Диссертация (Молекулярные и клеточные механизмы ультрафиолетового сшивания роговицы), страница 3

Для повышения безопасности корнеального ультрафиолетового сшиванияпредложенырастворырибофлавинаразличногосостава,чтопозволяетдифференцированно использовать их на роговицах разной толщины (более 450 мкм– рекомендуется Декстралинк, при 400-450 мкм – Риболинк). Ультрафиолетовоеоблучение в присутствии исследуемых растворов рибофлавина достоверноповышает прочностно-механические свойства роговицы.3.На величину абсорбции ультрафиолетового излучения роговицейэкспериментальных животных влияют физико-химические свойства растворовфотосенсибилизаторов, интрастромальное содержание рибофлавина, толщинароговой оболочки глаза и стабильность прекорнеальной пленки, образуемой послеинстилляций рибофлавинсодержащего средства.134.

УФ облучение роговицы и ее стандартное ультрафиолетовое сшиваниевызывают активацию процессов свободно-радикального окисления в тканях глаза,сопровождающихся повышенным образованием конечных продуктов перекисногоокисления липидов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой, интенсивностькоторых обусловлена сроком давности выполнения процедуры.5.Основныеморфологическиеизмененияроговицыпослеультрафиолетового сшивания с использованием рибофлавинсодержащих растворовхарактеризуются развитием отека стромы, при этом снижение плотностикератоцитовпроисходитбезповрежденияэндотелияспоследующимвосстановлением архитектоники оптической оболочки (90 сут).

Особенностиультраструктурнойтрансформациироговицысвязанысувеличениеммежфибриллярного пространства и диаметра коллагеновых фибрилл. Недостатокрибофлавина в строме в условиях УФ облучения приводит к достовернойпатоморфологической инволюции роговицы с потерей ее нативной структуры.6. Динамика содержания цитокинов после ультрафиолетового сшиванияпри кератоконусе характеризуется транзиторным ростом концентрации IL-1β,IFN-, TGF-1, -2 в слезной жидкости при неизменных значениях TNF-, чтоявляется иммунным ответом на деэпителизацию роговицы. Ранний срок послепроцедуры (1-3 сут) сопровождается снижением локального антиоксидантногостатуса и уровня супероксиддисмутазы. Ультрафиолетовое сшивание роговицы вприсутствиираствороврибофлавинаневызываетзначимыхсистемныхизменений концентрации цитокинов и антиоксидантной активности.Степень достоверности.

Экспериментальные исследования выполнены наживотных, полученных из питомника лабораторных животных ФГУП «НПО«Микроген» при достаточном объеме выборки. Состояние животных подтвержденосертификатами качества и здоровья, выданными поставщиком. Воспроизведениеэкспериментальныхмоделей,проведениебиохимических,биофизических,иммунологических, морфологических и электронномикроскопических исследованийосуществлялось на оборудовании, зарегистрированном в установленном порядке исертифицированном для данного вида работ.

Степень достоверности работыопределяется достаточным и репрезентативным объемом выборок исследований14животных и наблюдений пациентов. Применялись методы статистической обработки,полностью соответствующие поставленным задачам, полученные данные достоверныи аргументированы.Апробациярезультатовработы.Материалыисследованиябылипредставлены на научно-практических конференциях «Актуальные проблемыофтальмологии» (Уфа, 2009), «Невские горизонты» (Санкт-Петербург, 2012); I, III, IV,VI, VIII, IX международных конференциях по офтальмологии «ВОСТОК-ЗАПАД»(Уфа, 2010, 2012, 2013, 2015, 2017, 2018); VIII Всероссийской научной конференции«Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2013); XXXI, XXXII и XXXIVКонгрессах европейского общества катарактальных и рефракционных хирургов«ESCRS» (Амстердам, 2013; Лондон, 2014; Копенгаген, 2016); III, IV, V, VIКонгрессах европейского общества роговицы «EuCornea» (Милан, 2012; Амстердам,2013; Лондон, 2014; Барселона, 2015); Х Съезде офтальмологов России (Москва,2015); IV Международной междисциплинарной конференции «Современныепроблемы системной регуляции физиологических функций» (Москва, 2015);Международной конференции «Анатомия и Физиология» (Бирмингем, Англия, 2016);XVII научно-практической конференции с международным участием «Современныетехнологии катарактальной и рефракционной хирургии» (Москва, 2016); XXIII съездеРоссийского Физиологического общества им.

И.П. Павлова (Воронеж, 2017);совместной научной конференции научно-исследовательских отделений хирургиироговицы и хрусталика, витреоретинальной и лазерной хирургии, научнопроизводственного отдела, научно-образовательного отделения ГБУ «Уфимскийнаучно-исследовательский институт глазных болезней АН РБ», кафедр медицинскойфизики с курсом информатики, нормальной физиологии, патологической физиологиии центральной научно-исследовательской лаборатории ФГБОУ ВО «Башкирскийгосударственный медицинский университет» МЗ РФ (Уфа, 2018); научнопрактической конференции с международным участием «Роговица II. Топографияроговицы. Аберрации глаза» (Москва, 2018); Международной научной конференции«Актуальные проблемы офтальмологии», посвященной 95-летию акад.

