Диссертация (1139782), страница 8
Текст из файла (страница 8)
При выделении культуры, проводилась ее42световая микроскопия, с использованием светового микроскопа при 200 кратномувеличении.Необходимо отметить, что для идентификации наличия бактерий, с цельюдальнейшей обработки и выделения ДНК, проводилось реактивация, ихвыращивание в жидкой питательной среде, в аэрофильных и микроаэрофильныхусловиях (с целью выявления аэробного и анаэробного типа бактерий).
ПослереактивацииивыделенияпроводилосьувеличениекачественныхмалыхмикробныхконцентрацийфрагментовопределённыхДНК,фрагментовнуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале методом ПЦР на ген 16SрРНК.Далеепроводилосьсеквенированиеполученноговозбудителяибиоинформатический анализ последовательности, с целью идентификации родабактерий.
Таким образом, план работы с биоматериалом пациенток с СБМП/ИЦ(более наглядно представленный на рисунке 1), выглядел так:1. Выделение чистой культуры микроорганизмов2. Выделение ДНК3. Постановка ПЦР на ген 16S рРНК4. Выполнение электрофореза с возбудителем, полученным на ПЦР (разделениефрагментов ДНК по размеру (длине) и форме. Силы электрического поля,прикладываемогокобразцам,заставляютфрагментыДНКмигрироватьчерез гель).5.
Экстрагирование возбудителя из геля, (если его концентрация оказываетсяменьше, чем 50 нг/мкл, то необходимо повторить шаги 2-5 до накоплениянеобходимого количества продукта).6. Секвенирование полученного возбудителя (определение аминокислотной илинуклеотидной последовательности ДНК или РНК. В результате секвенированияполучали формальное описание первичной структуры линейной макромолекулы ввиде последовательности мономеров в текстовом виде).437. Проведение биоинформатического анализа полученной последовательности впрограмме BLASTРисунок 1.
План работы с биоматериалом пациенток с СБМП/ИЦ.Биологическийматериал(моча пациенток )Посев наобогащенныепитательныесреды1. Рост флорычерез 5-14 суток.Выделениечистой культурымикроорганизмов2. ВыделениеДНК3. ПостановкаПЦР на ген 16SрРНКПосев настандартныепитательныесреды4. Выполнение электрофореза свозбудителем, полученным на ПЦР5.
Экстрагирование возбудителя из геля,(если его концентрация оказываетсяменьше, чем 50 нг/мкл, то необходимоповторить шаги 2-5 до накоплениянеобходимого количества продукта).6. Секвенирование полученноговозбудителя7. Проведение биоинформатическогоанализа полученной последовательности впрограмме BLAST.Нет ростафлорыКонтрольное бактериологическое исследование мочи проводилось после курсалечения через 6-8 и 14-18 месяцев.2.3Методика выполнения гипербарической оксигенации (ГБО) ифизиотерапии (ФТ (магнитотерапии на область мочевого пузыря)).Всемпациенткампроводилоськомплексноелечение,включающеепослеоперационный курс гипербарической оксигенации (ГБО) и физиотерапии44(ФТ) - магнитотерапии на область мочевого пузыря. Сеансы проводились толькопациенткам с СБМП/ИЦ, так как данные методики уже доказали своюэффективность в составе комплексного лечения пациенток с данным тяжелымзаболеванием.
Для исключения противопоказаний со стороны органов дыхания,всем пациенткам на догоспитальном этапе проводилась рентгенография органовгрудной клетки/флюорография. Также, перед началом сеансов ГБО, всепациентки были осмотрены терапевтом, гинекологом а при необходимости иоторинолярингологом. Сеансы ГБО назначались в послеоперационном периоде(1-е сутки), в отделении гипербарической оксигенации ГКБ им.
С.П.Боткина сиспользованием барокамеры БЛКС-303МК. Курс включал 7-10 сеансов по 60минут, в режиме изопрессии при рабочем давлении 1,8-2 АТА, проводимых 5 разв неделю.Противопоказаниями являлись:-наличие в анамнезе эпилепсии (или каких-либо других судорожных припадков)-наличие остаточных полостей (каверны, абсцессы и воздушные кисты) в легких-простуда, нарушение проходимости евстахиевых труб и каналов, соединяющихпридаточные пазухи носа с внешней средой (полипы и воспалительные процессыв носоглотке, среднем ухе, придаточных пазухах носа, аномалии развития и т.
