Диссертация (Связь мутаций митохондриального генома с формированием атеросклеротических поражений артериальной стенки)
Описание файла
Файл "Диссертация" внутри архива находится в папке "Связь мутаций митохондриального генома с формированием атеросклеротических поражений артериальной стенки". PDF-файл из архива "Связь мутаций митохондриального генома с формированием атеросклеротических поражений артериальной стенки", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "биология" из Аспирантура и докторантура, которые можно найти в файловом архиве РНИМУ им. Пирогова. Не смотря на прямую связь этого архива с РНИМУ им. Пирогова, его также можно найти и в других разделах. , а ещё этот архив представляет собой докторскую диссертацию, поэтому ещё представлен в разделе всех диссертаций на соискание учёной степени доктора биологических наук.
Просмотр PDF-файла онлайн
Текст из PDF
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение«Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии»На правах рукописиСАЗОНОВА МАРГАРИТА АЛЕКСАНДРОВНАСВЯЗЬ МУТАЦИЙ МИТОХОНДРИАЛЬНОГО ГЕНОМАС ФОРМИРОВАНИЕМ АТЕРОСКЛЕРОТИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИЙАРТЕРИАЛЬНОЙ СТЕНКИ03.02.07 – генетикадиссертация на соискание ученой степенидоктора биологических наукНаучный консультантдоктор биологическихнаук, профессорА.Н.
ОреховМосква - 2018ОГЛАВЛЕНИЕВведение………………………………………………………………………. 8Актуальность проблемы……………………………………………………… 8Цель исследования……………………………………………………………11Задачи исследования………………………………………………………….11Научная новизна………………………………………………………………12Теоретическая значимость…………………………………………………… 13Практическая значимость……………………………………………………. 13Основные положения диссертации, выносимые на защиту………………..
14Личный вклад автора……………………………………………………......... 15Публикации…………………………………………………………………… 16Внедрение результатов исследования в практику………………………….. 16Апробация диссертации……………………………………………………… 17Структура и объем диссертации……………………………………………... 18Глава 1. Обзор литературы............................................................................ 181.1 Медицинские и социальные аспекты атеросклероза………………........
191.2 Патогенез атеросклероза………………………….……………………... 211.2.1 Общие сведения об атеросклерозе…………………………………….. 211.2.2 Строение стенки нормальной артерии………………………………... 231.2.3 Воззрения на проблему атеросклероза……………………………….. 251.2.4 Гипотезы патогенеза атеросклероза…………………………………... 261.2.4.1 Роль эндотелия в атеросклерозе…………………………………….. 321.2.4.2 Роль моноцитов-макрофагов в возникновенииатеросклеротических поражений…………………………………………….
341.2.4.3 Вовлеченность гладкомышечных клеток в атерогенез……………. 351.3 Факторы риска атерогенеза…….………………………………………... 371.3.1 Факторы среды ….................................................................................... 371.3.1.1 Стресс…………………………………………………………………. 3721.3.1.2 Факторы экологии………………….………………………………… 381.3.2 Факторы поведения…………………………………………………….381.3.2.1 Курение, как фактор риска...……………………………………….... 381.3.2.2 Малоподвижный образ жизни............................................................. 401.3.2.3 Факторы питания……………………………………………………..
401.3.3 Факторы биохимии…………………………………………………….. 421.3.3.1 Избыточная масса тела……................................................................421.3.3.2 Сахарный диабет, как фактор риска………………………………...431.3.3.3 Дефекты обмена липидов……………………………………………. 441.3.3.4 Факторы, вызывающие дефекты обмена липидов………………….
451.3.4 Независимые факторы риска атерогенеза............................................. 461.3.4.1 Гендерный фактор ……………...........................................................461.3.4.2 Возрастной фактор……………………………………………...........461.3.5 Молекулярно-генетические дефекты…………………………………. 471.3.5.1 Укорочение теломеров………………………………………………. 471.3.5.2 Повреждения ядерного генома……………………………………… 491.3.5.3 Патологии, связанные с митохондриальными дефектами………… 731.3.5.3.1 Симптомы митохондриальных цитопатий…..................................751.3.5.3.2 Характеристика митохондриальных мутаций………….................
761.3.5.3.2.1 Обширные делеции и дупликации ……………………………... 771.3.5.3.2.2 Однонуклеотидные замены, инсерции или делеции…………... 781.3.5.3.2.3 Гаплотипы митохондриального генома………………………... 911.3.5.3.2.4 Гаплогруппы митохондриальной ДНК………………………… 921.3.5.3.2.5 Данные литературы, посвященные методам исследованиямтДНК………………………………………………………………………….
931.3.5.3.2.6 Мутации мтДНК, атеросклероз и старение организма……….. 93Глава 2. Материалы и методы……………………….................................. 972.1 Исследуемые мутации………………………………................................ 972.2 Материалы……………………………………...………………………… 9932.3 Методы………………………….………………………………………… 1022.3.1 Подготовка образцов интимы аорты для анализа................................. 1022.3.1.1 Пробоподготовка участков интимы аорты для электронномикроскопического исследования…………………………………………...1022.3.1.2 Пробоподготовка образцов интимы аорты для выделения ДНК…..