З. Алиевой(Баку, 2018); Ассоциации исследований в области зрения и офтальмологии (Гонолулу,США, 2018).15Публикации. По материалам диссертации опубликовано 52 работы, в томчисле 18 статей в журналах, входящих в перечень, утверждённый ВАК приМинистерстве образования и науки РФ; получено 14 Патентов РФ на изобретенияи полезные модели.Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 280 страницахмашинописного текста, включает 33 таблицы, 71 рисунок, состоит из введения,обзора литературы, главы с описанием материала и методов исследования, 4-хглав результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов,практических рекомендаций, приложения и списка литературы.

Библиографиясодержит 451 источник российской (134) и зарубежной (317) литературы.16ГЛАВА 1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ1.1. Особенности структурной организации роговицы человекаОсновная функциональная роль роговицы глаза обеспечивается за счетсостояния структуры, составляющей ее основу – фибриллярного белка коллагена,призванного в равной степени поддерживать как опорные функции, так иоптические, сохраняя при этом эластичность, кривизну и прозрачность, непрепятствующие светопроведению и светопреломлению (Кошиц И.Н. и соавт.,2017).Роговица – передняя фиброзная оболочка глаза, у человека она несколькоэллипсоидной формы в диаметре примерно 11-12 мм, её толщина по центру 500-650мкм, на периферии – 650-800 мкм.

Следует отметить, что толщина роговицы внормальных условиях может изменяться в зависимости от обезвоживания илиестественных отеков (Ehlers N. et al., 2010). Традиционно считается, что роговаяоболочка состоит из пяти слоев (переднего эпителия, Боуменовой мембраны,соединительнотканной стромы, Десцеметовой мембраны и эндотелия). Однако,согласно последним исследованиям английских ученых во главе с проф. HarminderDua, опубликованным в 2013-2014 гг., человеческая роговица имеет шестой слой,названный слоем Дуа (Dua's layer), который расположен между стромой иДесцеметовой оболочкой.

Обнаруженный бесклеточный слой Дуа, по даннымэлектронной микроскопии, имеет толщину от 10 до 15 мкм, состоит из 5-8 пластинокпреимущественно коллагена I типа, волокна которого расположены в поперечном,продольном и косых направлениях (Dua H.S. et al., 2013, 2014).Нередко, еще одним слоем роговицы называют слезную пленку наповерхности эпителия, которая обладает защитными (бактерицидными) свойствамии выполняет определенную роль в обеспечении оптических свойств глаза.Установлено, что водный слой слезной пленки содержит до 0,1% органическихбелковых компонентов – лизоцим, иммуноглобулин А, муциновые гелеобразующиесубстанции и др.

По последним данным из СЖ выделено более 60 полипептидных17фракций, которые играют важную роль в поддержании гомеостаза окулярнойповерхности (Zhou L. et al., 2006).Многослойный эпителий, образованный 5-7 рядами клеток, имеет толщину 50мкм и состоит из 3 слоев – базального, супрабазального и чешуйчатого. Он обильноснабжен нервными окончаниями, за счет которых формируется роговичныйрефлекс. Плотность поверхностных эпителиальных клеток составляет примерно1200 на мм2 (Mustonen R.K.

et al., 1998).Стабильный цитоскелет эпителиальных клеток образуется за счет развитыхцитоплазматических структур (эндоплазматическая сеть, комплекс Гольджи, режемитохондрии).Самиклеткиудерживаютсядругсдругомпосредствоммногочисленных соединений – десмосом. Эпителиоциты дифференцируются изклеток базального слоя эпителия, который располагается на тонкой базальноймембране и участвует в межклеточных связях посредством полудесмосом(гемидесмосом), состоящихиз коллагена VII типа.Последние призваныобеспечивать устойчивый контакт, в том числе, и с подлежащей стромой.

Базальнаямембрана эпителия роговицы состоит из двух слоев (25 и 50 нм соответственно),представленных в основном коллагеном IV типа и разнообразными внеклеточнымимолекулами, в частности, ламининами, протеогликанами и связывающими белкаминидогенами (Torricelli A.M. et al., 2013).За счет активного миотического деления кубических клеток базального слояпроисходит синтез компонентов базальной мембраны (коллаген IV типа, ламинин,фибронектин) и интенсивное обновление эпителиоцитов.

В случае поврежденияполное восстановление эпителия роговицы глаза происходит в сроки от 3 до 7 дней(Millin J.A. et al., 1986). При этом, пик пролиферативной активности наступаетпримерно через 24-48 ч после нарушения целостности эпителиального слоя. Периодрегенерации базальной мембраны при её повреждении составляет 6-8 недель(Синельщикова И.В. и соавт., 2013). Как и другие ткани, базальные мембраны вносятсвой вклад в поддержание интраокулярного гомеостаза, выполняя, в частности,барьерную функцию, в том числе препятствуя проникновению цитокинов, таких какTGFβ-1, из эпителия к строме (Torricelli A.M.