Диссертация (Диагностическое значение определения особенностей митохондриальной ДНК при энцефаломиопатиях у детей), страница 11

Однако при изъятии из статистического расчета 17пациентов с этими генотипами, достоверное различие в значениях обоих индексовсохраняется (рис. 3.7). Согласно критерию Манна-Уитни, достоверность различиядля обоих индексов составила p=0,002, согласно критерию Колмогорова-Смирновадля обоих индексов – р=0,022.Отдельно отметим, что средний возраст пациентов в контрольной группесоставил 42 года и 5 месяцев, в то время как в группе пациентов эта величина70равнялась 9 годам и 3 месяцам.

Хорошо известно, что помимо врожденныхмитохондриальных вариантов, которые встречаются у каждого четвертогоздорового ребенка, существуют генетические варианты накопления [24]. Этиварианты являются побочными продуктами окислительного фосфорилирования, апостепенное увеличение их числа в течение жизни – одна из получившихнаибольшее распространение теорий старения [38]. Таким образом, мы хотелиподчеркнуть значимость оценки общего состояния митохондриальной ДНК средипациентов с мтЭМП.Таблица 3.8.

Оценка индекса патогенности частых вариантов исследуемойвыборки пациентов C12562G и A10732T.Параметры и их оценка в баллахC12562G A10732TТрансверсия – 1 балл11Расположение в кодирующем регионе – 1 балл11Несинонимичная замена – 1 балл11Аллельная частота <0,2% - 1 балл11Sift: 0 – непатогенный, 1 - патогенный11PhD-SNP: 0 - непатогенный, 1 - патогенный01Panther: 0 - непатогенный, 1 - патогенный01I-mutant: 0 - непатогенный, 1 - патогенный11Polyphen: 0 - непатогенный, 1 - патогенный11Provean: 0 - непатогенный, 1 - патогенный01Консервативность локуса12Сведения о патогенности варианта00Индекс патогенности81271а)б)Рисунок 3.7.

Оценка в баллах: а) максимального и б) общего индексапатогенности для группы пациентов, не включая пациентов с вариантамиC12562G и A10732T (всего 41 человек) и группы здоровых людей.* - p<0,005 согласно критериям Манна-Уитни и Колмогорова-Смирнова.723.1.5. Зависимость клинической картины от гаплогруппы пациентаОдной из основных характеристик мтДНК является принадлежность кгаплогруппе. Однако низкий уровень представленности этнических групп,проживающих в России, в базах данных мтДНК является существеннымпрепятствием для проведения качественных исследований в этой области.

В связис этим, секвенирование полной последовательности митохондриального генома вбольших выборках здоровых людей и пациентов с различными нарушениямипредставляется необходимым фундаментальным шагом.Диагностическая же важность определения гаплогруппы пациентов также невызывает сомнений. Именно тот факт, что варианты C12562G и A10732Tвстречались у пациентов с неродственными гаплогруппами (табл.

3.9), позволилрассматривать их не как элементы неописанного ранее субклада, существующегона территории Российской Федерации, а как потенциальных участниковпатологического процесса при митохондриальных заболеваниях.При этом особое внимание следует уделить детальности определениягаплогруппы.преследующимДляисследований,целиустановлениянеотносящихсяновыхкпопуляционным,взаимосвязейагенотип-фенотип,требуется установление принадлежности к микрогаплогруппам третьего порядка(подобно представлению в таблице 3.9) [41].

Такого уровня детализации можнодобиться только при использовании технологий секвенирования в отличие оттрадиционных подходов ПЦР в реальном времени.Достоверных различий в частотных распределениях гаплогрупп междупациентами и здоровыми, а также между пациентами различного пола не быловыявлено. В связи с этим, полноправна оценка взаимосвязи индивидуальных группс фенотипическими признаками при изучаемой нозологической форме. Далеебудут рассмотрены особенности клинической картины пациента в зависимости отего гаплогруппы, которые мы выявили на основе исследованной выборке.73Таблица3.9.Гаплогрупповаяпринадлежностьпациентов-носителейвариантов C12562G и/или A10732T.ШифрпациентаГаплогруппа C12562GA10732T3C5a+4U5a+5U5a+7J2a+8U5b++10J1c++12T2a17D4j+20H2a+26H1b++27G2a++32C4b++34W1+36U5a38I1++39H++41R2b+++++743.1.5.1. Гаплогруппа HHVВ гаплогруппе HHV, которая включает подгруппы H и HV, достоверно режевыявлялся вариант C12562G, а достоверно чаще – вариант A10732T по сравнениюс иными макрогаплогруппами (рис.

