ВКР: Использование технологии CRISPR/Cas9 для получения мутантов по генам транспортеров серотонина у Danio rerio
Описание
| Содержание | ||
| Список условных обозначений и сокращений | 4 | |
| Введение | 5 | |
| 1. Обзор литературы | 8 | |
| 1.1. | Danio rerio как модельный объект для генетических манипуляций | 8 |
| 1.2. | Система CRISPR/Cas9 как технология редактировании геномов | 11 |
| 1.3. | Транспортеры серотонина у человека и других млекопитающих | 17 |
| 1.4. | Транспортеры серотонина у Danio rerio | 19 |
| 2. Материалы и методы | 22 | |
| 2.1. | Праймеры | 22 |
| 2.2 Среды и растворы, использованные в работе | 22 | |
| 2.3. | Методы работы с бактериями и плазмидами | 23 |
| 2.3.1. Приготовление химически компетентных Escherichia coli | 23 | |
| 2.3.2. Трансформация бактерий Escherichia coli | 24 | |
| 2.3.3. Выделение плазмид из культур E. сoli | 24 | |
| 2.4. Создание плазмидных векторов для технологии CRISPR/Cas9 | 25 | |
| 2.4.1. Дизайн олигонуклеотидов для CRISPR/Cas9 | 25 | |
| 2.4.2. Конструирование плазмид для технологии CRISPR/Cas9 | 27 | |
| 2.4.3. Валидация векторов для CRISPR/Cas9 при помощи ПЦР и секвенирования | 28 | |
| 2.5. | Методы работы с Danio rerio | 29 |
| 2.5.1. Условия содержания рыб | 29 | |
| 2.5.2. Скрещивание D. rerio | 29 | |
| 2.5.3. Проведение микроинъекций | 29 | |
| 2.6. | Методы, использованные для генотипирования особей | 30 |
| 2.6.1. Получение образцов тканей (хвостовых плавников) и выделение из них | ||
| 2 | ||
| геномной ДНК | 30 | |
| 2.6.2. Генотипирование особей при помощи полимеразной цепной реакции | 30 | |
| 2.6.3. Полимеразная цепная реакция в реальном времени | 32 | |
| 2.6.4. Подготовка к секвенированию участков генов интереса | 32 | |
| 2.7. | Методы работы с РНК | 35 |
| 2.7.1. Транскрипция РНК-гидов in vitro | 35 | |
| 2.7.2. Денатурирующий электрофорез РНК в агарозном геле | 35 | |
| 3. Результаты | 37 | |
| 3.1. | Конструирование плазмид для технологии CRISPR/Cas9 | 37 |
| 3.2. | Микроинъекции плазмидной ДНК в икру Danio rerio | 42 |
| 3.3. | Генотипирование особей Danio rerio при помощи методов полимеразной | |
| цепной реакции и секвенирования ДНК | 43 | |
| 3.4. Работа с РНК | 47 | |
| Обсуждение | 49 | |
| Выводы | 53 | |
| Благодарности | 54 | |
| Список использованной литературы | 55 | |
Характеристики ВКР
Учебное заведение
МГИМОСеместр
Просмотров
1
Размер
1,6 Mb
Список файлов
Использование технологии CRISPR:Cas9 для получения мутантов по генам транспортеров серотонина у Danio rerio.doc
Tortuga
29 июня 2024 в 15:44
Комментарии
Нет комментариев
Стань первым, кто что-нибудь напишет!
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