п.)-клаустрофобия-тяжелые формы гипертонической болезни-наличие повышенной чувствительности к кислородуСеансы магнитотерапии на область мочевого пузыря также начинались впослеоперационном периоде и проводились с помощью приборов "Полюс-101" и"Ум-6", снабженных индукторами-соленоидами различного диаметра.Пациенткам на область мочевого пузыря устанавливали контактно или своздушным зазором 0,5 - 1,5 см один или два работающих индуктора.Продолжительность воздействия МП на одну область тела от 15 до 20 мин, курслечения 7-10 процедур.Противопоказаниями являлись:-злокачественные заболевания,45- сердечно-сосудистые заболевания в стадии декомпенсации,- лихорадочные состояния,- острые воспалительные заболевания,- наклонность к кровотечениям,- активный туберкулез легких,- наличие вживленных стимуляторов сердца2.4Методы статистической обработкиОбработкаполученныхколичественныхвеличинпроводиласьметодомвариационной статистики в программе Statistica for Windows 8.0:1.
Среднее значение (Мср.) по формуле:М ср=∑Мi/n,где Мi-величина индивидуального признака, n-число наблюдений;2. Стандартное отклонение (δ):δ = -∑di2 /n-1где di2 – квадрат разницы отдельного показателя от Мср. ;3. Ошибка среднего значения (m):m = δ /Nn,Значимость различия при сравнении выборок между отдельными группами,оценивалось по критерию Стьюдента (Т)Т=Mcp.1-Mcр.2/ m12 + m22,где Mcp.1-Mcр.2-значения средних величин каждой из выборок, m12 + m22,значения квадратов ошибок средних значений сравниваемых групп.46Критический уровень значимости статистической достоверности принималсяравным р ≤0,05 по таблице Стьюдента.47ГЛАВА 3.
РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИЧЕСКОГО И МОРФОЛОГИЧЕСКОГОИССЛЕДОВАНИЙ.3.1Анализ анамнестических и клинических данных больных СБМП/ИЦ.В группу наблюдения, обследования и лечения, из 41 больной СБМП/ИЦ быливключены пациентки, обратившиеся в клинику с ранее установленным диагнозом- 15 пациенток (36,6%), а также пациентки с клиническими проявлениямиСБМП/ИЦ, и характерными изменениями, выявленные при цистоскопии(Гуннеровское поражение и/или гломеруляции) - 26 пациенток (63,4%),проведённой в клинике урологии и хирургической андрологии РМАПО, на базеГКБ им.
С.П.Боткина. При отборе пациенток в группу исследования склиническими проявлениями и предположительным диагнозом СБМП/ИЦ, мыруководствовались рекомендациями Международного общества по изучениюСБМП/ИЦ (International Society for the Study of BPS).По результатам проведенного анализа данных анамнеза, было выявлено, чтосредняя продолжительность клинических проявлений СБМП/ИЦ к моментуобращения в клинику, составляла в среднем 6 лет (от 4 до 9 лет). Пациенткидлительное время наблюдались в различных учреждениях, у урологов,гинекологов, с разнообразными диагнозами: хронический рецидивирующийцистит, гиперактивный мочевой пузырь, и др. Вероятнее всего, ошибки вдиагностике были связаны с недооценкой жалоб пациенток на наличие болей принаполнении мочевого пузыря, не соблюдением рекомендаций по заполнениюдневников мочеиспусканий, не соблюдением методики выполнения цистоскопии(без анестезии, отсутствием выполнения биопсии).
