Диссертация (1139886), страница 4
Текст из файла (страница 4)
Внорме генерация АФК в сперме адекватно контролируется семенными19антиоксидантами.избыточномПатогенныеформировании,эффектычтоАФКсобственнореализуютсяиприпредставляетихсобойоксидативный стресс. Таким образом, состояние окислительного стрессавозникает вследствие одной из двух причин: повышенной продукциисвободных радикалов или недостаточной антиоксидантной активности для ихнейтрализации [7; 13; 59; 64; 65; 89; 143; 229].В качестве внешних причин фрагментации ДНК выделены следующиефакторы: длительное время хранения спермы; процедуры сбора, наполненияи предварительной обработки спермы; методы подготовки спермы для ВРТ;температура хранения и криоконсервации спермы; манипуляции со спермойпо селекции пола потомства; посттестикулярный оксидативный стресс;варикоцеле; урогенитальные инфекции; возраст; половое воздержание;повышение температуры яичек; различные заболевания органов мошонки(опухоли, перекрут яичка, крипторхизм, вазэктомия и т.д.); влияниеклинических процедур, лекарств или вакцин; вредные факторы окружающейсреды (химические вещества, радиация и т.д.); образ жизни (курение,алкоголь и т.д.) и др.
[9; 36; 58; 98; 110; 119; 120; 121; 131; 135; 169; 181; 199;241].За последние годы во многих исследованиях изучали возможнуюкорреляцию между фрагментацией ДНК сперматозоидов и различнымипараметрами спермы, в которых получены неоднозначные результаты [81].Большинство исследований указывает на обратную корреляцию междустепенью фрагментации ДНК и такими показателями спермы, какконцентрация,подвижность,жизнеспособностьиморфологиясперматозоидов, независимо от возраста обследованных [21; 49; 57; 69; 77;144; 153; 173; 232].Достоверная отрицательная корреляция была установлена, в частности,междупроцентомморфологическинормальныхсперматозоидовифрагментацией ДНК [219; 234].
Аномальные структуры хроматина иразрывыДНКкоррелируютстяжелымиформамиморфологически20аномальныхпрофилейсперматозоидов,такихкаккомбинациямегалоцефалии и множественных хвостов с дисомией или глобозооспермией,сопровождаемая высокой степенью анеуплоидии [160; 183]. Другимпримером аномалии морфологии сперматозоидов, при которой отмечаетсяповышенная фрагментация ДНК, является коническая форма головки,ассоциированная с рецидивами прерывания беременности у половыхпартнеров [84]. Кроме того, сперматозоиды с аномально малой головкойимеют очень высокую степень фрагментации ДНК и связаны с плохимпрогнозом при экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО) [160].В отличие от этого, в ряде исследований не выявлена значимаякорреляция между традиционными параметрами спермы и фрагментациейДНК [140; 152; 233].
Имеются сообщения о наличии нарушенийгенетическогоматериалавсперматозоидахснормальнымихарактеристиками по критериям ВОЗ [76; 126; 196]. К примеру, по данным F.Sun et al. [217], у больных с транслокацией и злокачественными опухолямипри наличии спермальных хромосомных аберраций не отмечено снижениепроцента сперматозоидов с нормальной морфологией.Кроме того, было выявлено, что индекс фрагментации ДНК слабокоррелирует с параметрами спермограммы [97; 109; 180]. Так, ряд авторовпоказал, что 25-40% мужчин с нормальными показателями спермограммыимеют бесплодие вследствие индекса фрагментации ДНК более 20-30% [70;81; 115].
С учетом этого, последний критерий можно рассматривать каксамостоятельнуюмеруфункциисперматозоидоввсилутого,чтотрадиционные параметры спермы имеют невысокую предсказательнуюценность относительно фертильности мужчины [104].Однако необходимо добавить, что указанная противоречивостьрезультатовоценкикорреляциимеждуобычнымипараметрамиспермограммы и фрагментацией ДНК, может быть обусловлено различнымифакторами:во-первых,использованиемразныхтестовыхметодовисследования целостности ДНК; во-вторых, выбором разных методологий и21критериев при анализе обычных параметров спермы (методика оценкиколичества сперматозоидов в счетных камерах, техника окрашивания приизученииморфологиисперматозоидов,использованиеразличныхруководством для выбора пороговых значений и т.д.); в-третьих, отсутствиемединых принципов контроля качества при тестировании параметров спермы;в-четвертых, разными подходами к отбору групп населения для включения внаучное исследование [75; 81; 96].Повреждение ДНК сперматозоидов может оказать свое влияние на всестадии репродуктивного процесса - от преимплантационного развитияэмбриона до достижения и поддержания беременности и, наконец, созданияздоровогопотомства.Этоподтвержденоданнымиокорреляцииповреждений ДНК сперматозоидов и различных показателей фертильноститаких, как развитие эмбриона, частота имплантации зародыша, наступлениябеременности и абортов, а также число случаев врожденных аномалий употомства [11; 15; 62; 140; 148; 221].
