стволовых клеток.Фетальные клеткиФетальные клетки печени человека обычно получают на 74-108 деньгестации.Этиклеткисамовозобновлению,обладаютмультипотентны,высокойвспособностьюопределенныхкусловиях,способны дифференцироваться в гепатоциты и клетки желчных протоков,жировой,костной,хрящевойткани,эндотелия[38;66].Имплантированные фетальные клетки печени практически невызывают реакции отторжения, т.к. антигены гистосовместимости 1 и 2класса в 1-2 триместрах гистации еще не экспрессируются [8].Одниавторысчитают,чтотрансплантацияданныхклетокэффективна при коррекции печеночной недостаточности, в связи сналичием в их составе большого количества стволовых клеток [123; 139].Другие, считают, что эффективность клеточной трансплантации связана свведением биологических активных веществ и предлагают использовать23пептиды или лиофилизаты печени и селезенки для восстановленияповрежденной печени [5; 6; 9; 10].A.A.Khanи соавторы описывают введение в печеночную артериюфетальных стволовых клеток человека у 25 пациентов с циррозом печениразличной этиологии.
Отмечено улучшение общего состояние пациентов,биохимических показателей крови, уменьшение количества баллов пошкале MELD на протяжении 6 месяцев у всех пациентов[71].Применение фетальных клеток печени ограничено этическими иправовыми нормами, связанными с прекращением развития человеческихзародышей.Большие надежды возлагаются на эмбриональные стволовые клетки(ЭСК) [12]. Эмбриональные стволовые клетки могут быть получены извнутренней массы клеточной бластоцисты, являются плюрипотентнымистволовыми клетками способными дифференцироваться в производныетрех зародышевых листков (эктодермы, мезодермы и эндодермы) [76].Имеются экспериментальные работы показывающие возможностьполучения гепатоцитоподобных клеток из эмбриональных клеток человекаinvitro[14].
Однако, клиническое применение стволовых эмбриональныхклеток небезопасно ввиду того, что последние могут перерождаться взлокачественные тератокарциномные опухоли после трансплантации вовзрослый организм [120].В настоящее время особый интерес вызывают индуцированныеплюрипотентные стволовые клетки(IPSCs), которые могут быть полученыпри помощи принудительной экспрессии факторов транскрипции (Oct4,Sox2, Klf4 и c-Myc) соматических клеток [173]. Полученные клетки помногим характеристикам напоминает ЭСК – обладают маркерамистволовыхклеток,способныдифференцироватьсявклеткитрех24зародышевых листков [174].
Полученные из IPSCs гепатоцитоподобныеклетки эффективно генерируют invivo[80]. IPSCs имеет ряд преимуществпо сравнению с ЭСК. Так, полученные из аутологичных тканей IPSCs невызывают реакции отторжения, и их применениене сопровождаетсяэтическими ограничениями. Однако, так же как ЭСК, IPSCs склонны кобразованию тератом, а эффективной очистки полученных изIPSCs клетокот IPSCs не существует, поэтому применение их в клинике в настоящеевремя невозможно[80; 147; 150].Стволовые клетки взрослого организма (постнатальные стволовыеклетки)Постнатальные стволовые клетки (СК) – взрослые соматическиеуни-, ди-, или мультипотентные стволовые клетки различных органов,способныекдифференцировкевклетки“своего”органаи/илитрансдифференцировке.
Основным источником получения СК служатсобственные ткани взрослого организма. На сегодняшний день стволовыеклетки найдены практически во всех тканях организма, таких какголовной, спинной мозг, костный мозг, периферическая и пуповиннаякровь, дентальная пульпа, кровеносные сосуды, эпителий кожи ипищеварительного тракта, скелетные мышцы, поджелудочная железа,роговица, сетчатка и печень [44; 46; 53; 54; 84; 106; 108; 126; 147; 156].Известны работы по дифференцировке в гепатоцитоподобные клеткиклетки пуповины крови [52], жировой ткани [156], кожи [20; 87], КМ [125].Особый интерес представляют стволовые клетки КМ. Во-первых, ввиду относительной простоты их получения.
Во-вторых, стволовые клеткиКМ являются дополнительным источником стимуляции секреции HGF,который является мощным стимулятором печеночной регенерации [39].25КМ содержит два типа стволовых клеток: 1) стволовые кроветворныеклетки (СКК), способные производить эритроидные, миелоидные илимфоидные клетки; 2) мультипотентные мезенхимальные стромальныеклетки (ММСК) – фибробластоподобные клетки стромы КМ, обладающиеспособностью к самообновлению и мультипотентной дифференцировке.Вэкспериментахнаживотныхпоказанаэффективностьтрансплантации клеток КМ для улучшения функциональных показателейпечени и снижения фиброза у мышей при циррозе печени [67].
