Автореферат (1139890), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Размер печеночных долек измерялся по формуле S=3*l2√3/2, где S-площадь шестиугольника, l-длина одной из сторон шестиугольника(измерялось расстояние между двумя близлежащими портальными трактами).Данные приведены в процентах по отношению к морфометрическим показателямздоровой печени. Проводили измерение не менее 25 порто-портальных расстояний.Для оценки PCNA позитивных клеток парафиновые срезы печени крысыокрашивали антителами к PCNA (клон PC10, DAKO, Denmark; разведение 1:100).Окрашиваниепроводилистрептавидин-биотиновымметодом.Высчитывалисреднее процентное количество позитивных клеток в 5 полях зрения приувеличении 400х.Статистическую обработку полученных данных проводили с помощьюпрограммного обеспечения SPSS 22 для Windows.
Количественные данныепредставляли в виде медианы и межквартельного размаха. Для сравнения значенийколичественныхпризнаковнепараметрическийкритерийвнезависимыхМанна-Уитни.группахВыживаемостьиспользовалилабораторныхживотных в группах оценивали с помощью метода Каплана-Мейера и сравнивалимеждусобой,используялогарифмическийранговыйкритерий.Различияпризнавали статистически значимыми при значении p<0,05.13РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯРазработка оптимальной экспериментальной модели пострезекционнойпеченочной недостаточности.При выполнении 70%, 85% резекции печени под все крысы прожили 21сутки и были выведены из эксперимента (табл. 4).Таблица 4Определение предельно больших объемов резекции печени у крыс вэкспериментеОперацияМедиана (ч) Процентили (25 % - 75 %) Летальность (%)Резекция 70% печени504504 – 5040Резекция 85% печени504504 – 5040Резекция 90% печени1212 – 24100При выполнении резекции 90% печени все животные погибли в течение 2суток после операции (табл.
4). Медиана жизни животных после операциисоставила 12 часов.В нашем исследовании не отмечено летальности при выполнении 70% и 85%резекции печени.Таким образом, модели с 70% и 85% резекцией печени с применением вкачестве наркоза Золетила являются не подходящими для оценки летальности ипродолжительностижизни,номогутбытьиспользованыдляоценкиэффективности ММСК КМ на разных, в том числе длительных, сроках послеоперации.После выполнения 90% резекции печени все животные погибли.Такимобразом, для оценки летальности целесообразно применять модель с 90%резекцией печени.Влияния трансплантации аллогенных ММСК КМ на летальность, функцию,объем оставшегося ремнанта печени после выполнения обширной резекциипечени в эксперименте.На основании ранее полученных данных для дальнейшего изучения влиянияаллогенных ММСК КМ на летальность выбрана модель с 90% резекцией печени,на массу крысы, печени, синтетическую функцию печени и активность печеночныхферментов модель с 70% резекцией печени.14Летальность и продолжительность жизниПосле резекции 90% печени и трансплантации ММСК КМ все животныепогибли в течение 2 суток.
Не отмечено разницы в продолжительности жизнимежду исследуемыми группами ((12 часов) р=0,66)) (рисунок 1).Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК КМ не увеличиваетпродолжительность жизни после резекции 90% печени.Рис. 1. Влияние трансплантации аллогенных ММСК КМ на летальность ипродолжительность жизни животного после резекции 90% паренхимы печени.Динамика массы крысы и печениУ всех крыс в 2 исследуемых группах (F и G) масса крысы и печениполностью восстанавливалась к 14 суткам, а учитывая, что крыса продолжаларасти, к данному сроку вес крысы и печени превышал первоначальную на 25 –63%.
В экспериментальной группе масса крысы и печени быстрее возвращалась кисходным показателям. Статистическая разница между исследуемыми группамиотмечена на 4 сутки после операции (табл. 5).Таким образом, трансплантация ММСК КМ приводит к более быстромувосстановлению массы крысы и печени.15Таблица 5Анализ динамики массы крысы и печениЭкспериментальнаягруппаРОценкаСуткиПроцентилиПроцентилиМедиана (25 % - 75 Медиана (25 % - 75%)%)-10,00 - 1-8,00- 11 - -5-8,000,946,00- 24,00 - -16,00 - 2-13,50-12,000,407,004,00Динамикамассы крысы (г)-22,00 - 4-10,00-4,00-6,00 – 50,009*8,0049,00 –50,00 –1455,0055,000,7461,0059,00Динамики10,480,39 – 0,500,410,40 – 0,460,277массы печени в20,630,62 – 0,680,680,67 – 0,750,14%40,830,81 – 0,870,880,87 – 0,92 0,009*(относительномассы всей141,251,23 – 1,391,271,25 – 1,350,848печени)Контрольная группаСинтетическая функция печениПри сравнении уровня прямого билирубина в крови не было отмеченостатистической значимой разницы в двух группах на всех сроках после операции.Прямой билирубин на 1, 2, 4 сутки был выше нормы в 2-5 раз (в зависимости отсроков), в дальнейшем к 14 суткам нормализовался.Уровень общего белка в крови в первые сутки уменьшался, далееотмечалось постепенное восстановление его концентрации.Более высокий егоуровень был выявлен в экспериментальной группе на 4 и 14 сутки (рисунок 2А).16Рис.