Наиболее частые диагнозы, скоторыми наблюдались пациентки, представлены в таблице 3.48Таблица 3. Наиболее частые диагнозы, с которыми наблюдались больныеСБМП/ИЦ.ДиагнозКоличество пациентокХронический рецидивирующий цистит33 (80,5%)Гиперактивный мочевой пузырь3 (7,3%)Хронический уретрит5 (12,2 %)Также 22 (53,6%) пациентки из данной группы, наблюдались по поводу другихнеурологических(эндометриоз,заболеваний:аденомиоз,16вагиноз(39%)идр),поиповоду6(14,6гинекологических%)поповодугастроэнтерологических (СРК, дивертикулезтолстой и сигмовидной кишки).В результате несвоевременно установленного диагноза, пациентки получалинеадекватную терапию: антибактериальную, противоспалительную, инстилляцииразличных препаратов в мочевой пузырь, терапию м-холинолитиками), которая,соответственно, не облегчала симптоматику, нося лишь временный, несущественный эффект.Втораягруппасравнительногобыласформированаанализавкачествеанамнестическихконтрольной,данныхисцельюрезультатовбактериологического обследования В нее были включены 37 женщин страдающиеРИНМП.При первичном обращении, все пациентки, отобранные в группы исследования,предъявляли жалобы на: учащенное мочеиспускание малыми порциями,императивныt позывы к мочеиспусканию, боль (> 6 месяцев), преимущественно вобласти мочевого пузыря.
Некоторые пациентки отмечали наличие боли вобласти уретры, паховой области, а также в области влагалища и прямой кишки.У большинства пациенток отмечалось сочетание нескольких жалоб (таблица 4).49Таблица 4. Характеристика и распространенность жалоб пациенток сСБМП/ИЦ и РИНМП.Частота встречаемостисимптомов у больныхСБМП/ИЦ(n=41)Частота встречаемостисимптомов у больныхРИНМП(n=37)ПоллакурияИмперативные позывы41 ( 100 %)31 ( 75,6 %)28 (75,7%)10 (27 %)Ноктурия41 ( 100 %)3 ( 8,1 %)Боль, в:41 (100%)31 (83,8%)-мочевом пузыре (принаполнении)32 (78,1 %)2 ( 6,5 %)-уретре-паховой области-области влагалища-области прямой кишки4 ( 9,6 %)19 (61,3 %)2 ( 4,9 %)1 ( 2,5 %)2 ( 4,9 %)6 ( 19,3%)3 (9,7%)1 (3,2%)2 (4,9%)32 (86,5%)3 (7,3%)1 ( 2,7%)4 ( 9,7 %)1 (2,7%)СимптомыЖжение вмочеиспускательномканнеле, примочеиспускании, в концеакта мочеиспусканияПрерывистоемочеиспусканиеЧувство неполногоопорожнения мочевогопузыряИз представленной таблицы видно, что основными жалобами больных СБМП/ИЦбыли учащенное мочеиспускание, максимально достигающее 53 раз в сутки, атакже боль- у 41 (100%) пациенток, преимущественно в мочевом пузыре, при егонаполнении- у 32 (78,1 %) больных.
Все пациентки отмечали усиление боли помере наполнения мочевого пузыря и ощутимое уменьшение, или полное50купирование болевой симптоматики после акта мочеиспускания. Императивныепозывы отмечала 31 (75,6 %) пациентка, которые также были связаны свозникающей болью.Анализируя полученные данные, мы установили, чтонаиболее выраженная клиническая симптоматика (выраженность боли, частота иобъеммочеиспусканий),былавыявленаупациентоксГуннеровскимпоражением.При оценке дневников мочеиспускания и значений по шкале симптомов тазовойболи императивного учащенного мочеиспусканияL.Parsons (заполняемыепациентками в день госпитализации и до выполнения каких-либо манипуляций),при первичном обращении, было установлено, что средний эффективный объеммочевого пузыря составил 69,4 мл, средняя частота мочеиспусканий-31,6 мл,средний показатель по шкале Parsons составил - 23,8 балла (от 15 до 30) убольных СБМП/ИЦ.Отсутствие сексуальной жизни отмечали практически всепациентки, в том числе молодой и средней возрастных групп, отмечаявыраженные клинические проявления диспареунии.В группе больных РИНМП, основными жалобами также являлись учащенноемочеиспускание- у 28 (75,7%) пациенток, боль в уретре - у 19 (61,1%) пациенток,а боль в мочевом пузыре отмечали лишь 2 (6,5 %) больных.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