В качестве примера можно привестиданные L. Simon et al. [208] о том, что при ЭКО частота живорождения плодасоставила 33% при индексе фрагментации ДНК менее 25% и только 13% при индексе более 50%.Существует некоторое противоречие о влиянии фрагментации ДНКсперматозоидовнаоплодотворяющиеспособности.Отрицательнаякорреляция была прослежена между способностью к оплодотворению иуровнем фрагментации ДНК [34; 80; 225; 228].
Тем не менее, если тип истепень повреждения ДНК могут быть сбалансированы репаративнойспособностью ооцита, то возможно достижение оплодотворения даже привысокой степени фрагментации ДНК сперматозоидов [76; 98; 148; 152; 163].В пользу этого тезиса служит тот факт, что при различных ВРТ, преждевсего, при интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ), невыявлена зависимость оплодотворения от степени фрагментации ДНКсперматозоидов [57; 140; 237].После стадий деления клеток от 4 до 8 клеток, когда включается геном22по отцовской линии, дальнейшее развитие эмбриона, безусловно, зависит отцелостности ДНК сперматозоидов [213].
В случае нарушений ДНКсперматозоидов аналогичные изменения могут присутствовать также вэмбрионе и затем привести к трудностям при достижении стадиибластоцисты [57]. Такую закономерность наблюдали при ВРТ (ЭКО иИКСИ),когданепоправимыйгенетическиущербаберрантныеэмбриону,всперматозоидырезультатечегонаносилипроисходилоблокирование его развития до стадии бластоцисты, и это выражалось в виденизких темпов имплантации эмбриона [57; 76; 162; 163; 213].Обратная корреляционная связь отмечена между вероятностьюдостижения беременности (естественным путем или с помощью ВРТ) истепенью фрагментации ДНК сперматозоидов [48; 80; 109; 148; 155; 163;205].
Хотя не обнаружены конкретные верхний или нижний пределы индексафрагментации ДНК для прогнозирования наступления беременности,отрицательная прогностическая ценность теста фрагментации ДНК наиболеевысока при естественном способе оплодотворения и внутриматочнойинсеминации (ВМИ) [95; 152; 196]. Так, при низкой степени фрагментацииДНК вероятность успешной беременности естественным способом в 6,5-10,0раз и с помощью ВМИ - 7,0-8,7 раз выше по сравнению с образцами свысокой степенью фрагментации ДНК, тогда как при ЭКО и ИКСИ этосоотношение составило примерно 2 и 1,5 раза соответственно [76; 232].Обозначенная корреляция не всегда имела статистически значимыйхарактер, но такая тенденция была подтверждена многочисленнымиисследованиями,продемонстрировавшими,чтовысокийуровеньфрагментации ДНК сперматозоидов является негативным фактором длядостижения и поддержания беременности. Рецидивные случаи выкидышейсвязанысразличнымигеномныминарушениями,втомчислесфрагментацией ДНК сперматозоидов [76; 148].
Дополнительным доводом впользу такого заключения выступает то обстоятельство, что с нарастаниемстепени фрагментации ДНК сперматозоидов риска невынашивания плода23при ЭКО и ИКСИ увеличивается до четырех раз [57; 76; 213].Работы последних лет показали негативное влияние высоких уровнейфрагментации ДНК сперматозоидов, возникших из-за профессиональноговоздействия металлов, растворителей и пестицидов, курения или в силупожилого возраста мужчины, на развитие врожденных дефектов, детскихболезней или раковой опухоли у потомства [57; 148].Исходя из представленных научных данных, детальный анализповреждений ДНК сперматозоидов по праву может быть включен вкомплексное обследование бесплодной пары.
Но, несмотря на указаннуюкорреляцию фрагментации ДНК сперматозоидов и мужской фертильности, внастоящее время не достигнут консенсус среди специалистов относительнорутинного использования диагностики фрагментации ДНК при бесплодии,выбора оптимального способа тестирования, клинического протокола иутверждения референсных значений, определяющих прикладную значимостьи прогностическую ценность полученных результатов. Поэтому дальнейшиеисследования в этой области должны способствовать разрешению этихвопросов и окончательно определить роль и место данного метода приведении мужчин с идиопатическим бесплодием [1; 20; 57; 66; 75; 148].1.3. Методы диагностики фрагментации ДНК сперматозоидовДля анализа целостности ДНК сперматозоидов было предложеномножество методов: TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediateddeoxyuridine triphosphate nick end labeling); ISNT (in-situ nick translation);метод ДНК-комет; метод оценки «лестницы» ДНК; SCSA (sperm chromatinstructure assay); окраска акридиновым оранжевым; окраска толуидиновымсиним; окраска анилиновым синим; окраска хромомицином А3; SCD (spermchromatin dispersion); FISH (fluorescence in situ hybridization) и др.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