3.8 и 3.9, а также табл. 3.10).Кроме того, у пациентов с данной гаплогруппой реже фиксировалосьповышенное значение аланинаминотрансферазы в крови, и чаще – нарушения вработе поджелудочной железы (табл. 3.10 и рис. 3.10).Таблица 3.10. Статистические параметры генотипов C12562G, A10732T,проявления нарушений поджелудочной железы и повышения АЛТ в группепациентов с гаплотипом HHV и в группе иных гаплотипов.Группа:0 – признакПараметротсутствует,В г/г HHV1- естьВ иныхр, Хи-группахквадратр, точныйкритерийФишерапризнак01924C12562G131202026A10732TНарушение12100417поджелудочнойжелезы11819Повышение01922АЛТ13140,0360,0280,0480,0580,0470,0240,040,07375а)б)Рисунок 3.8. Доля пациентов а) c гаплотипом C12562G в гаплогруппе HHV; б)гаплотипом C12562G в иных группах.а)б)Рисунок 3.9. Доля пациентов а) c гаплотипом A10732T в гаплогруппе HHV; б)гаплотипом A10732T в иных группах.76а)б)Рисунок 3.10.

Доля пациентов а) c повышенным уровнем АЛТ в крови вгаплогруппе HHV; б) c повышенным уровнем АЛТ в крови в иных группах.Рассматривая пациентов с подгруппой Н в отдельности, также удалосьобнаружить, что нарушения работы почек выявлялись у них достоверно реже(таблица 3.11).Таблица3.11.Статистическиепараметрыпроявлениянарушениймочевыделительной системы в группе пациентов с гаплотипом Н и в группе иныхгаплотипов.Группа:Параметр0 – норма,В г/г НВ иныхр, Хи-группахквадрат1- есть нарушениеНарушения0почек113критерийФишера170,0266р, точный220,067773.1.5.2. Гаплогруппа ТСредний возраст дебюта заболевания у пациентов с гаплогруппой Тсоставлял 6 месяцев, в то время как в остальной выборке в среднем дебютфиксировался в 2 года 5 месяцев.

Это различие является достоверным по критериюМанна-Уитни (p= 0,05; Z=-1,957).В гаплогруппе Т достоверно реже встречались пациенты с нарушениямифизического развития, а все 22 ребенка с нервно-мышечным симптомокомплексоми 28 детей с повышенным уровнем в крови ЛДГ принадлежали к другимгаплогруппам, что также является статистически значимым различием (табл. 3.12и рис. 3.11).Таблица3.12.Статистическиепараметрыпроявленийнарушенийфизического развития, нервно-мышечного симптомокомплекса и повышения ЛДГв группе пациентов с гаплотипом Т и в группе иных гаплотипов.Группа:Параметр0 – норма,1- естьВ г/г ТВ иныхр, Хи-группахквадратнарушениеНарушение04развития1140Нервно-мышечный053110220525Повышение ЛДГ10критерийФишера13физическогосимптомокомплекср, точный280,0090,0230,0270,0520,0240,05378а)б)Рисунок 3.11. Доля пациентов а) c нарушениями физического развития вгаплогруппе Т; б) c нарушениями физического развития в иных группах.3.1.5.3.

Гаплогруппа UДля гаплогруппы U характерной особенностью явилось отсутствиепациентов с диагностированной умственной отсталостью и достоверно меньшаядоля детей, страдающих мигренью (табл. 3.13).Таблица 3.13. Статистические параметры проявления умственной отсталостии мигрени в группе пациентов с гаплотипом U и в группе иных гаплотипов.Группа:Параметр0 – норма,В г/г U1- есть нарушениеВ иныхр, Хи-группахквадратУмственная01032отсталость10160643145Мигреньр, точныйкритерийФишера0,0320,0480,0190,039793.1.5.4. Гаплогруппа JУ пациентов с гаплогруппой J существенно отличались проявлениясимптомов со стороны сердечно-сосудистой (ССС) системы по сравнению сдругими группами (табл. 3.14 и рис.

3.12). Доля пациентов с тяжелыминарушениями ССС в данной группе была достоверно выше, впрочем, как и доляпациентов без нарушений этой системы вовсе. С другой стороны, умеренныенарушения ССС в данной группе также не выявлены.Доля пациентов с нарушениями дыхания в гаплогруппе J была достоверновыше по сравнению с пациентами других групп (табл. 3.14).Таблица 3.14. Статистические параметры проявления нарушений сердечнососудистой системы и дыхания в группе пациентов с гаплотипом J и в группе иныхгаплотипов.Группа:0 – признакотсутствует,ПараметрВ г/г J1 – есть признак,В иныхр, Хи-группахквадратр, точныйкритерийФишера2 – признак сильновыраженНарушения02101029системы2314Нарушения0243дыхания1сердечнососудистой3100,045-0,0350,06980а)б)Рисунок 3.12. Доля пациентов а) в состояних с различной степенью тяжести намомент обследования в гаплогруппе J; б) в состояних с различной степеньютяжести на момент обследования в иных группах.3.1.5.5.