Принекоторых экспериментальных моделях введение СК КМ предупреждаетгибель животного [95]. В другой работе отмечено, что введенные клетки недифференцируются в гепатоциты, а происходит слияние с поврежденнымигепатоцитами с образованием гибридов, не всегда обладающихвсейполнотой функциональных свойств гепатоцитов [167]. Ряд исследователейтрансплантировалипредварительнодифференцированныеinvitroдогепатоцитов ММСК КМ крысам после резекции последним 90% печени.
Врезультате чего 33% животных выжило, в то время как в контрольнойгруппе все животные погибли [106].Описан случай применения СК периферической крови у пациента сострой печеночной недостаточностью вызванной приемом лекарственныхсредств. Введение клеток в воротную вену способствовало улучшениюпоказателей функции печени и свертываемости крови, а при последующейбиопсии печени были выявлены обширные зоны регенерации [54].С целью профилактики ППН, которая может возникнуть на фонеОРП, пациентам в качестве дополнительной процедуры к эмболизацииветвей воротной вены, в воротную вену вводили аутологичные СК КМCD133+.
В результате был получен эффект усиления регенерации иувеличения остаточной доли после операции [53].26В ряде работ описано применение мононуклеарных клеток (МНК)аутологичного КМ при циррозе печени. На фоне введения которыхотмечено улучшения функции печени, улучшение качества жизни, болеенизкуювероятность развития гепатоцеллюлярного рака [56; 72; 89; 108;124; 157].В отличие от СКК ММСК обладают низкой иммунногенностью, чтооблегчает их применение при аллотрансплантации. Кроме того, приопределенных условиях, они способны к слиянию с гепатоцитами,трансдифференцировке в них, подавлению воспалительной реакции,ингибированию апоптоза гепатоцитов (рисунок 1.) [84].Рис.1.
Терпевтический эффект ММСК при заболеваниях печени [84]27ММСК КМ продуцируют не только гемопоэтические, но инегемопоэтические ростовые факторы,интерлейкиныи хемокины,которые также принимают участие в регенерации печени [33; 84].Применение ММСК при заболеваниях печени показало своюэффективность,иммунологическуюдоступность,онкологическуюсовместимость.Кроме тогобезопасностьММСКпростыивполучении и характеризации, поэтому, на наш взгляд, из всех возможныхвариантов клеточной терапии применение ММСК наиболее перспективнхирургической гепатологии.281.4 Модели острой печеночной недостаточностиВ связи с отсутсвием подходящей экспериментальной моделипатофизиология и подходы к лечению ОПН изучены недостаточно [90;118; 163].Экспериментальные модели ОПН принятоподразделять на: 1)хирургические; 2) химические; 3) другие.Хирургические моделиВыделяют 3 группы хирургических моделей: резекция печени игепатэктомия, полная и частичная деваскуляризация печени и модели,сочетающие в себе резекцию печени и деваскуляризацию.Гепатэктомия–удалениевсейпечени.Гепатэктомиябылавыполнена у мышей, крыс, кроликов, собак и свиней [163].
После даннойоперации животное живет в среднем 15-26 часов. ОПН проявляетсявыраженной энцефалопатией и комой [131]. Преимуществами моделиявляютсяхорошаявоспроизводимость и возможность invivo исследоватьаппараты «искусственной печени»в отсутствии токсических препаратов итоксинов, выделяемых поврежденной печенью.
Однако, данная модель нелишена недостатков, поскольку является необратимой, кроме того, послеудаленияпеченивкровиотсутствуюттоксическиевеществаивоспалительные факторы, которые играют важную роль в патогенезеОПН[142].Резекция печени. Самой известной и широко распространенноймоделью, которая используется сегодня, является модельc резекцией 70%печени крысы. На протяжении более 80 лет данная модель остаетсяактуальной и в основном именно на ней происходит изучение процессоврегенерации и доклинических испытаний лекарств,для лечения ОПН идругих заболеваний печени.Модели с 70% резекцией печени были29разработаны и у других животных, включая мышей, собак и свиней [93;109; 163].При правильном выполнении данной операции летальности ненаблюдается [163].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