1022.3.2 Ультрасонографическое исследование……………………………….. 1032.3.3 Получение и подготовка образцов крови для анализа………………. 1052.3.4 Выделение ДНК………………………………………………………... 1052.3.5 Гель/электрофорез образцов ДНК и ПЦР-фрагментов………………1072.3.6 ПЦР……………………………………………………………………… 1082.3.7 Пиросиквенс…………………………………………………................. 1182.3.7.1 Методика пиросеквенирования........................................................... 1182.3.7.2 Пробоподготовка для пиросиквенса.……………………………….. 1212.3.7.3 Оборудование для пиросеквенирования………................................1242.3.8 Определение митохондриальных гаплогрупп......................................1262.3.9 Трансмиссионная электронная микроскопия.......................................1262.3.10 Статистическая обработка данных.......................................................
127Глава 3. Результаты........................................................................................ 1283.1 Сравнительный электронно-микроскопический анализ митохондрийклеток интимы в нормальных участках сосудистой стенки иатеросклеротических поражениях.................................................................... 1283.2 Разработка метода количественной оценки мутантного аллелямитохондриального генома............................................................................... 1313.2.1 Способы определения уровня гетероплазмии………………………. 1323.2.2 Общая формула для подсчета процента гетероплазмии мутациймитохондриального генома...............................................................................
1433.2.2.1 Общая формула..................................................................................... 1433.2.2.2 Пример расчета процента гетероплазмии мутации m.1555A>Gмитохондриального генома по общей формуле.............................................14443.2.3 Примеры гистограмм исследованных мутаций и уровнягетероплазмии, определенного по пирограммам ПЦР-фрагментовобразцов ДНК..................................................................................................... 1453.2.3.1 Для мутации m.3336T>C......................................................................
1453.2.3.2 Для мутации m.5178C>A...................................................................... 1473.2.3.3 Для m.15059G>A................................................................................... 1483.2.4 Оценка воспроизводимости метода измерения уровнягетероплазмии.................................................................................................... 1483.3 Исследование интимы аорты человека с помощью методаколичественной оценки мутантного аллеля митохондриального генома… 1513.3.1 Цель исследования интимы аорт индивидов........................................1513.3.2 Детекция уровня гетероплазмии 42 мутаций митохондриальногогенома в липофиброзных бляшках и нормальной интиме аорт…………… 1533.4 Теоретическое обоснование дальнейших исследований интимыартерий................................................................................................................
1703.5 Анализ уровня гетероплазмии в гомогенатах мутаций мтДНКнормальной и пораженной атеросклерозом интимы аорт............................1723.6 Анализ уровня гетероплазмии мутаций мтДНК в участкахморфологически картированной стенки аорт................................................. 1753.6.1 Морфологическое и мутационное картирование аорт......................... 1753.6.2 Анализ 11 мутаций митохондриального генома в морфологическикартированных аортах………………………………………………………...
1803.6.3 Совокупная мутационная нагрузка 11 мутаций в морфологическикартированных аортах....................................................................................... 1863.7 Преобладающие мутации в атеросклеротических поражениях аорт…1893.8 Анализ уровня гетероплазмии в клетках крови.......................................
1903.8.1 Принцип исследования атеросклеротических поражений интимысонных артерий.................................................................................................. 1913.8.1.1 Оценка размера атеросклеротических бляшек сонных артерий …. 19153.8.1.2 Оценка толщины интимо-медиального слоя сонных артерий……. 1913.8.1.3 Демографические характеристики участников исследования……..
1943.8.2 Ассоциация уровня гетероплазмии мутаций мтДНК с возрастом.....1963.8.3 Ассоциация мутаций митохондриального генома сатеросклеротическими бляшками сонных артерий........................................ 1973.8.3.1 Анализ 11 мутаций................................................................................ 1973.8.3.2 Уровень гетероплазмии мутации m.13513G>A, связанный сотсутствием АСБ СА…………………………………………………………. 1993.8.3.3 Совокупная мутационная нагрузка при атеросклеротическихбляшках в сонных артериях.............................................................................. 2003.8.3.3.1 Логистическая регрессия................................................................... 2003.8.3.3.2 ROC-анализ.........................................................................................
2023.8.4 Ассоциация мутаций мтДНК с утолщением интимо-медиальногослоя сонных артерий.......................................................................................... 2043.8.4.1 Анализ 11 мутаций митохондриального генома................................ 2043.8.4.2 Совокупная мутационная нагрузка при утолщении интимомедиального слоя сонных артерий…………………………………………... 2053.8.4.2.1 Логистическая регрессия...................................................................
2053.8.4.2.2 ROC-анализ......................................................................................... 2073.8.5 Генодиагностика атеросклероза............................................................. 2093.8.5.1 Пороговое значение процента гетероплазмии отдельныхмутаций, ассоциированное с образованием атеросклеротических бляшекв сонных артериях.............................................................................................. 2093.8.5.2 Пороговое значение процента гетероплазмии отдельныхмутаций, ассоциированное с утолщением интимо-медиального слоясонных артерий..................................................................................................