2. Концентрация общего белка, альбумина, значение АЧТВ и МНО в крови наразныесрокипослеоперациисприменениемаллогенныхММСККМ(мезенхимальные мультипотентные стромальные клетки костного мозга) и безприменения ММСК КМ. А - Концентрация общего белка; Б – Концентрацияальбумина; В – Значение АЧТВ в крови; Г – Значение МНО в крови.* - статистически значимый результат (P<0,05).v - статистически значимый результат между 0 сутками и выбраннымисутками в одной группе (P<0,05).Уровень альбумина снижался в двух группах на первые сутки послеоперации, в дальнейшем с 2, 4 суток отмечен постепенный подъем в контрольнойгруппе, в экспериментальной группе подъем уровня альбумина наблюдали с 4суток. Статистически значимые отличия в 2 группах выявлены на 4 и 14 суткипосле операции (рисунок 2Б).17Уровень АЧТВ в контрольной группе (по отношению к 0 суткам) на 1 суткибыл повышен в 2 раза (р=0,002).
В экспериментальной группе (по отношению к 0суткам) не отмечено повышение АЧТВ в послеоперационном периоде. Присравнении контрольной и экспериментальной групп статистически значимыеизменения выявлены на 1 сутки (рисунок 2В). Нормализация МНО в контрольнойгруппе зафиксирована на 14 сутки, в экспериментальной группе на 4 сутки,статистически значимые изменения выявлены на 1, 2, 4 сутки после операции(рисунок 2Г).Таким образом, трансплантация ММСК способствует более раннемувосстановлению синтетической функции печени.ВконтрольнойАктивность печеночных ферментови экспериментальной группах небыловыявленостатистической значимой разницы в изменениях концентрации АЛТ и АСТ на всехсроках после операции (рисунки 3А, 3Б). В контрольной группе уровень ЩФ на 1 и2 сутки был повышен в 2 раза, снижение начиналось с 2 суток, нормализацияпоказателей отмечена с 4 суток.
В экспериментальной группе на 1 сутки отмеченоповышение данного показателя в 1,5 раза, на 2 сутки в 2 раза с последующейпостепенной нормализацией к 4 суткам. Статистически значимые измененияконцентрации ЩФ между контрольной и18экспериментальной группамивыявлены на 1 сутки послеоперации (рисунок 3В).Такимобразом,трансплантация аллогенных ММСККМ уменьшает активность ЩФ впослеоперационном периоде и невлияет на АЛТ и АСТ.Рис. 3.
Уровень АЛТ, АСТ,ЩФ в крови на разные сроки послеоперациисприменениемаллогенныхММСККМ(мезенхимальные мультипотентныестромальныеклеткикостногомозга) и без применения ММСККМ. А – Уровень АЛТ в крови; Б –Уровень АСТ в крови; В – УровеньЩФ в крови.* - статистически значимыйрезультат (P<0,05).v - статистически значимыйрезультатмеждувыбранными0суткамисуткамивиоднойгруппе (P<0,05).19Влияние трансплантации аллогенных ММСК КМ на пролиферативную,митотическую активность гепатоцитов и морфометрические критериирегенерации паренхимы печени после обширной резекции печени вэкспериментеВлияние аллогенных ММСК КМ после ОРП на морфологические измененияв печени оценивалась на модели с 70% резекцией печени на 1, 2, 4, 14 сутки послеоперации.Пик митозов приходился на 2 сутки, как в контрольной, так и вэкспериментальной группе, однако статистически достоверной разницы присравнении двух групп не было выявлено (рисунок 4А).Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК КМ не влияет наколичество митозов после 70% резекции печени.Количество PCNA позитивных клеток увеличивалось с 1 суток, достигаясвоего пика на 2 сутки, нормализовалось к 14 суткам (рисунок 4Б).
При анализе 2групп выявили статистически достоверные различия на 1 и 2 сутки после операции(рисунок 4Б).Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК КМ увеличиваетколичество пролиферирующих гепатоцитов после 70% резекции печени.Наибольший диаметр ядра отмечен на 1 сутки в 2 группах. Повышениедиаметра ядра отмечено на всех сроках после операции. Однако при сравнениидвух групп, статистической достоверности не было выявлено (рисунок 4В).Наибольшая площадь гепатоцитов отмечена на 1 и 14 сутки в двух группах.Статистические различия между контрольной и экспериментальной группой неотмечены на всех сроках после операции (рисунок 4Г)20Рис.
4. Количество митозов, позитивных PCNA (%), диаметр ядра и площадьгепатоцитов на разные сроки после операции с применением аллогенных ММСККМ (мезенхимальные мультипотентные стромальные клетки костного мозга) и безприменения ММСК КМ. А – количество митозов; Б – количество позитивныхPCNA в %; В – диаметр ядра гепатоцита (мкм); Г – площадь гепатоцита (мкм²).* - статистически значимый результат (P<0,05).v - статистически значимый результат между 0 сутками и выбраннымисутками в одной группе (P<0,05).Определение размера печеночных долекРазмеры печеночной дольки были больше нормы на 2,4 сутки послеоперации (P<0.05).
Наибольший размер печеночных долек отмечен на 4 суткипосле операции в 2 группах, с последующим восстановлением их размеров к 1421суткам (табл.7). Статистически значимых различий при анализе 2 групп не быловыявлено на всех сроках после операции.Таблица 7Оценка площади долькиОценкаПлощадьдольки (%)*ЭкспериментальнаягруппаРСуткиПроцентили (25Процентили (25МедианаМедиана% - 75 %)% - 75 %)010010060,13 - 151,8660,13 - 151,861121,5079,05 – 159,77110,3565,40 – 253,07 0,802177,30 101,06 – 322,70173,02107,95 – 245,44 0,66Контрольная группа4221,12129,11 – 430,14223,0714119,7980,44 – 239,82131,79* % от площади дольки нормальной печени.131,32 – 489,79 0,500,5058,76 – 225,85Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК не влияет на площадьпеченочной дольки после 70% резекции печени.Выводы1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
